Зонирование

Художники-оформители не советуют поддаваться веяниям моды и копировать дизайнерские идеи без учета габаритов, расположения и других нюансов. Перед началом планировки и расстановки мебели продумывают каждую деталь.

Есть несколько простых правил, которых советуют придерживаться мастера:

• Пусть в комнате будет естественного освещения. Для этого сносят лишние стены (кроме несущих).
• Если комнаты в квартире небольшие (12 кв м или 16 кв м), планировка кухни, совмещенной со столовой, станет правильным решением.
• Если вентиляционная система спланирована неправильным образом, запах еды будет распространяться в квартире.

Перегородки

Интерьер кухни и гостиной начинают продумывать со стыковки двух зон.Вот некоторые из способов и предметов, которые разграничивают пространство:установка барной стойки;кухонный остров;большой стол;монтаж невысокой перегородки.Дизайнеры советуют устанавливать широкую стойку, поскольку за ней можно будет сидеть, как за обычным столом, а высокие стулья вполне подойдут для всей семьи.

Однако в комнатах небольшого размера (16 кв м) устанавливают узкие стойки. Кухонные острова удобны в использовании, однако подходят только для больших кухонь-столовых (25 кв м или 30 кв м). Капитальные невысокие перегородки ставят только если заранее решено, для чего их будут использовать (к примеру, как подставку под телевизор).

Отделка

Если в кухне, совмещенной с гостиной, будет одинаковое напольное покрытие, то нет особых правил для проведения работ. При комбинировании разных материалов заранее учитывают, где они будут стыковаться.

Например, ламинатное покрытие образует некрасивые стыки с плиткой. Главное, чтобы пол был ровным без изогнутых состыковок, поскольку они будут заметны.

Кухонные шкафчики, закрепленные на стенах, должны достигать потолков. В некоторых случаях мастера «опускают» потолок гипсокартоном.

Предметы мебели

Несколько примеров меблировки кухни, объединенной с гостиной:

1. 1. Диван. Он становится предметом, который зонирует пространство. Диван ставят спинкой к тому месту, где готовят еду. В небольшие комнаты (менее 20 кв м) ставят уголок, который располагают у стены, установленной перпендикулярно или параллельно от кухни.
2. 2. Гарнитур. По мнению дизайнеров, минималистичные модели без вычурных деталей смотрятся современно. Сервиз, вазы или бокалы ставят на открытой полке. Для них можно купить модную витрину. Мебель ставят возле стены. Если пространство большое (20 кв м, 25 кв м или 30 кв м), то в центральной части можно установить остров, в котором есть и отделы для кухонных приборов.
3. 3. Комплект мебели. Стиль должен сочетаться с оформлением обеих комнат. В малогабаритных помещениях хорошо смотрится компактный столик и стулья, сделанные в из прозрачного материала или окрашенные в светлые цвета. В интерьер гостиной можно поставить стол с круглой столешницей. В просторных помещениях комплект устанавливают возле стенки или в центральной части. Здесь будет хорошо смотреться вытянутый обеденный стол прямоугольной формы.

Многоуровневый пол

Для зонирования пространства мастера монтируют полы на разном уровне. Они советуют устанавливать подиум для разграничения кухни и столовой. Этот вариант считается одним из самых практичных, поскольку, кроме прочего, у хозяев дополнительное свободное место, где можно что-нибудь прятать.Для этого удобно использовать коробки или ящики. Хорошо будут выглядеть плетеные корзиночки. Но такое пространство может оставаться свободным.

Для подиумов подбирают надежные материалы, которые могут выдержать большие нагрузки. Обычно строители делают деревянные или металлически подиумы.

Однако такую конструкцию не стоит делать, если в семье есть маленькие дети, так как подиум может стать для него препятствием. Кроме того, можно использовать различные покрытия для пола.

Они будут зонировать пространство между гостиной с кухней и защитят подиум от повреждений. К пример, в кухонной зоне укладывают плитку, в столовой — ламинатное покрытие. Главное подобрать цвета и фактуры, правильно сочетать отделку.

Стили

Есть много актуальных направлений и дизайнерских идей. Кухня гостиная в современном стиле выглядит просто и минималистично.

При этом необязательно строго придерживаться какого-то стиля, можно взять за основу его основную идею и грамотно обыграть ее аксессуарами и другими деталями.

Скандинавский

Этот стиль вошел в моду несколько лет назад, но до сих пор не теряет своей актуальности. Его практичность и европейская элегантность хорошо подходит для гостиной в городской квартире или доме. Можно добавлять яркие акценты, например, текстиль разных оттенков.Основа для скандинавского стиля – отделка белого и серого цвета, деревянные детали. Чтобы украсить пространство подойдут розовые, голубые или охристые элементы.

Лофт

В этом году стиль остается востребованным. Его часто используют для того, чтобы обустроить кухни, совмещенные с гостиной. Такое объединение дает больше свободного места, что только подчеркнет все детали лофта.

Сегодня такое определение, как «классический стиль», дизайнеры применяют все реже. Лофтом – любой дизайн интерьера, в котором не скрыты, а подчеркнуты разные технические элементы.

Например, стилисты обыгрывают кладку из кирпичей, провода или бетонные стены. На фотографиях хорошо показано, как удачно это может выглядеть гостиной, которая объединена с кухней.

Для лофта подбирают шероховатые и неоднородные поверхности, грубые материалы. В квартирах, оформленных в таком стиле, устанавливают настенные светильники. При этом свет направляют вдоль стенок.

За счет этого тени падают так, что неравномерные поверхности выглядят объемными. Первое время к лофт относились с опаской, но он быстро стал популярным. Дизайнеры не скрывают материалы для отделки и даже их подделывают. Чтобы имитировать бетонную поверхность и подтеки, используют декоративную штукатурку.

Минимализм

Минимализм станет хорошей основой для другого современного дизайна в гостиной, совмещенной с кухней. При этом в комнатах поддерживают идеальный порядок, прячут лишние вещи. Чтобы выдержать минимализм в кухне, понадобятся шкафы и ящики, в которые можно поставить посуду и другую кухонную утварь.

Неоклассика

Даже в популярной музыке есть отголоски старинных мотивов. То же можно сказать и о дизайне, в котором классические детали обрамляют в модное оформление.

Для этого стиля характерны симметричные линии, зеркала в рамах, арочные проемы, античные акценты. Все это дополнено модными отделочными материалами и аксессуарами. В неоклассике сочетаются изящные современные детали и традиционные сочетания.

Прованс

Название этого направления пошло от региона на юге Франции. Даже маленькая кухня гостиная, оформители которой вдохновились французской эстетикой, наполнится теплотой и уютом.

Главное, чтобы в ней было много дневного освещения, текстиля с романтичными принтами, цветочных орнаментов. Столовая в стиле «прованс» выдержана в пастельных оттенках. Предметы мебели могут быть винтажными или искусственно состаренными. Однотонные стены будут контрастировать со шторами в крупную клетку.

Дверцу в гарнитуре кухонной зоны иногда заменяют занавесками, сделанными из того же материала, что и скатерть. Хорошим дополнением станут вазочки и фигурки, глиняные горшки, детали из кованого металла и ленты.

Сочетания цветов

Стилисты советуют учесть такие нюансы:

• направление в интерьере;
• сочетание оттенков;
• освещенность.

Гораздо проще выбрать палитру, если стиль для кухни с гостиной ужу подобран. Например, для неоклассики и прованса характерны свои сочетания. В классическом интерьере дизайнеры сочетают пастельную гамму, бледные цвета, которые слегка разбавлены темными оттенками.

Во французских деревенских домиках часто можно увидеть нежно-голубые, розовые, фисташковые цвета. Ар-деко оформители составляют из предметов и отделочных материалов черного и белого, иногда — бежевого и коричневого или серебристого и черного цветов. Главное выбрать оттенок для стен. Белый станет универсальным, он расширит пространство, а позднее можно закрасить их любой краской.

Однако в зоне для приготовления пищи белизна перестает выглядеть свежо.Более практичными будут бежевые или серые оттенки. Этот фон подчеркнет другие цвета. В монохромном интерьере дизайнеры советую клеить обои необычного цвета или с фотопринтом.

Водостойкие поверхности легко моются, поэтому советуют моющиеся обои. Расцветка мебели перекликается с деталями и аксессуарами, будь то подушки для дивана, шторы или другие предметы.

Другие советы

Гостиная с кухней может быть совмещена и декорирована с разными недочетами. Важно просчитать и предвидеть все заранее.Оформители и мастера делятся советами, которые помогут избежать проблем при ремонте и обустройстве:

• О того, насколько детально будет составлен проект, зависит результат. Как ни странно, стоит учесть рост близких и родных. Также советуют просчитать примерное количество возможных гостей.
• Избавиться от запаха пищи можно, если установить сильную вытяжку или систему вентиляции. Небольшие модели больше подходят хозяйкам, которые мало готовят.
• Если в гостиной планируется спальное место, то важно, чтобы звон приборов и другой кухонной утвари не был слышен. Бесшумные посудомоечные машины и прочая техника придутся кстати.

Кроме того, можно установить раздвижную дверь и поставить перегородку со звукоизоляцией. Если есть чувствительность к ультрафиолету, хозяева вешают плотные занавеси из светонепроницаемой ткани.

Если бытовые приборы не подходят к направлению интерьера, их прячут за мебелью или убирают в кухонные шкафчики.

При установке светильников и ламп руководствуются несколькими критериями. Важно, чтобы свет равномерно падать на все пространство. Особенно яркое освещение предпочтительно в кухонной зоне и там, где установлен обеденный стол. В гостиной дизайнеры создают приглушенную атмосферу, используя настенные светильники и настольные лампы. Многоуровневые натяжные потолки со светодиодной лентой тоже хорошо смотрятся в этой комнате.

Влагостойкие отделочные материалы более долговечны, их легко мыть. Таким образом, они долго сохраняют свой внешний вид.

Кухня, совмещенная с гостиной, сочетает в себе:

• личные вкусы хозяев;
• надежные материалы для отделки;
• актуальные дизайнерские идеи;
• удобство;
• тенденции. Лучшие фото дизайна кухни гостиной

Декоративная клетка в интерьере. 15 идей декора

Декоративная клетка поможет создать дух прованса в интерьере. Как правило белые или окрашенные с эффектом состаривания декоративные клетки можно использовать как основу для цветочной композиции, декоративный подсвечник, место хранения любимых книг или почтовой корреспонденции, место для обитания суккулентов, люстру или ночник на прикроватной тумбочке, место для хранения антикварных вещиц или бижутерии и многое другое.

Посмотрите 15 красивых идей как может быть использована декоративная клетка в интерьере.

Клетка, как своеобразное кашпо-плантатор для суккулентов или других растений.

Клетка — подвесная или настольная, как оригинальная полка-шкатулка для хранения различных предметов.

Клетка -подсвечник создаст в вашем доме атмосферу уюта и романтики.

Необычный вариант использования клетки в сервировке стола.

Еще один вариант создания клетки-подсвечника в виде светящегося домика на прикроватной тумбочке.

Отличный вариант для украшения свадебной церемонии или другого торжественного мероприятия.

А эта идея для ванной комнаты — хранение полотенец и банных принадлежностей.

Вам кажется это хлам? Нет, это художественная инсталляция!)

В клетку можно дополнить предметами декора, сделав ее своеобразным арт-обектом.

Подходим к ожидаемому: клетки — птицам! Интересный вариант сочетания с пышной зеленью, и в итоге получился домашний оазис.

Купить декоративную клетку можно во многих Интернет-магазинах товаров для дома, а как ее использовать в интерьере решать вам, основываясь на наших идеях или собственной фантазии.

Смотрите также видео, как сделать декоративную клетку своими руками и как украсить интерьер при помощи декоративной клетки:

Купить такую клетку можно на Алиэкспресс:

Больше вариантов покупки клетки на Aliexpress можно найти на Аликспресс-обзор по этой ссылке.

❤ СОХРАНИТЕ ИДЕИ,

способы размещения, оформления, советы, как сделать её своими руками

Насколько бы скрупулезно ни был продуман стиль вашего интерьера, он не будет выглядеть наполненным и завершенным без соответствующих деталей, а нетривиальный подход в их выборе сделает пространство настоящим авторским произведением искусства. Именно оригинальная декоративная клетка в интерьере может стать особенностью вашей комнаты и изысканным дополнением в оформлении пространства.

Использование и размещение декоративной клетки в интерьере

Слыша упоминание о птичьей клетке для декора абсолютное большинство представляет себе только одно предназначение этому предмету — домик для птички.

Действительно, изначально клетка была создана для перевозки пернатых. Она изготавливалась из дерева и служила вольером для содержания живых птиц в домах.

Живая птичка в клетке как вариант украшения вольера

Со временем и её внешний вид и целевое использование стало не столько атрибутом разведения птичек, сколько декоративным элементом, способным поддержать определенную стилистику и настроение интерьера. Этот элемент декора стал интересной и необычной деталью пространства.

Совет! Для того, чтобы украсить комнату птичьей клеткой, не обязательно заводить домашнего питомца. Использование клетки с декоративной фигурки птички поможет создать то самое ощущение вечной весны и жизни, только без кропотливого ухода за живым существом.

Небольшие фигурки птичек на клетках создадут ощущение легкости

Миниатюрная птичка на клетке это всегда мило

Очень популярно размещение в декоративных клетках домашних растений или композиций из живых цветов. Это действительно создает оригинальный внешний вид такому привычному украшению пространства.

Цветы в клетке это красиво и оригинально

Цветы в клетке это красиво и оригинально

В зависимости от целевого назначения декоративную птичью клетку возможно разместить в различных комнатах жилого пространства.

• Если вы поклонник цветов и их разведение доставляет вам удовольствие, оригинальная декоративная клетка цветник может занять свое место, как на небольшом подоконнике, так и на просторном цветочном балконе.

Домашнее растение в клетке тоже смотрится очень уместно

Цветник в клетке украсит ваш балкон, сад или дом

• Клетка декоративная, дополненная расположенными внутри нее свечами или стилизованная под торшер, отлично впишется в уют гостиной комнаты. Поставьте её на придиванной тумбочке или настенной полке.

Клетки-подсвечники станут уютной деталью пространства

Декоративная клетка в виде торшера оригинальный источник света

• Оформление клетки часами — оригинальная и простая идея для реализации.

Птичья клетка с часами это вариант украшения самых обычных вещей

• Тонкое благоухание любимого аромата сухоцветов наполнит вашу спальню, а изысканная клетка дополнит интерьер, если наполнить её травами и расположить в столь личном пространстве квартиры.

Декоративная клетка с сухоцветами украсит любое помещение вашего дома

• В кухонной зоне птичья клетка декоративная может стать оформлением светильников над столом, а также украсить цветочную композицию, подачу блюд или выступать местом для хранения кухонной утвари и винных бутылок.

Клетки подвесные на кухне это оригинальное украшение обеденной зоны

Десертом в клетке можно удивить своих гостей

• В прихожей вполне уместно в декоративную клетку, помимо ключей, складывать, например, корреспонденцию. Возможно использовать её и как подставку под зонты или обувные аксессуары. Вписать в интерьер крючки с изображением клетки.

Птичьи клетки в прихожей могут быть функциональной деталью помещения

Варианты оформления декоративной птичьей клетки

Разнообразие такого элемента, как декоративная птичья клетка поражает. 

Круглые и квадратные, клетка-дворец или миниатюрная клетка-подсвечник, клетки цветники, клетки полки, подставки для десерта или аксессуаров, металлические клетки из прутьев, деревянные — из круглого бамбука или палочек, кованые клетки, искусственно состаренные, выбеленные или цветные, богато украшенные бусинами, бабочками, фигурками птиц. Выбор только за вами и вашей фантазией.

Вариантов оформления и применения такого элемента декора несчитанное количество:

• разместив в птичьей клетке большого размера, например, книги, вы можете создать эксклюзивного внешнего вида книжный шкаф.

Книги в клетке это самостоятельная деталь стиля

Полки и стеллажи в виде клеток украсят помещение

• дополнив декоративную клетку свечами или гирляндой, вы создадите уникальный источник света.

Декоративные клетки с гирляндами всегда уютный источник света

• из декора в форме клетки получаются отличные стенды для фотографий или ежедневных записок-напоминаний.
• часть клетки, расположенная на стене, может стать оригинальной полочкой для мелочей, ключницей, оформлением произведений изобразительного искусства или зеркала.

Стенд в виде клетки

Клетки полочки

Клетка стеллаж

• птичья клетка может стать хранилищем для ваших ювелирных украшений.
• подача десертов в такой декоративной клетке не оставит равнодушным ваших гостей.
• поместите в декоративную клетку новогоднюю атрибутику и авторское праздничное украшение готово.

Декоративная клетка с шишками и гирляндами создаст настроение новогодних праздников

Новогодняя птичья клетка может стать самым ярким и необычным украшением.

• возможно оформление предметов мебели птичьими клетками.

Декоративная клетка кресло бесподобный и оригинальный предмет мебели

Как выбрать стиль для маленькой декоративной клетки

При наличии такого огромного количества вариантов не сложно растеряться. Какая же клетка подойдет именно вам?

Всё зависит от общей стилистической направленности вашего помещения. 

• Если вы поклонник обильных кружев, цветов, растений, фоторамок и иных элементов декора, то смело делайте выбор в пользу романтического оформления. Белая, цветная или искусственно состаренная клетка, дополненная аксессуарами, уже украшающими ваш дом, создаст только дополнительный акцент в общем облике комнаты.
• Если вы придерживаетесь минимализма в обстановке жилого пространства, то кованая или выбеленная клетка четких контуров и отсутствием декора на ней, подчеркнет стиль и изысканность хозяина квартиры.
• Декоративная клетка дворец, клетка с наличием декоративной цепочки или клетка подсвечник придутся по вкусу любителям бессменной классики.

Цветы в декоративной клетке придадут настроению немного романтики

Декор птичьей клетки в стиле прованс

Чаще всего клетку используют в качестве декора в стиле прованс. Это обусловлено тем, что именно это направление наиболее активно украшается цветами, растениями и птицами.  

При оформлении такого интерьера сложно переборщить с элементами декора, потому белые прутья птичьей клетки будут вполне уместны в окружении иных особенностей стиля.

Клетка в стиле прованс отличное дополнение интерьера и оригинальная деталь

Оформление клетки цветами и травами

Очень распространено оформление птичьего домика букетами живых или цветов ручной работы. Такой элемент декора способен украсить собой совершенно любое пространство: гостиная, кухня, спальня, детская или даже ванная комната.

Совет! Поместите внутрь клетки композицию из живых цветов, домашних растений или же трав и сухоцветов и можете не сомневаться в беспроигрышности такого элемента декора в любом уголке квартиры.

Клетки украшенные цветами придадут свежести и весны любому помещению

Эффект старины в птичьей клетке

Очень популярно искусственный эффект старины на различных дизайнерских элементах, используемых при оформлении пространства. Эта мода коснулась, в том числе, и декоративных клеток.

Интересно! Если клетка декоративная не является действительно произведением труда умельцев давно минувших дней, то такой эффект можно создать самостоятельно при помощи мелкой наждачной бумаги и необходимого цвета краски.

Легкий налет вечности создаст впечатление раритета и подчеркнет особую роль этого аксессуара в декорации помещения.

Клетки украшенные цветами придадут свежести и весны любому помещению

Клетка-подсвечник

Наравне с оформлением и дополнением декоративных клеток цветами, очень популярно использование этого аксессуара в качестве подсвечника.

Для изготовления клетки нет никаких ограничений в ваших задумках: свечи, гирлянды, замещение абажура каркасом клетки либо использование её в качестве основания для торшера.

Клетка подсвечник это романтика и украшение вечера

Деревянная клетка

На смену дереву при производстве птичьих клеток давно пришел металл. Оно и понятно, если использовать её по назначению. Металл прочнее, проще поддается уборке и гораздо долговечнее. Однако применение клеток в качестве декорации помещений свело на нет такие доводы.

Дерево придает изделию особый шарм.

Деревянная птичья клетка может быть создана из бамбука или палочек, реек или досок

Клетка декоративная своими руками

Если вы человек творческий, то вместо приобретения готового элемента декора, вполне можете изготовить декоративную птичью клетку самостоятельно.

На заметку:

• Деревянную клетку можно сделать из лозы, палочек, деревянных реек или досок. Отличным декором послужат деревянные бусины или декоративные вырубные элементы.
• Строение клетки металлической возможно из шампуров, прутьев, подноса, цепочки и крючков. 
• Можно сделать клетку даже из бумаги. Вам понадобится гофрированная основа, цветы ручной работы и клей. 
• Возможно даже просто нарисовать клетку на стене.

Для того, чтобы клетка получилась действительно произведением авторского искусства, постарайтесь выразить в её оформлении своё настроение и стиль. Для украшения подойдут практически любые элементы и декоративные вставки — ленты, бисер, цветы, фигурки птиц или бабочек, разноцветные прищепки, сухоцветы, сувениры из поездок. Дайте волю фантазии и ваша эксклюзивная идея найдет своё прелестное воплощение.

Декоративные клетки своими руками это авторское произведение искусства

Пять советов по съемке интерьеров — Дизайн * Губка

Я никогда не был большим поклонником правил, особенно когда дело касается творчества, такого как фотография, письмо или украшение. Кто вам скажет, что хорошо выглядит? Кто тебе скажет, как украсить свой дом? Если вам действительно нравится эта фотография вашей кошки в Snuggie, кто кто-нибудь , чтобы сказать вам, что это плохая фотография? Насколько я понимаю, надо делать — критики уходят! Тем не менее, это не мешает людям время от времени спрашивать меня, как они могут делать хорошие фотографии. Хотя я твердо уверен, что не существует такой вещи, как «хорошая» фотография (у людей так или иначе будет свое мнение), у меня, , да , есть несколько полезных советов и приемов, к которым я обращаюсь, особенно если есть сомнения. Это не правила как таковые — дополнительные рекомендации, которым вы можете следовать при фотографировании своего дома — рамки, в которых вы можете перемещаться, экспериментировать и веселиться. Самое замечательное в этих «правилах» то, что они применимы практически к любой ситуации и уровню фотографии.Большинство современных фотоаппаратов (будь то топовые или нижние) поставляются с ручными настройками и опциями для расширенной съемки. Чтобы следовать этим правилам, вам понадобятся всего три вещи: камера (убедитесь, что вы прочитали ее руководство), штатив и стандартное программное обеспечение для редактирования фотографий (Photoshop — идеальный вариант, Aperture и Lightroom также хороши, iPhoto не так уж и много). «Хорошие» или «плохие» ваши фотографии — решать только вам, но эти пять советов помогут вам указать правильное направление! Удачной стрельбы! — Макс

Человеческий глаз — замечательная вещь, способная адаптироваться практически к любой температуре света — будь то теплый желтый цвет ламп накаливания или тускло-зеленый цвет люминесцентных ламп. Однако камера совершенно глупа по сравнению с человеческим глазом. В то время как глаз будет воспринимать свечение лампы накаливания и интерпретировать его как белый свет, камера просто увидит его как уродливое старое . Вот почему при интерьерной фотографии лучше всего использовать только естественного света. Это золотое правило , когда дело касается внутренней фотографии (или большинства других фотографий, если на то пошло). Если вы собираетесь следовать только одному совету из всей этой статьи, убедитесь, что это именно этот.

При фотографировании интерьера вы хотите убедиться, что все остальные источники света на выключены. Я повторяю — ВЫКЛЮЧИТЕ ВСЕ фары. Вы можете быть немного озадачены этим правилом — в конце концов, свет — необходимая часть фотографии. Что делать, если свет, проникающий через ваше окно, недостаточно сильный? Это то, для чего нужны настройки выдержки на штативе и камере. Установите камеру на штатив, чтобы избежать размытия изображения, и slowwwww уменьшите выдержку, чтобы обеспечить длительную выдержку. Это позволит вашей камере улавливать любой свет в комнате, и вам не придется прибегать к искусственному свету или, не дай бог, к вспышке .

Как только вы начнете делать фотографии интерьера исключительно при естественном освещении, вы увидите, насколько красивее будет конечный результат. Цвета будут выглядеть свежими и чистыми, тени будут исходить из более естественных направлений (а не, скажем, выше), и шансы, что вам потребуется настроить баланс белого при постобработке, значительно уменьшатся.

Примечание. Хотя естественный свет — безусловно, лучший свет для съемки, не весь естественный свет создается одинаково. Лучше избегать того времени дня, когда солнце светит прямо в вашу комнату — это не позволит некоторым областям быть более яркими или выветренными, чем другие. Как и в случае со съемкой на открытом воздухе, съемка в пасмурный день на самом деле идеальна: облака действуют как естественный софтбокс, рассеивая свет и создавая ровные приглушенные тени.

Большинство современных фотоаппаратов поддерживают съемку в формате RAW.В отличие от JPEG, которые представляют собой сжатие файлов с потерями (что означает, что они удаляют много информации о фотографии для экономии места), файлы RAW по сути являются нетронутыми фотографическими данными. Если провести параллель между цифровой фотографией и пленочной фотографией, файл RAW будет сродни необработанному негативу — это, по сути, запись света, попадающего на сенсор камеры и еще не преобразованного в пиксели.

Из многих причин для съемки в режиме RAW одна из лучших — это то, что он позволяет вам максимально контролировать окончательное изображение.Файлы RAW сохраняют на намного больше фотографической информации, позволяя восстанавливать кажущиеся размытыми или недоэкспонированные области, более точно настраивать баланс белого и определять окончательный размер фотографии.

Примечание. Когда дело доходит до редактирования фотографий в формате RAW, я предпочитаю Photoshop — его встроенный редактор RAW отлично справляется со своей задачей и обладает множеством функций.

Когда дело доходит до компоновки фотографий интерьера, я обнаружил, что , когда сомневаюсь в , всегда лучше снимать прямо на .Руководствуясь архитектурным каркасом комнаты, наведите камеру так, чтобы она идеально совпадала с одной из стен. Если у вашей камеры есть сетка или композиционные направляющие в видоискателе (даже в iPhone есть эта функция), это идеальный момент для использования этого инструмента. Вам нужно сделать так, чтобы горизонтальные и вертикальные линии стены (вместе с горизонтальными и вертикальными элементами элементов вдоль этой стены) были выровнены, почти как на сетке в вашем видоискателе. Вот несколько фотографий, которые я сделал из своей квартиры (о которых вы можете подробно прочитать, если вам интересно, в блоге моего жениха), чтобы проиллюстрировать эту идею:

Вместо того, чтобы создавать динамическую композицию с помощью чрезмерно драматических ракурсов камеры, этот метод позволяет получить гораздо более гармоничный конечный результат — он использует ваши стены как своего рода чистый холст с динамизмом, созданным за счет композиции из объектов (например, мазков кисти) внутри фотографии. Этот метод также позволяет вам иметь больше возможностей, если и когда вы решите кадрировать фотографию.

Итак, резюмируя, обычно лучше, чтобы ваша камера была направлена ​​на прямо вперед по направлению к плоской поверхности. Конечно, из этого правила есть исключения, но если вы не уверены, всегда лучше ошибиться в сторону простоты. Как и в большинстве случаев в жизни, меньше часто на больше. Вот несколько очень профессиональных и очень научных рисунков, чтобы проиллюстрировать мою точку зрения:

Одно из самых больших препятствий, с которыми вы можете столкнуться при фотографировании внутреннего пространства, — это нехватка места. При съемке в помещении, особенно в крошечных квартирах или небольших комнатах, таких как кухни и ванные комнаты, вы можете столкнуться со стеной ( буквально ), пытаясь получить идеальный снимок. Часто первый инстинкт людей — купить широкоугольный объектив, чтобы решить эту проблему, но этот вариант часто приводит к искаженным, «рыбьим глазам» изображениям. Я обнаружил, что лучший способ получить желаемый снимок — это не менять объектив , а менять среду .

Важно помнить, что вы как фотограф, по сути, являетесь Всемогущим Владыкой Вселенной на своих фотографиях. Значение: не стесняйтесь перемещать вещи. Если вы не можете сделать идеальный снимок своего дивана из-за того, что за вами стоит большая старая кладовая, сдвиньте ее! Если на месте штатива есть комнатное растение, переместите это комнатное растение! Если вам удастся лучше сфотографировать данную комнату из следующей комнаты, то во что бы то ни стало — выстрелите в дверь! СТРЕЛА:

Это также относится к вещам, которые могут мешать в пределах вашей фотографии.Если есть какие-либо неприглядные шнуры, предметы или предметы мебели, которые убивают ваш фотографический ажиотаж, избавьтесь от них! И не беспокойтесь о целостности документалистов: редактирование объектов — один из маленьких грязных секретов фотографии (даже фотографы времен Гражданской войны перемещали на своих фотографиях ядра и трупы, чтобы создать более драматические композиции, я вас не шучу).

Если вы снимаете крупные планы или виньетки в своем пространстве, важно знать, как (и когда) использовать диафрагму.По сути, инструмент, который контролирует размер отверстия, может проходить сквозь него, диафрагма также отвечает за управление глубиной резкости вашей камеры. Например, если вы снимаете вазу крупным планом и хотите, чтобы фон был размытым, инструмент фокусировки составляет всего половину того, что вам понадобится для достижения этого эффекта. Чем меньше число диафрагмы (или чем шире отверстие диафрагмы), тем меньше глубина резкости. Чем больше ваше число диафрагмы (или чем плотнее отверстие диафрагмы), тем больше в фокусе и все будет резким.Чтобы получить размытый фон на фотографии вазы, вам нужно будет снимать с более широкой диафрагмой или с наименьшим значением диафрагмы, которое позволит ваша камера. И наоборот, если вы снимаете более широкое пространство или всю комнату, вам нужно убедиться, что ваша диафрагма установлена ​​на максимум, чтобы все было в четком фокусе.

Если взглянуть на декор гостиной, можно увидеть, как украшения различаются по всему миру.

УНИВЕРСИТЕТСКИЙ ПАРК, Пенсильвания.- Люди во всем мире красят свои стены в разные цвета, покупают растения, чтобы украсить свои интерьеры, и используют множество других методов украшения, чтобы персонализировать свои дома, что вдохновило команду исследователей на изучение около 50 000 жилых комнат по всему миру.

В исследовании с использованием искусственного интеллекта для анализа элементов дизайна, таких как произведения искусства и цвета стен, на фотографиях жилых комнат, размещенных на Airbnb, популярном веб-сайте аренды жилья, исследователи обнаружили, что люди, как правило, следуют культурным тенденциям, когда украшают свои интерьеры. .В Соединенных Штатах, где у исследователей были экономические данные переписи населения США, они также обнаружили, что люди, принадлежащие к разным социально-экономическим линиям, прилагают аналогичные усилия к оформлению интерьера.

«Нам было интересно посмотреть, как украшают другие культуры», — сказал Клио Андрис, доцент кафедры географии Пенсильванского университета и сотрудник Института кибернауки. «Мы видим карты мира и задаемся вопросом:« Каково там жить? », Но на самом деле мы не знаем, каково быть в жилых комнатах людей и в их домах.Это было похоже на то, как будто люди со всего мира приглашают нас в свои дома ».

Команда исследовала декор жилых комнат в 107 городах на шести континентах и ​​в районах шести городов США.

Некоторые регионы, похоже, имели схожие вкусы в дизайне интерьеров, сказал Си Лю, докторант географии Пенсильванского университета и ведущий автор исследования. Он добавил, что в некоторых случаях то, как эти культуры украшали свои жилые комнаты, соответствовало ожиданиям исследователей.

«Например, в Индии и Марокко было много ярких цветов», — сказал Лю.«И, конечно, это не было большим сюрпризом — у нас была идея, что это могло быть так, еще до того, как мы начали исследование, но мы не были уверены, будет ли это правдой».

По словам исследователей, в Европе, Северной Америке и Южной Америке люди, как правило, выставляли больше книг. Гостиные в Европе, особенно в Италии, украшали стены искусства, что соответствовало их ожиданиям.

Однако исследователи, опубликовавшие свои выводы в текущем выпуске EPJ Data Science, были удивлены, когда некоторые культуры изменили то, как их жилые помещения обычно изображают в телешоу о путешествиях и в туристических брошюрах.

«Нам показалось интересным, что мы нашли много комнатных растений в холодных регионах, особенно в Скандинавии», — сказал Андрис. «Изначально мы думали, что в теплых районах будет больше комнатных растений, потому что там будет недорого, но это не так. Мы также были удивлены тем, что многие островные культуры были немного более аскетичными, чем мы думали изначально. Они не использовали такие яркие цвета. Интерьеры в таких местах, как Фиджи и Карибский бассейн, например, выглядели очень аккуратно.«

В Соединенных Штатах исследователи не обнаружили значительной разницы в наличии декоративных элементов в районах с разными доходами, уровнем безработицы, уровнем образования, стоимостью жилой недвижимости и расовым разнообразием. Они предполагают, что это указывает на то, что американцы прилагают аналогичные усилия для персонализации своего дома.

Поскольку задача просмотра миллиона изображений, чтобы отметить несколько декоративных элементов, потребовала бы слишком много времени для исследователей, команда использовала глубокое обучение, тип искусственного интеллекта, для обнаружения декоративных предметов, таких как настенные рисунки, растения, книги. и краски на картинках.Сначала люди-дрессировщики выбирали декоративные элементы на изображениях, чтобы запрограммировать компьютер на распознавание украшений, а затем компьютер мог выделить и классифицировать эти элементы самостоятельно.

«Термин для этого — трансферное обучение, но это двухэтапный процесс», — сказал Лю. «Первый шаг — классифицировать изображения по категориям, таким как гостиные, кухни, спальни, а также открытое пространство. Затем мы используем обнаружение объектов. Программа будет рисовать рамки вокруг объектов в комнатах, таких как настенные рисунки и книги, а затем программа подсчитывает, сколько таких объектов у нас на каждом изображении. «

Исследователи проанализировали только жилые комнаты в домах, потому что эти комнаты, скорее всего, отражают вкусы владельцев недвижимости, а не только то, как они продают свои дома на сайте аренды.

«На этих веб-сайтах у вас есть много фотографий спален — и поскольку они сдают спальни в аренду, мы подумали, что может быть некоторая предвзятость, потому что владелец захочет украсить его определенным образом, чтобы понравиться гостям», — сказал Лю. «Но мы думали, что гостиная будет более объективной, потому что владелец живет там и, вероятно, использует пространство все время.«

Исследователи использовали интерфейс прикладной программы — или API — который позволял им получать доступ к большим объемам общедоступных данных, включая изображения, на Airbnb. Они собрали с сайта около миллиона геолокационных изображений внутренних пространств.

Андрис сказал, что это исследование уникально еще и потому, что оно может представить новые способы изучения культурных явлений с помощью методов машинного обучения.

В будущем исследователи могут обратиться к другим онлайн-фотоцентрам, таким как Craigslist, чтобы лучше ориентироваться на естественные декоративные вкусы.Они также могут обучить компьютерную программу обнаруживать стили художественных работ или другие значимые объекты, такие как флаги, изображения мировых лидеров или исторические эмблемы.

Лю и Андрис также работали с Цзысюань Хуанг, аспирантом по географии Университета Юты, и Сохрабом Рахими, докторантом архитектуры, Университет штата Пенсильвания.

Украшение современного дома с помощью настенных наклеек, переводных картинок и художественных виниловых идей

Украшение современного дома наклейками, наклейками и изображениями из винила — это быстро, просто и удобно.Наклейки на стены — это простой и недорогой способ быстро преобразить домашний интерьер, добавив уникального характера вашей комнате с помощью интересных и современных украшений для пустых стен, бытовой техники и мебели. Украшение современного дома наклейками, виниловыми наклейками на стены и цифровыми 3D-принтами — отличная альтернатива покраске интерьера или декорированию комнат обоями.

Современный интерьер с милыми и забавными настенными рисунками, наклейками и наклейками или впечатляющими фотоизображениями на стенах поможет быстро сменить комнату для каждого сезона или случая.Эти современные акценты домашнего декора легко добавить на пустые стены или на поверхности мебели. Они меняют внешний вид вашей комнаты и добавляют игривые и красивые образы и цвета в палитру украшения вашего дома.

Современные идеи украшения дома для создания привлекательного акцентного дизайна стен без краски практичны и недороги. Современные настенные наклейки и наклейки легко наносятся и удаляются. Маленькие и тонкие виниловые наклейки и наклейки могут украсить пустые стены, ноутбуки, сотовые телефоны, ноутбуки, бытовую технику и аксессуары для декора.Их можно использовать для украшения мебели, а также для персонализации подарков или подарочных коробок. Маленькие наклейки можно использовать для создания личных заметок на цветах и ​​креативного украшения лепестками роз.

Современные идеи декора стен

Виниловые наклейки, переводные картинки, цифровые принты и обои — прекрасные тенденции дизайна интерьера в креативном и современном домашнем декоре. Если вам наскучила серая поверхность вашего ноутбука, вы можете украсить ее веселыми или забавными виниловыми наклейками и декалями.

Устали смотреть на устаревшие стены и цвета комнат? Тогда вам подойдут цифровые настенные рисунки, переводные картинки или настенные наклейки. Эти привлекательные, простые, инновационные и современные идеи украшения дома украсят ваше жилое пространство.

Лучшая часть создания настенных произведений искусства с современными наклейками и наклейками на стены заключается в том, что вам не нужно использовать их в точности так, как они были задуманы. Вы можете персонализировать украшение стен, вырезав и наслоив наклейки на стены.

Выбор любимых цветов комнаты, тематики украшения стен, использование творческих приемов и сочетание их с современными наклейками и Наклейки на стены позволяют добавить индивидуальности вашему дизайну акцентной стены и сделать его очень оригинальным, художественным и эксклюзивным.

Отделка интерьера наклейками и наклейками на стены

Вы можете создать очень интересный, стильный и эффектный дизайн стен в каждой комнате вашего дома.Самый простой способ — использовать современные наклейки, настенные наклейки, плакаты, цифровые принты или 3D-обои с цифровыми изображениями для украшения стен.

Украшение кухни для украшения холодильника

Отделка интерьера небесно-голубым цветом для простора

Красивые пейзажи, милые животные и насекомые, игривые узоры в горошек или геометрические узоры, красочные цветы, изображения деревьев и птиц или абстрактные настенные рисунки отлично подходят для быстрого и драматичного преобразования комнаты.

Если вам нравятся уникальные идеи украшения и вы хотите персонализировать домашнюю мебель, бытовую технику или аксессуары декора, используйте современные наклейки на стены или виниловые наклейки с цифрами, буквами, классическими изображениями или современным графическим дизайном. Вдохновляйтесь и творчески, получайте удовольствие и наслаждайтесь этими замечательными, простыми и современными идеями декора стен.

Декорирование стен цифровыми принтами и фотообои

Отделка пустых стен современными обоями и большими цифровыми принтами — это стильно и эффектно. Дизайн фотообоев привносит потрясающие образы в дом и украшает современный дизайн интерьера с помощью потрясающих оптических иллюзий. Цифровые принты и фотообои доступны в любых размерах и цветах.

Отделка стен фотообоями, наклейками или наклейками идеально подходит для оформления небольшого интерьера. Красивые настенные наклейки привлекательно украшают пустые стены и предметы мебели, объединяя домашний декор с выбранной темой оформления и цветами комнаты.

Современные идеи декорирования прихожей и прихожей

Идеи росписи для стильного декора

Фотообои создают эффектные акцентные стены, привнося современное искусство, цифровую фотографию и графику в современный дизайн интерьера. Фотообои — отличные украшения для стен, которые привносят романтику и чувство приключения в современный дизайн интерьера и украшают офис или дом.

Идеи декора стен в эко-стиле

Идеи отделки стен в стиле эко создают прекрасные образы, вдохновленные природой, и создают великолепные акценты для умиротворяющего и впечатляющего дизайна интерьера. Очень привлекательные современные образцы обоев, созданные с помощью цифровых принтов, подчеркивают и украшают интерьер в эко-стиле.Яркие цветочные узоры, изображения птиц и деревья идеально подходят для расслабляющего и приятного украшения дома. изящные розы на стене спальни.

Красивые наклейки, виниловые наклейки на стены и фотообои — это потрясающие идеи украшения дома, которые добавляют удовольствия в декор комнаты. Крупные цифровые принты и современные фотообои, вдохновленные природой, обогащают современные идеи декора в эко-стиле. Цифровая настенная живопись стимулирует воображение с помощью приятных оптических иллюзий и добавляет интереса к современному дизайну интерьера, сочетая современное искусство с технологиями и осветляя комнату удивительными фотографиями и естественными цветами.

Украшение современной спальни черно-белыми фотообоями

, автор — Эна Русс
15.10.2016

по-прежнему актуальны для современного дизайна интерьера?

С появлением сотовых телефонов, умных часов и других подобных технологий фундаментальная потребность в часах, определяющих закономерности наших дней, несомненно, уменьшилась. Однако это не означает, что они вышли из употребления для жилых или коммерческих интерьеров. Фактически, часы переживают возрождение дизайна с упором на стиль и разнообразие, что делает их ценным инструментом дизайна для широкого диапазона настроек.

Часы как заявление: Как и современное декоративное освещение, современные часы часто бывают больших размеров и доступны во множестве креативных дизайнов и цветов, чтобы обеспечить особый фокус. Внутреннее движение часов создает дополнительный визуальный интерес и может быть более интересным, чем статичное произведение искусства. Для коммерческих приложений мы обычно избегаем моделей, которые «тикают», «тикают» или издают другие типы звуков, которые могут легко отвлекать или даже раздражать за короткое время.

В этих двух примерах отличительные настенные часы дополняют характерные стены: фотография слева из вестибюля отеля The Archer Hotel, Нью-Йорк; Фотография справа из итальянского ресторана Jamie’s в Йорке, Великобритания.

Часы как универсальный инструмент дизайна: Часы одновременно современные и классические, доступны в бесчисленном множестве стилей, чтобы соответствовать практически любому языку дизайна от викторианского до современного индустриального. Часы эффективно работают как единый элемент, но их универсальность и разнообразие стилей позволяют им одинаково хорошо работать на стене с несколькими элементами дизайна.Несколько часов также можно повесить вместе, просто в качестве декоративного элемента или для информационной ценности, например, часовые пояса для офиса с несколькими местоположениями или вестибюля отеля, выделяющего основные обслуживаемые города.

istockphoto.com

Часы как экономическое обновление: Часы могут быть недорогим инструментом, позволяющим вдохнуть новую жизнь в самые разные помещения. Это обычно быстрое и простое в установке дополнение может добавить ярких цветов, создать интересный фокус или завершить композицию дизайна.

— это эстетически приятное, но функциональное дополнение к помещению вестибюля. Фото из Garden Spot Village; Новая Голландия, Пенсильвания. Фото: Nathan Cox Photography

Часы как функциональный инструмент: Даже несмотря на то, что у нас под рукой есть множество технологических инструментов, часы по-прежнему могут служить ценной цели во многих приложениях. Для коммерческих помещений, таких как конференц-залы или центры исполнительских искусств, мы рекомендуем установить часы на задней стене, чтобы докладчик или исполнитель мог легко отслеживать время, не отводя взгляда от аудитории.Просто убедитесь, что шкала соответствует пространству, чтобы ее мог легко прочитать кто-нибудь, стоящий в передней части комнаты. И любой, кто когда-либо был на собрании, может поручиться за ценность настенных часов, которые должны быть на видном месте, чтобы все двигалось по расписанию. Гимназии и фитнес-центры — это другие области, где часы важны для отслеживания времени игр или занятий, отслеживания интервалов тренировок или фазовых отрезков.

Идеальные часы различаются для каждой индивидуальной настройки. К нему следует относиться, как к любому другому выбору произведений искусства, чтобы отразить стиль дизайна помещения и усилить идентичность бренда вашей организации.

Эбби Стюарт, IIDA занимается созданием коммерческих дизайнерских решений более 11 лет. Она фокусируется на помощи клиентам в разработке интерьеров, которые не только красивы, но и дают смысл и вдохновение для всех, кто использует это пространство. Часы — классический элемент, который может привнести нотку прихоти и интереса для создания отличительного эффекта.

Вот еще несколько замечательных примеров, которые мы нашли для использования часов в качестве инструмента дизайна.

Этот современный дизайн гостиной представлен на Houzz.com.

Эти два примера взяты с сайта CovetEdition.com и посвящены работе канадских дизайнеров интерьеров.

На следующих сайтах представлен широкий спектр вариантов, подходящих для любого стиля, помещения и бюджета.

https://www.houzz.com/products/wall-clocks

15 Modern Wall Clock Designs Good for Wall Decor

https://www.wayfair.com/decor-pillows/sb0/wall-clocks-c417053.html

Источники обложек:

Верхний ряд слева направо:

Изображение 1 / Изображение 2 / Изображение 3 / Изображение 4 / Изображение 5

Нижний ряд слева направо:

Изображение 1 / Изображение 2 / Изображение 3 / Изображение 4 / Изображение 5

Редактор блога RLPS Interiors: Джоди Крайдер, LEED AP

6 обязательных приложений для украшения дома для Android и iOS

Модернизация и цифровизация сделали все проще и проще. Теперь вы можете найти решение любой проблемы в Интернете — будь то покупки в Интернете или поиск помощника по сочинению. Вы даже можете украсить свой дом с помощью различных приложений для украшения. Есть несколько лучших приложений для украшения дома и дизайна интерьера, доступных для Android и iOS, чтобы украсить ваш дом.

Если вы не можете нанять дизайнера интерьера для украшения вашего дома, вам не о чем больше беспокоиться, потому что в эту эпоху технологий в Интернете доступно множество качественных приложений, которые могут помочь вам в ремонте вашего дома.

От выбора правильного цвета для стен до расстановки мебели в доме — приложения для декорирования помогут вам наилучшим образом. Независимо от того, насколько большой или маленький ваш дом, вы получите идеальные рекомендации от приложений для украшения, которые сделают ваш дом красивым и привлекательным.

Если у вас нет денег на то, чтобы нанять дизайнера интерьера, то вам непременно стоит скачать приложение для украшения на свой телефон. Это очень поможет вам сделать ваш дом красивым, не нанося серьезного ущерба вашему кошельку.

Если у вас есть хорошее приложение для украшения на вашем телефоне, вам не понадобится помощь дизайнера интерьера, чтобы сделать ваш дом красивым. Вот некоторые из лучших приложений для домашнего декора для Android и iOS.

Homestyler Дизайн интерьера:

Homestyler — это незаменимое приложение для декорирования, которое может упростить задачу украшения вашего дома. В нем представлены все рекомендации по украшению вашего дома, которых вы ожидаете от небрежных дизайнеров интерьера.

От выбора идеальных цветов стен для вашей комнаты до предложения предметов декора, подходящих для вашего дома, он дает вам лучший совет, который может сделать ваш дом красивым и уникальным. Это замечательное приложение для украшения дома, которое может придать дому классный вид.

Дизайн дома 3D, золото:

Некоторые люди плохо разбираются в дизайне дома и в другой творческой деятельности. Если вы один из них, то у вас должно быть на телефоне приложение для домашнего дизайна с 3D-золотом.Это очень поможет вам сделать ваш дом красивым и неповторимым.

Это лучшее декоративное приложение, которое поможет вам в проектировании и ремонте вашего дома. Это сделает ваш дом просторным и красивым, благодаря точным архитектурным решениям вашего дома. Это самое продвинутое приложение, в котором вы найдете все новейшие идеи, как сделать ваш дом красивым и привлекательным.

BrightNest:

Декорируя и проектируя свой дом, продвигайтесь дальше шаг за шагом.Потому что чем больше вы организованы при ремонте дома, тем красивее будет ваш дом.

Выполнение плана интерьера — самая сложная задача, потому что нужно следить за тем, чтобы не упустить ни одной детали. Чтобы получить идеальные цвета на стенах и великолепный интерьер всего дома, вам следует обратиться за советом к BrightNest, потому что он дает вам точный, наиболее подходящий вид вашего дома, предлагая новые и новейшие дизайны интерьера для вашего дома.

Houzz:

Houzz — это приложение и веб-сайт, на котором представлены все рекомендации по интерьеру, архитектуре и домашнему оформлению. Есть много статей, блогов, сообщений и функций, которые очень помогут вам в украшении вашего дома. Это приложение Home Decor, от выбора предметов декора до выбора цвета и мебели, предоставит вам каждую деталь, которая поможет вам сделать ваш дом красивым и привлекательным. Если вы хотите создать красивый интерьер и экстерьер дома, вам следует обратиться за помощью к этому приложению, так как оно является родоначальником всех приложений для проектирования домашнего интерьера.

Зилловские раскопки:

Если вы не можете придумать удивительные идеи для украшения своего дома, вам следует обратиться за помощью в лучшее приложение для улучшения и украшения дома. Zillow Digs может помочь вам удивительным образом и упростит процесс украшения вашего дома, предоставив вам точные идеи реконструкции и ремонта, которые сделают ваш дом безупречным.

Он также подскажет, какие инструменты вам понадобятся, чтобы сделать ваш дом красивым. Маленькие и простые вещи, такие как подвесной светильник с помощью качественной дрели, которая, как вы думаете, является очень сложной задачей, упрощаются благодаря этому приложению для домашнего декора.Теперь вы можете сделать свой дом красивым, добавив немного смазки в свой план украшения дома.

MagicPlan:

Полы и потолок могут изменить общий вид дома. Вы можете сделать потолок привлекательным, повесив красивый свет и люстры, а можете улучшить пол в своем доме с помощью приложения MagicPlan для украшения дома. Красивый пол в вашем доме сделает ваш дом неповторимым и неповторимым. Вам не понадобится дизайнер интерьера, чтобы отремонтировать свой дом, если у вас есть это приложение для украшения дома, доступное как для Android, так и для iOS.

10 советов по украшению красивой спальни

Спальня должна быть личным убежищем, святилищем, выражающим ваши любимые цвета, чувства и коллекции. Изучите основные правила, которые следует помнить при оформлении спальни.

Выберите нежный цвет

Вместо смелых основных цветов выберите успокаивающие оттенки и успокаивающую палитру однотонных тонов.Помните теорию цвета: нежные оттенки синего, лавандового или зеленого считаются спокойными и безмятежными. Насыщенные оттенки драгоценных камней создают настроение уюта и комфорта. Это могут быть жареные коричневые тона, глубокий гранат или топаз. Используйте в спальне более приглушенные версии ваших любимых цветов ». Это может означать, что вы выберете лиловый вместо баклажана или тыкву вместо мандарина.

Не закрывайте глаза на потолок

Потолок — пятая стена в комнате. Когда вы лежите в постели, видите ли вы мягкую, чистую поверхность? Добавьте тонкий узор или мягкий цвет.Покрасьте потолок в чуть более светлый вариант цвета стен. Это поможет зрительно снизить потолок и придать пространству ощущение уюта и уюта.

Другими решениями могут быть нанесение на потолок трафарета или обоев, добавление архитектурных элементов в виде балок или молдингов или использование декоративной окраски. Для непревзойденной роскоши потолки спальни, покрытые серебряной фольгой, кровать с балдахином или тентом, свисающая с потолка, могут окутать вас чувственностью и теплом, добавив текстуры, дизайна и цвета потолку.Добавьте лепной медальон и люстру из хрусталя или нежных оттенков, чтобы придать цвет, узор и текстуру «пятой стене» над вами.

Сохраняйте простоту спальни

Спальня должна выглядеть уютно и просто, изысканно и элегантно, независимо от того, какой стиль оформления вы выберете. Для облегчения передвижения оставьте не менее трех футов между кроватью и боковыми стенками или большими предметами мебели и не менее двух футов между кроватью и низкой мебелью, такой как столы и комоды.Если вам нужно обходить кровать, чтобы добраться из туалета в ванную, подумайте, как вы можете передвинуть кровать.

Обставляйте свою спальню только тем, что вам нужно. Кровать, тумбочка или две, комод и стул — все самое необходимое. Все остальное — беспорядок. Если у вас есть место, поставьте комод в шкафу.

Аксессуары должны быть сведены к минимуму. Выберите красивое произведение искусства, расставьте несколько семейных фотографий, добавьте цветы и свечи и оставьте это в покое.

Выберите мебель правильного размера

Когда вы будете готовы купить мебель для спальни, начните с плана этажа и обмеренного рисунка помещения.Мебель должна подходить к комнате, в которой он живет, особенно это касается мебели для спальни. Не выбирайте тяжелую большую кровать и комод для маленькой спальни. Если потолок высокий, то высокое изголовье поможет заметно уменьшить его до размеров.

Если ваша спальня большая, выберите подходящую мебель. Добавьте стул и пуфик или поставьте мебель в конце кровати. Слишком маленькая мебель и аксессуары будут теряться в большом помещении.

Есть много места для хранения

Чтобы создать в спальне ощущение безмятежности, храните вещи вне поля зрения.Комната будет казаться более спокойной и вместительной.

• Выберите вместительную прикроватную тумбочку с ящиками или дверцами, за которыми вы можете спрятать книги, лосьон и очки для чтения в пределах досягаемости, но вне поля зрения. Если вам нужно больше места для хранения вещей, выберите стол с плинтусом или небольшой комод с ящиками.
• Используйте чемодан или скамейку у изножья кровати для хранения дополнительных простыней, одеял и подушек.
• Для легкодоступных книг и аксессуаров используйте изголовье со встроенными полками или раздвижными панелями.
• Индивидуально разработанная система организации позволяет максимально использовать пространство шкафа.
• Подставьте под кровать неглубокие ящики, скрыв их красивой юбкой.

Включите частный уголок

Сделайте себе особенный подарок — тихое место, где можно посидеть и почитать. Создайте интимную зону для чтения или отдыха с удобным стулом и подставкой для ног в конце кровати или в углу.

Если у вас есть место, сделайте место у окна под окном спальни.Наслаждайтесь видом и естественным освещением.

Побалуйте себя роскошным постельным бельем

Украсьте спальню красивыми и роскошными тканями. Ничто так не добавляет комфорта спальне, как красивое постельное белье. Не покупайте простыни, состоящие менее чем из 100% хлопка или льна с большим количеством нитей 350 или более. Простыни, которые кажутся из 5-звездочного отеля, отправьте в химчистку для профессиональной стирки и глажки, что не требует больших затрат, но обеспечивает гладкость, достойную Ritz.

Добавьте другие чувственные ткани в спальню с помощью мягкого мохера или кашемира на подлокотнике кресла для чтения, покройте стены шелком или текстурированными настенными покрытиями, повесьте шелковые драпировки или шелковый балдахин на кровати или добавьте плюшевые покрытия для пола.

Крышка окон

Красиво оформленное окно поможет обрамить окно и вид, а также предоставит другие способы добавить в спальню цвета, рисунка, текстуры и мягкости.Если вам нравятся мягкие прозрачные шторы, которые фильтруют свет, комбинируйте непрозрачные рулонные шторы, которые можно опустить, чтобы сохранить уединение ночью и заблокировать утренний свет.

Ко всем портьерам используйте непрозрачные жалюзи или драпировочную подкладку, чтобы не пропускать солнце, когда вы хотите спать поздно.

Включите несколько вариантов освещения

В спальне хорошо «наслоить» освещение по всей комнате. Окружающее освещение освещает всю комнату, маленькие лампы могут фокусировать свет для чтения и других занятий, а акцентный свет помогает мыть стены при мягком освещении.

Чтобы сфокусировать лампу для чтения там, где она вам нужна, используйте прикроватную лампу с подвижным кронштейном. Каждый свет должен регулироваться диммером. Установите отдельный переключатель включения / выключения для каждого источника света, чтобы вы могли выбирать и освещать только ту область, которую хотите.

Пусть ваша спальня станет настоящим бегством

Постарайтесь приучить себя не допускать попадания в спальню мобильного телефона, компьютера, телевизора, тренажера или ежевики. Создайте заветное место для отдыха и обновления. Вам понравится иметь комнату, посвященную чтению, сну и романтике.

Все способы, которыми Джеффри Эпштейн украсил свой особняк в Нью-Йорке

Джеффри Эпштейн когда-то владел обширным портфелем недвижимости — и его знаменитый таунхаус в Нью-Йорке теперь выходит на рынок, сообщила в четверг The Wall Street Journal.

Семиэтажный таунхаус в Верхнем Ист-Сайде выставлен на продажу в размере 88 миллионов долларов. Его поместье в Палм-Бич также было внесено в список, и ожидается, что его имущество по всему миру последует за ним.Продажа недвижимости принесет пользу имуществу Эпштейна, которое используется для рассмотрения исков его предполагаемых жертв.

Эпштейн был арестован в июле 2019 года по подозрению в торговле несовершеннолетними в целях сексуальной эксплуатации в своих домах на Манхэттене и Флориде с 2002 по 2005 годы. 10 августа 2019 года он был найден мертвым в камере тюрьмы на Манхэттене в результате очевидного самоубийства.

Особняк Эпштейна в Верхнем Ист-Сайде был построен в 1930-х годах, его площадь составляет 28 000 квадратных футов, и когда-то здесь размещалась школа. Он был куплен в 1989 году основателем L Brands Лесом Векснером за 13 долларов.2 миллиона. Затем Векснер продал его в 1998 году нью-йоркской Nine East 71st Street Corporation (NES) за нераскрытую сумму. В 2011 году право собственности на недвижимость было передано от NES к Maple Inc. за 0 долларов. Открытые записи 2011 года показывают, что Эпштейн владел как NES, так и Maple Inc. на момент передачи.

Согласно Журналу, в доме все еще находится большая часть мебели Эпштейна, хотя его «более личные вещи были вывезены».

Ранее следователи обнаружили «груды наличных», бриллианты и паспорт Саудовской Аравии с вымышленным именем в сейфе в особняке — но это были далеко не единственные его личные вещи. Таунхаус, как известно, был необычно украшен. обрамленный глазными яблоками столовую в пляжной тематике Business Insider составил список самых странных способов, которыми, как сообщается, Эпштейн украсил дом.

Обрамленные глазные яблоки

В 2003 году Джеффри Эпштейн позволил репортеру Vanity Fair посетить дом. Репортер Вики Уорд описала интерьер как «высокостенную, эклектическую, властную фантазию, которая, кажется, не имеет границ».

Вестибюль, как отмечает Уорд, представлял собой «ряд за рядом индивидуально оформленных глазных яблок». По сообщениям, Эпштейн сказал Уорду, что они были сделаны для раненых солдат и импортированы из Англии.

Гигантская скульптура обнаженного африканского воина

Пройдя через входной коридор, Уорд описала, что увидела «скульптуру обнаженного африканского воина в два раза больше натуральной величины».«

Чучело черного пуделя на пианино

Уорд также описал, как видел чучела черного пуделя на пианино.

« Ни один декоратор никогда не посоветует тебе это сделать, — сказал Эпштейн Уорду. — Но я хочу. »

В иске говорится, что, как сообщает The New York Times, протезы груди были прикреплены к стене в главной ванной, и что Эпштейн мог смотреть на них или играть с ними, находясь в ванной.

«Трофейная комната» с чучелом жирафа

В иске Араоза к Эпштейну также описывается «трофейная комната», заполненная чучелами экзотических животных, в том числе жирафа.

Чучело тигра, но в другой комнате

В офисе Эпштейна, по-видимому, тоже было чучело тигра. Торговец хедж-фонда, который ранее был в особняке, предоставил его фотографии в офисе Эпштейна New York Post.

«Стол должен был быть одним из самых больших столов, которые я когда-либо видел, и этот тигр просто затмевает его», — сказал торговец The Post.

Раскрашенная фреска с изображением самого себя в тюрьме

По сообщениям, вокруг дома на Манхэттене висело множество картин.

Но, в частности, одна картина, которая висела на втором этаже, изображала Эпштейна за колючей проволокой между постом охраны и сотрудником исправительных учреждений, сообщил New York Times специалист по связям с общественностью Р. Кури Хэй.

По словам Хэя, Эпштейн сказал, что это он нарисовал, потому что «всегда есть вероятность, что я снова могу быть мной.»

Р. Кури Хэй осмотрел фреску после того, как Эпштейн пригласил ее домой около четырех месяцев назад, по данным The New York Times.

Особо украшенная люстра

По сообщениям The New York Times, внутри особняка кукла в натуральную величину висела на люстре.

Тенденцията на ниските кокчета се възцари на Седмицата на модата в Ню Йорк S/S ’22

Обаждам се на всички любители на ниска поддръжка.

Зад кулисите на Седмицата на модата в Ню Йорк пролет/лято 2022 г., фризьори от множество шоута подготвиха своя собствена уникална вариация на класиката нисък кок , подчертавайки външния вид с всичко от скъпоценни камъни шноли до воали на клетка за птици. Независимо дали ги приравнявате с елегантна визия на балерина или типично френски шиньон, ниските кокчета, наблюдавани в Markarian, Алис + Оливия , Санди Лианг и Том Форд бяха олицетворение на елегантността.

Страхотно предимство на този външен вид е, че може да се персонализира за всеки стил и текстура на косата. Различните стилисти си играеха както с дълбоките странични, така и с централните части (доказвайки, че нито Gen Z, нито Millennials имат последната дума за това какво е най-готиният ), както и колко стегната и лъскава е била косата отзад за всеки модел. В сравнение с обилното сплетени прически и мокър вид изпратен по пистите, ниският кок изглеждаше особено вечен и излъскан, като същевременно се открояваше като една от най-лесните прически за DIY у дома.

По-долу вижте четири от най-добрите итерации на ниския кок на Седмицата на модата в Ню Йорк, включително съвети от стилистите и техните предпочитани продукти, за да пресъздадете външния си вид тази есен.

Маркарян

Синди Орд / Персонал / Getty Images

За да допълни елегантното облекло, което се разхождаше по пистата в Markarian, Oribe Educator, Манди Таубер искаха да придадат на моделите изискан стил. Таубер започна с разделяне на косата по средата и я подготви с Supershine овлажняващ крем . След това тя пръска Maximista уплътняващ спрей да се удвои като изградител на обем и топлинна защита. След това косата беше поставена в ниско пони, увита в шиньон и закрепена на мястото си. За да осигури външния вид, Таубер добави мрежи за коса, които съответстваха на естествения цвят на косата на всеки модел, така че да изглежда почти невидим, и завърши нещата с голям лък, воал на клетка за птици или драматична шапка.

Алис + Оливия

Alice + Olivia S/S 2022 от Наташа Марш

Създаден за смелите и игриви, Жюстин Марджан , TRESemmé Global Stylist, използва набор от аксесоари за коса, от игриви панделки до украсени с бижута парчета, за да придружава ниските кокчета в Alice + Olivia. За да създаде визията, Марян раздели косата по средата и напръска TRESemmé Keratin Smooth Heat Protect Spray от корена до краищата. За да разиграе текстурата, екипът добави TRESemmé спрей за суха текстура и раздели косата на две половини. След това беше събрана обратно в свободен кок, закрепена с хвърчащи и бебешки косъмчета и гарнирана с аксесоари като щипки с скъпоценни камъни, лъкове и перли. За да зададе външния вид, Марян приложи TRESemmé TRES TWO Спрей за коса Extra Hold .

Санди Лянг

приятел

Наима Лафонд , глобалният артистичен директор на amika, даде на моделите ниски, лъскави кифли на шоуто Sandy Liang. Прическата е свързана с елегантна простота този сезон, сподели LaFond. Ниският, лъскав грабнат кок е сякаш току-що сте вдигнали косата си направо от душа. Това е за заетото момиче в движение, което все още обича да поднася поглед. За да получи стила, екипът създаде чиста централна част и нанесе три ключови продукта върху косата: Supernova крем за влага и блясък , Glass Action Universal Elixir , и Top Gloss Shine Spray (който се очаква да излезе през ноември). След завършване, отклоненията бяха изгладени и лак за коса беше нанесен обилно, за да се заключи всичко.

Том Форд

Том Форд

Елегантността и драматизма се завърнаха на пистата на Tom Ford, подходящ завършек на сезона S/S ‘22 на Седмицата на модата в Ню Йорк. Елегантните кокчета се отличаваха с дълбока странична част, лъскаво покритие и нулеви хлътвания, плюс няколко украсени щипки за коса. Като цяло външният вид излъчваше изтънченост по този чувствен, мистериозен начин, който само Том Форд може да управлява.

РСПП зовет перезагрузиться: zdesvamnetut100 — LiveJournal

«На исходе минувшего года Российский союз промышленников и предпринимателей выступил с несколько неожиданной инициативой, представив в правительство некий «план по развитию рынка альтернативных продуктов». Из которых первоочередную важность имеют «растительное молоко и альтернативное мясо, созданные из белка насекомых или растительных белков.

Ключевое слово здесь, конечно, «насекомых». Растительное молоко уже давно не в диковинку, да и «альтернативное мясо», в общем, тоже. Под этим термином, как правило, имеются ввиду две совершенно разные вещи: во-первых, «соевое мясо», которое известно уже очень давно, и ученое слово «альтернативное» по отношению к нему никто особо и не употреблял. В декабре в Северной столице финишировал «зеленый марафон», участник которого раздавали в разных городах РФ «хайбургеры» из растительного мяса. Публика оказалась благодарной и оставила массу откликов типа: «Когда ешь, чувствуешь все вкусы: и сыр, и соус, и мясо».

Однако современная наука обогатила наши дни и такими опытами, как выращивание искусственного мяса с помощью стволовых клеток в «биологических реакторах». Это уже принципиально иное дело.

«С одной стороны, нам обещают, что мы будем есть его уже завтра, — пишет научный журналист Всеволод Остахнович, — но с другой — так говорят последние 10 лет. Компании, которые этим занимаются, все время откладывают дедлайн. Да, некоторые — вроде Meat Just и Upside Foods — уже представили полуфабрикаты из культивированного мяса. Но текстура у них еще долго будет, как у наггетсов или фарша. Пока что воспроизвести всю сложность куска мяса со всей мраморностью и коллагеном, очень трудно. И дело не только в том, что мясо живых существ такое, какое есть, потому что это мышцы, предназначенные для движения. Есть серьезные проблемы, связанные и с термодинамикой, и с клеточным метаболизмом, и с конструкцией биореактора». Кстати, рыбу, имеющую более слоистое строение, вероятно, будет проще воссоздавать на 3D-принтерах — это ведь технология наращивания. Однако, конечно, разница во вкусе будет ощутимой.

Здесь надо бы различать сразу несколько проблем. В принципе, конечно, если в продаже появится искусственно выращенное и хорошее мясо, это можно только приветствовать. Такой шаг прогресса даст много плодов. Вовсе не обязательно разделять идеи вегетарианства, чтобы порадоваться избавлению человечества от «первородного греха» — необходимости убивать животных. И если скотобойни уйдут в историю вслед за смертной казнью, шпицрутенами и пением кастратов — это будет хорошо.

Стоит вспомнить и о негативном воздействии на экологию традиционного сельского хозяйства, на которое, как отмечают в РСПП, приходится около 30% общего объема выбросов парниковых газов. И, наконец, кроме высоких соображений гуманизма и почти столь же высоких интересов мировой климатической безопасности, есть еще и простой приземленный аргумент: если мировой рынок мяса пополнится добротной генно-инженерной продукцией, то цены на этом рынке, в итоге, останутся на приемлемом уровне.

Все это, однако, меркнет перед перспективой «насекомой» пищи. «Энтомофагия — поедание насекомых — непростая тема, — отмечает Остахнович. — В России есть некоторое отвращение к насекомым, но во всем мире два миллиарда человек ежедневно их едят. И не из соображений о будущем планеты, а просто так. Исторически. Токийский университет выпустил справочник „Съедобные насекомые мира“ — их порядка 2000 видов».

Так, в Японии саранчу отваривают в соевом соусе с сахаром, в Мексике кузнечиков добавляют в тако (лепешки — ред.), а муравьиные яйца готовят с маслом и чесноком. «В Колумбии есть так называемые широкозадые муравьи, их обжаривают в соусе и подают в шоколаде и леденцах. Они продаются под названием «Икра Сантандера» в честь департамента, откуда они родом. Рестораны вроде D.O.M. и Noma предлагают гостям муравьиные закуски и бургеры. Несомненно, этот тренд растет, и так будет продолжаться и дальше», — отмечает эксперт. — Но европейцам действительно сложно взять и съесть жука. Но есть мука из насекомых, которую можно добавлять в снеки и хлебобулочные изделия, и выращиванием насекомых уже занимаются большие компании. В России это пока не так развито, но, в конце концов насекомые наверняка окажутся в виде добавленного белка в каких‑нибудь соевых котлетах».

Полный текст: https://www.rosbalt.ru/moscow/2022/01/09/1938618.html

Собственно, тут и комментировать особо нечего, это та же самая «грейт ресет» в сильно сжатом и сокращенном изложении. Интересно только, а всяких хищников вроде львов и медведей они каким способом собираются избавить от «первородного греха»? Небось не голые обезьяны, и от убийства других животных их отказаться не заставишь ни за что. Ну и дурное эколожество отметить тоже стоит — высокие гуманистические соображения, куда же без них.

Конечно, на первый взгляд сей текст может даже кому-то и привлекательным показаться, они же там постоянно подчеркивают, что продиктовано все это исключительно заботой о неразумных человечишках. Но вот один только факт из жизни этой структуры говорит сам за себя — прошлым летом этот профсоюз олигархов совместно с другим «профсоюзом» ( это с тем, во главе которого стоит старая проститутка по фамилии шмаков ) выступила с воззванием, где есть следующие пункты:

  трудящимся – сделать прививку, чтобы эффективно трудиться и обезопасить своих близких и родных;

  работодателям – использовать имеющиеся у них возможности для вакцинации работников;

http://www.przrf.ru/full/COVID-19/Obrashenie-FNPR-i-RSPP/

Комментарии, как говорится, не требуются. Союз как бы «промышленников и предпринимателей» выступает за такие меры, которые гарантированно убивают и промышленность и предпринимательство, а шмаковские профсоюзы ( задача которых вообще-то заключается в защите работников от беспредела работодателей) призывает и правительство и тех самых работодателей беспределить по полной. Сучья натура вскрыта, маски сброшены, пояснения не нужны.

Клетка в интерьере | Идеи для дома от экспертов Westwing

Полоска и клетка в интерьере являются самыми распространенными узорами. Они по праву считаются настоящей классикой, которая никогда не выходит из моды. Ведущие мировые дизайнеры отмечают, что геометрические орнаменты переживают сейчас свое второе рождение, поэтому клетчатые акценты в интерьере являются модным трендом современности.

Клетка в интерьере – это упорядоченный рисунок, который способен привнести в атмосферу дома уют и гармонию. Она поможет подчеркнуть традиционность и историческую сущность стилевого оформления помещения, сделает его более солидным и респектабельным. Монохромная или контрастная, ритмичная или чуточку намеченная, она способна соединять воедино абсолютно разные элементы дизайна, тем самым подтверждая свою уместность в интерьере любой квартиры.

Гармония прежде всего

Утверждение, что клетка в интерьере может существовать только сама по себе и сочетаться исключительно с однотонными предметами мебели абсолютно неверно. Многие не рискуют комбинировать ее с другими узорами, однако, если Вы открыты к экспериментам, следующие советы клуба WESTWING для Вас.

Наиболее традиционным в дизайне считается сочетание клетки с растительными узорами. Такая комбинация находит широкое применение в гостиных, спальнях, кухнях и даже детских комнатах. Легкий цветочный узор, который не притягивает к себе внимание, прекрасно смотрится на фоне строгой английской клетки.

Клетчатый узор можно сочетать с такими графическими рисунками, как горошек или полоска. При этом основные поверхности должны быть нейтральными и не иметь активных рисунков. Предметы в клетку лучше расположить на некотором расстоянии от элементов с графическими рисунками. Это позволит подчеркнуть особенности каждого из них. Цветовое соответствие также должно быть гармоничным. Красный, например, прекрасно сочетается с синим, белый с черным, а салатовый с розовым.

Эффектное сочетание может получиться и у клетки с орнаментом. Для этого необходимо учесть несколько нюансов:

• Когда в интерьере преобладает клетка, орнамент должен применяться исключительно в качестве дополнения.
• Если клетка активная и крупная, орнамент должен быть мелким и нейтральным, мелкая спокойная клетка хорошо смотрится с ярким узором.
• Орнамент и клетка в единой цветовой гамме будут выглядеть гармонично и привлекательно.Поскольку каждый из данных узоров представляет отдельную культуру, их комбинация отлично подойдет для интерьеров в стиле эклектика.
• Если Вы используете в интерьере и крупную, и мелкую клетку, делайте основной акцент на одной из них. При этом не забывайте об удивительных свойствах белого цвета уравновешивать обильные фактуры и яркие акценты.

Тартан в интерьере. Классические мотивы

Тартан – это известный во всем мире шотландский орнамент. Он состоит из прямоугольников, созданных перпендикулярно переплетенными линиями. Шотландская клетка в интерьере с давних времен является излюбленным орнаментом англичан. Он часто встречается в обивке мебели, текстиле и отделке стен. В холлах, коридорах и на лестницах часто используются коврики и дорожки с орнаментом «тартан».

Классическим вариантом тартана считается клетка в зеленых или красных тонах. Она будет прекрасно смотреться в традиционном английском интерьере. В современных квартирах можно использовать черно-белую или сине-белую ее интерпретацию.

Заключительными элементами дизайна квартиры в английском или шотландском стиле могут стать стулья с клетчатой обивкой, абажуры, скатерти и различные элементы декора. Ну и конечно же, не обойтись без традиционного пледа в клетку.

Клетчатые обои – модно и креативно

Психологи утверждают, что клетчатый узор благоприятно влияет на психику человека. Все элементы узора упорядочены, поэтому обои в клетку в интерьере создают атмосферу спокойствия и умиротворенности. Кроме того, они выглядят солидно и респектабельно.

Выигрышно смотрится клетка на обоях в сочетании с однотонной обивкой мягкой мебели. Цветовую комбинацию нужно умело подобрать. Серо-желтый узор, например, хорошо будет смотреться с мебелью серого или желтого цвета. Сочетание с растительными и этническими мотивами также приветствуется. Строгий клетчатый рисунок является великолепным фоном для круглых, плавных, неправильных форм. Однако необходимо помнить, что обои клетка в интерьере не терпят большого количества книжных полок и настенного декора.

Шторы в клетку

Клетка – простой и одновременно интересный узор, позволяющий экспериментировать в гостиной, спальне и других комнатах. Шторы в клетку в интерьере могут использоваться при любом стилевом оформлении. Они идеально смотрятся в классической кухне, приветствуется их использование и в стиле кантри. Занавески могут украшаться оборками, рюшами и лентами. Также они гармонично сочетаются с текстилем в горошек, полоску и цветочными орнаментами.

В спальне дизайнеры советуют использовать шторы в тандеме с покрывалом или подушками из той же ткани. Красиво смотрятся занавески, закрепленные на металлических кольцах. Шторы из плотной ткани способны защитить владельцев квартир, расположенных на южную сторону, от утреннего палящего солнца.

Периодически занавески необходимо чистить. Хлопок, сатин и подобные материалы можно стирать в машинке в режиме деликатной стирки. Шерсть и шелк лучше сдавать в химчистку. Пятна на шторе можно удалить при помощи мягкой щетки или валика для одежды. Жирные пятна выводятся теплой водой с наименее агрессивным моющим средством. Обработанное место можно высушить феном.

Клетка в интерьере, фото которой представлены на страницах шоппинг-клуба WESTWING, сама по себемножественна и насыщенна, поэтому использование большого количества декора может создать в квартире полнейший визуальный хаос. В грамотно продуманном дизайне интерьера она выступает в качестве умиротворяющего фактора, вносящего сдержанность и порядок в нашу сумасшедшую жизнь. Подобрать клетчатую мебель, текстиль и различные элементы декора Вы можете на распродажах клубаWESTWING. Качественное обслуживание и доступные цены Вас непременно удивят!

(PDF) Cellular Texture Generation

Hewlett Packard и IBM. Дополнительная поддержка была предоставлена ​​

NSF (ASC-89-20219) в рамках NSF/ARPA STC для Com-

puterGraphicsandScientificVisualization, DOE (DE-FG03-

92ER25134) в рамках Центра исследований в области вычислительной техники.

Biology, Фондом Бекмана, а также Национальным институтом

по борьбе со злоупотреблением наркотиками и Национальным институтом психического здоровья в рамках проекта

Human Brain Project.Все мнения, выводы, заключения,

или рекомендации, выраженные в этом документе, принадлежат авторам

и не обязательно отражают точку зрения спонсирующих

агентств.

ССЫЛКИ

[1] Джеймс Арво и Дэвид Кирк. Моделирование установок с чувствительными к среде автоматами

. В Proceedings of Ausgraph ’88, страницы 27–33,

1988.

[2] Ронен Барзель. Физическое моделирование: структурированный подход.

AcademicPress, Кембридж, Массачусетс, 1992.

[3] Роберт Л. Готовить. Теневые деревья. В ComputerGraphics (SIGGRAPH ’84

Proceedings), том 18, страницы 223–231, июль 1984 г.

[4] FC Crow. Более гибкая среда генерации изображений. В Computer Graphics

(SIGGRAPH ’82 Proceedings), том 16, страницы 9–

18, июль 1982 г.

[5] Джоди Дункан. Создание рокбастера. Cinefex: Journal of

Cinematic Illusions, 58:34–65, июнь 1994 г.

[6] Курт Флейшер. Клетки: моделирование многоклеточного развития.В обзоре

SiggraphVideo, 1994 г. Видео представлено на Siggraph94.

[7] Курт В. Флейшер. Модель развития с несколькими механизмами для

Определение самоорганизующихся структур. Кандидатская диссертация, Калифорнийский технологический институт,

, часть вычислительных и нейронных систем, июнь 1995 г.

[8] Курт В. Флейшер и Алан Х. Барр. Моделирующий стенд для изучения

многоклеточного развития: множественные механизмы

морфогенеза. В искусственной жизни III.Addison-Wesley, 1994.

[9] Дебора Р. Фаулер, Ханс Мейнхардт и Пшемыслав Прусинкевич.

Лепка ракушек. В ComputerGraphics (SIGGRAPH ’92Proceedings-

ings), том 26, страницы 379–388, июль 1992 г.

[10] Дебора Р. Фаулер, Пшемыслав Прусинкевич и Йоханнес Баттьес.

Модель спирального филлотаксиса, основанная на столкновении. В Computer Graphics

(SIGGRAPH ’92 Proceedings), том 26, страницы 361–368, июль 1992 г.

[11] Шестерня по часовой стрелке. Численные задачи с начальными значениями в обыкновенных дифференциальных

уравнениях.Prentice-Hall, EnglewoodCliffs, NJ, 1971.

[12] Goldstein. Классическая механика. Addison-Wesley, 1980.

[13] Нед Грин. Автоматы воксельного пространства: моделирование со стохастическим ростом

процессов в воксельном пространстве. В компьютерной графике (SIGGRAPH ’89

Proceedings), том 23, страницы 175–184, июль 1989 г.

[14] Джеймс Т.Каджия. Модели анизотропного отражения. InComputerGraphics

(SIGGRAPH ’85 Proceedings), том 19, страницы 15–21, июль 1985 г.

[15] Джеймс Т.Каджия и Тимоти Л. Кей. Рендеринг меха с трехмерными

текстурами. InComputerGraphics (SIGGRAPH ’89 Proceedings),

, том 23, страницы 271–280, июль 1989 г.

[16] Ганс Мейнхардт. Модели формирования биологических моделей. Academic

Press, Лондон, 1982.

[17] Гэвин Миллер и Эндрю Пирс. Шаровая динамика: связанная система частиц

для оживления вязких жидкостей. ComputersandGraphics,

13(3):305–309, 1989.

[18] Дж.Д. Мюррей. МатематическаяБиология. Springer-Verlag, NewYork, 2nd

edition, 1993.

[19] B.N. Nagorcka,V. С. Маноранджан и Дж. Д. Мюррей. Сложные пространственные

паттерна взаимодействия тканей – иллюстративная модель. Журнал

TheoreticalBiology, 128:359–374, 1987.

[20] Гаррет М. Оделл, Джордж Остер, П. Альберч и Б. Бернсайд.

механическая основа морфогенеза. DevelopmentalBiology, 85, 1981.

[21] Ханс Кёлинг Педерсен.Картирование смещения с использованием полей течения. В

Proceedingsof SIGGRAPH ’94 (Орландо, Флорида, 24–29 июля 1994 г.),

страницы 279–286. ACM Press, июль 1994 г.

[22] John Platt. Методы ограничений для нейронных сетей и компьютеров

Графика. Кандидатская диссертация, Калифорнийский технологический институт, Департамент компьютерных наук,

, Пасадена, Калифорния, , 1989.

[23] Пшемыслав Прусинкевич, Марк Джеймс и Радомир Меч. Синтетический топиарий

. В материалах SIGGRAPH ’94 (Орландо, Флорида,

, 24–29 июля 1994 г.), страницы 351–358.ACM Press, июль 1994 г.

[24] Пшемыслав Прусинкевич и Аристид Линденмайер. Алгоритмический

Красота растений. Springer-Verlag, New York, 1990.

[25] WT Reeves. Системы частиц — метод моделирования класса

нечетких объектов. АКМ транс. Графика, 2:91–108, апрель 1983 г.

[26] Уильям Т. Ривз и Рики Блау. Приближенные и вероятностные

алгоритмы затенения и рендеринга систем структурированных частиц. В

ComputerGraphics (SIGGRAPH ’85 Proceedings), том 19, страницы

313–322, июль 1985 г.

[27] Крейг В. Рейнольдс. Отары, стада и школы: модель распределенного поведения. В Computer Graphics (SIGGRAPH ’87 Proceedings),

, том 21, страницы 25–34, июль 1987 г.

[28] Karl Sims. Анимация частиц и рендеринг с использованием параллельных вычислений данных. В Computer Graphics (SIGGRAPH ’90 Proceedings), том

ume 24, страницы 405–413, август 1990 г.

[29] Karl Sims. Искусственная эволюция компьютерной графики. В Computer

Graphics (SIGGRAPH ’91 Proceedings), том 25, страницы 319–328,

, июль 1991 г.

[30] Элви Рэй Смит. Растения, фракталы и формальные языки. В Computer

Graphics (SIGGRAPH ’84 Proceedings), том 18, страницы 1–10, июль

1984.

[31] Джон Снайдер. Генеративное моделирование для компьютерной графики и САПР:

Проектирование символьных форм с использованием интервального анализа. Academic Press,

1992.

[32] Джон М. Снайдер и Алан Х. Барр. Сложные модели трассировки лучей

, содержащие тесселяции поверхности. В компьютерной графике (SIGGRAPH

’87 Proceedings), том 21, страницы 119–128, июль 1987 г.

[33] Ричард Шелиски и Дэвид Тоннесен. Моделирование поверхностей с помощью ориентированных

систем частиц. В Computer Graphics (SIGGRAPH ’92 Proceedings-

ings), том 26, страницы 185–194, июль 1992 г.

[34] Деметри Терзопулос, Джон Платт и Курт Флейшер. От гупа до

глопа: Нагрев и плавление деформируемых моделей. В GraphicsInterface

89, 1989.

[35] Алан Тьюринг. Химическая основа морфогенеза. Фил. Транс. Б.,

237, 1952.

[36] Грег Терк. Генерация текстур для произвольных поверхностей с помощью реакции

диффузии. В ComputerGraphics (SIGGRAPH ’91 Proceedings), том

ume 25, страницы 289–298, июль 1991 г.

[37] Грег Терк. Повторное замощение полигональных поверхностей. В Computer Graphics

(SIGGRAPH ’92 Proceedings), том 26, страницы 55–64, июль 1992 г.

[38] Стивен Х. Вестин, Джеймс Р. Арво и Кеннет Э. Торранс. Pre-

определение функций отражения от сложных поверхностей.В Computer

Graphics (SIGGRAPH ’92 Proceedings), том 26, страницы 255–264,

, июль 1992 г.

[39] Эндрю Уиткин, Курт Флейшер и Алан Барр. Энергетические ограничения

для параметризованных моделей. В компьютерной графике (SIGGRAPH ’87

Proceedings), том 21, страницы 225–232, июль 1987 г.

[40] Эндрю Уиткин и Майкл Касс. Текстуры реакции-диффузии. В

ComputerGraphics (SIGGRAPH ’91 Proceedings), том 25, страницы

299–308, июль 1991 г.

[41] Эндрю П. Уиткин и Пол С. Хекберт. Использование частиц для выборки и управления неявными поверхностями. InProceedingsofSIGGRAPH ’94 (Орландо,

Флорида, 24–29 июля 1994 г.), стр. 269–278. ACM Press, июль 1994 г.

248

Добавление или изменение цвета фона ячеек

Вы можете выделить данные в ячейках, используя Цвет заливки , чтобы добавить или изменить цвет фона или узор ячеек. Вот как:

1. Выберите ячейки, которые хотите выделить.

   Советы: 

   • Чтобы использовать другой цвет фона для всего рабочего листа, нажмите кнопку «Выбрать все» . Это скроет линии сетки, но вы можете улучшить читаемость рабочего листа, отобразив границы ячеек вокруг всех ячеек.

2. Щелкните Главная > стрелку рядом с Цвет заливки или нажмите клавиши ALT+H, H.

3. В разделе Тематические цвета или Стандартные цвета выберите нужный цвет.

   Чтобы использовать пользовательский цвет, щелкните Дополнительные цвета , а затем в диалоговом окне Цвета выберите нужный цвет.

   Совет:  Чтобы применить последний выбранный цвет, просто нажмите Цвет заливки .Вы также найдете до 10 последних выбранных пользовательских цветов в разделе Recent Colors .

Применение узора или эффектов заливки

Если вам нужно нечто большее, чем просто заливка сплошным цветом, попробуйте применить узор или эффекты заливки.

1. Выберите ячейку или диапазон ячеек, которые вы хотите отформатировать.

2. Щелкните Главная > Формат ячеек диалогового окна запуска или нажмите Ctrl+Shift+F.

3. На вкладке Заливка в разделе Цвет фона выберите нужный цвет.

4. Чтобы использовать шаблон с двумя цветами, выберите цвет в поле Цвет шаблона , а затем выберите шаблон в поле Стиль шаблона .

   Чтобы использовать узор со специальными эффектами, щелкните Эффекты заливки , а затем выберите нужные параметры.

   Совет:  В поле Образец можно предварительно просмотреть выбранные вами эффекты фона, узора и заливки.

Удаление цветов, узоров и эффектов заливки ячеек

Чтобы удалить любые фоновые цвета, узоры или эффекты заливки из ячеек, просто выделите ячейки.Затем щелкните Главная > стрелку рядом с Цвет заливки и выберите Без заливки .

Печать цветов ячеек, узоров или эффектов заливки цветом

Если для параметров печати задано значение Черно-белое или Черновое качество  — либо намеренно, либо из-за того, что в книге есть большие или сложные листы и диаграммы, которые вызвали автоматическое включение чернового режима — ячейки не будут печататься в цвете . Вот как это можно исправить:

1. Щелкните Макет страницы > Параметры страницы запуска диалогового окна.

2. На вкладке Лист в разделе Печать снимите флажки Черно-белое и Черновое качество .

Примечание. Если вы не видите цветов на листе, возможно, вы работаете в режиме высокой контрастности. Если вы не видите цвета при предварительном просмотре перед печатью, возможно, у вас не выбран цветной принтер.

Если вы хотите выделить текст или числа, чтобы сделать данные более заметными, попробуйте либо изменить цвет шрифта, либо добавить цвет фона в ячейку или диапазон ячеек, например:

1. Выберите ячейку или диапазон ячеек, для которых вы хотите добавить цвет заливки.

2. На вкладке Home нажмите Цвет заливки и выберите нужный цвет.

Примечание.  Эффекты заливки узором для цветов фона недоступны для Excel в Интернете. Если вы примените какой-либо файл из Excel на рабочем столе, он не появится в браузере.

Удалить цвет заливки

Если вы решите, что вам не нужен цвет заливки сразу после его добавления, просто нажмите Отменить .

Чтобы удалить цвет заливки позже, выберите ячейку или диапазон ячеек, которые вы хотите изменить, и нажмите Очистить > Очистить форматы .

границ | Полимерный состав клеточной стенки и пространственное распределение в спелых плодах банана и манго: значение для клеточной адгезии и восприятия текстуры

Введение

Банан ( Musa acuminata ) и манго ( Mangifera indica ) являются двумя важными тропическими культурами, потребляемыми во всем мире из-за их органолептических и питательных свойств. Однако консистенция их на стадии спелости заметно отличается. Текстурное восприятие фруктов определяется сложными сигналами, включающими физические и химические реакции на компоненты пищи. Текстура является вторым по значимости аспектом сенсорной приемлемости мясистых фруктов, помимо внешнего вида (Contador et al., 2015). Хотя органолептический анализ и реологическое тестирование являются классическими подходами к определению восприятия текстуры (Colin-Henrion et al., 2007; Charles et al., 2017), в последнее время утверждается, что пероральная обработка включает не только объемную реологию (например,g., вязкость), но также и поверхностные трибологические явления (например, трение и смазка), особенно на более поздних стадиях обработки полости рта (Chen and Stokes, 2012; Stokes et al., 2013; Sarkar et al., 2019). Недавно трибология успешно использовалась для понимания перорального восприятия с преобладанием поверхности с использованием эмпирических корреляций между коэффициентами трения (μ) и атрибутами ощущения во рту, такими как скользкость и пастообразность биополимерных гидрогелей (Krop et al. , 2019). На сегодняшний день трибологические измерения не использовались для количественного понимания механизмов восприятия текстуры фруктов и плодовых клеток.Влияние содержания твердых веществ и размера частиц на реологические и органолептические свойства фруктовых пюре и суспензий изучалось ранее, в частности, на яблоках (Espinosa et al., 2011). Однако роль клеточной адгезии и влияние интактных клеток или призраков клеточных стенок на оральное восприятие до сих пор неясно.

Описано, что банан и манго имеют «тающую текстуру», при которой ткань распадается в ротовой полости без пережевывания (Contador et al., 2015). Спелые плоды банана вызывают сложную текстурную реакцию, описываемую как мучнистая и слегка вяжущая текстура (Valente et al., 2011), которая контрастирует с мясистой, скользкой и сочной текстурой плодов манго (Suwonsichon et al., 2012). Оба типа плодов подвергаются климактерическому созреванию с быстрыми биохимическими и биофизическими изменениями, приводящими к размягчению плодов в течение нескольких дней после начала созревания (Ali et al. , 2004). Несколько скоординированных процессов приводят к разборке клеточной стенки и срединных пластинок, что приводит к потере тургора и разделению клеток (Brummell and Harpster, 2001).Разборка клеточных стенок широко изучалась у томатов ( Solanum esculentum ) в качестве модельной системы климактерического созревания плодов (Rose and Bennett, 1999; Wang et al., 2018). Несмотря на то, что банан был предложен в качестве модельной системы для созревания однодольных растений (D’Hont et al., 2012), мало что известно о том, как разбирается клеточная стенка банана. В спелых фруктах по сравнению с метилэстераза (PME) и целлюлаза также активировались в меньшей степени (Asif et al., 2014). Было обнаружено, что у манго (двудольных видов) во время созревания экспрессируется несколько ферментов, модифицирующих клеточную стенку, включая PL (Churasia et al., 2006), эндо-PG (Churasia et al., 2006) и бета-глюканазу (Churasia et al., 2006). и др., 2008). Плоды манго имеют тающую текстуру, аналогичную хурме ( Diospyros kaki L. ), где несколько изоформ XTH участвуют в ремоделировании клеточной стенки, ведущем к ее размягчению (Han et al., 2015). Считается, что активность ферментов клеточной стенки увеличивает растворимость пектинов и гемицеллюлоз (Muda et al., 1995; Prado et al., 2016), возможно, за счет процесса разветвления, который снижает взаимодействие полимеров (Posé et al., 2018). Как эти действия происходят в пространстве и времени во время созревания различных фруктов, и как они влияют на текстуру и оральное восприятие, неясно.

Более того, роль клеточной адгезии и специфических полимеров клеточных стенок в процессе обработки полости рта и восприятии текстуры до сих пор плохо изучена. Стоит отметить, что некоторые ферменты клеточной стенки остаются активными в оральной фазе, и их активность может влиять на текстуру.В томате активность PME была обнаружена в условиях, имитирующих пероральную обработку, и была связана со снижением вязкости в течение 1 минуты после пероральной обработки (Rabiti et al. , 2018). Кроме того, неповрежденность клеточных стенок плодов является сильным положительным фактором, определяющим вязкость фруктовых продуктов (Chu et al., 2017), и отрицательно связана с ферментативным потенциалом микробиоты (Low et al., 2015). Оба эти свойства важны для пользы для здоровья, связанной с употреблением фруктов (Dreher, 2018).

Визуализация полимеров клеточной стенки в muro с использованием зондов антител может дать представление о функции полимера (Lee et al., 2011), и этот подход предполагает потенциальную роль различных доменов пектина и ксилоглюкана в опосредовании клеточной адгезии при созревании плодов томата ( Орфила и др., 2001; Ордаз-Ортиз и др., 2009). Антитела также являются полезными инструментами для определения профиля полисахаридных эпитопов в популяциях полисахаридов, выделенных из клеточных стенок (Pattathil et al., 2010; Cornuault et al., 2014), хотя этот метод ранее не использовался для оценки полимеров, солюбилизированных во время разделения клеток. Атомно-силовая микроскопия использовалась для визуализации структуры фракций клеточных стенок плодов (Paniagua et al., 2014; Cárdenas-Pérez et al., 2018; Posé et al., 2018) и неповрежденной клеточной поверхности клеток лука (Zhang et al. др., 2016). АСМ предоставляет дополнительную структурную информацию для иммунофлуоресцентной микроскопии.

Это исследование было направлено на выяснение молекулярного механизма, лежащего в основе текстурных различий между бананом и манго.Мы использовали новую комбинацию методов в разных масштабах для анализа свойств отделенных клеток плодов и их потенциального вклада в обработку полости рта и восприятие текстуры.

Материалы и методы

Растительные материалы

плода банана ( Musa acuminata var Cavendish) и манго ( Mangifera indica var Kesar) были куплены на рынке в Лидсе, Англия. Плоды манго были отнесены к пятой стадии, были мягкими и полностью спелыми, без каких-либо признаков гниения (Nambi et al. , 2015). Плоды банана находились на седьмой стадии и имели желтый цвет, мягкую текстуру и коричневые пятна (Soltani et al., 2010). Плоды очищали от кожуры и ткань паренхимы осторожно соскабливали с помощью металлического шпателя, пропускали через сито с крупными ячейками (250 мкм) и переносили в пробирку, содержащую воду MiIliQ, до конечной суспензии 9,0 мас.%. Образец супернатанта собирали для анализа гликома солюбилизированных полимеров. Два плода каждого вида обрабатывали в качестве биологических повторов для каждого эксперимента.Репрезентативные фотографии были выбраны для маркировки и экспериментов с АСМ.

Объемная реология

Реологическую характеристику суспензий клеток манго или банана (9,0 мас.% клеток в воде MiIliQ) проводили с использованием реометра с контролируемым напряжением (Kinexus Ultra, Malvern Instruments Ltd, Worcestershire, United Kingdom). Температуру контролировали на уровне 37°C, чтобы имитировать физиологические условия. Геометрия конуса на пластине (40 мм, 4°) использовалась для измерения стационарного поведения потока в зависимости от скорости сдвига в диапазоне от 0. от 1 до 1000 с ^–1 . Результаты представлены в виде средних значений и стандартных отклонений не менее трех измерений каждого образца фруктовой суспензии. Два плода каждого вида были обработаны как биологические повторы.

Мягкая трибология

Измерения трения проводились в присутствии клеточных суспензий (9,0 мас. % клеток манго или банана в воде MilliQ) с использованием Mini Traction Machine 2 (MTM2, инструменты PCS, Лондон, Великобритания) с мягким полимерным шариком на диске. с использованием небольшой модификации ранее описанного метода (Laguna et al., 2017; Кроп и др., 2019). Трибологическая установка включала гидрофобные контактные поверхности (угол контакта с водой 108 ^∘ (Sarkar et al., 2017) с участием гладкого шара из полидиметилсилоксана (ПДМС) (радиус 6,35 мм) на гладком диске ПДМС (радиус 13 мм, толщина 4 мм). ) в камере мини-горшка.Для каждого отдельного измерения использовались свежие шарик и диск, и все измерения трения проводились при 37°C, чтобы имитировать условия полости рта. Нормальная нагрузка ( F _n ) из ​​2 Во всех экспериментах использовали N, а скорости уноса варьировали от 300 до 3 мм с ^–1 .Скорость уноса ( U ) была рассчитана по уравнению (1):

U=12⁢(UB+UD)(1)

Где, U _B и U _D — скорости шарика и диска соответственно. Соотношение слайд-ролик определяется как | U _B − U _D |/ U был зафиксирован на уровне 50%. Сила трения ( F _f = мк. F _n ) измеряли как функцию скорости захвата, а безразмерный коэффициент трения (μ) приводили в виде среднего значения и стандартного отклонения по крайней мере трех измерений каждого образца фруктовой суспензии. Два плода каждого вида были обработаны как биологические повторы.

Цитохимическое окрашивание клеточной поверхности

Для неспецифического окрашивания клеточной мембраны и содержимого: 0,05 % (вес/объем) толуидинового синего O (T3260, Sigma-Aldrich) в 0,1 М фосфатном буфере с рН 6. 8 добавляли к ткани плода в пробирке. После окрашивания в течение 5 минут окрашенные образцы помещали на предметные стекла, покрытые поли-L-лизином (Polysine, J2800AMNZ, Thermo-Scientific). Для окрашивания крахмалом ткань плода диспергировали в дистиллированной воде и помещали на предметное стекло, покрытое полизином, затем добавляли одну каплю раствора йода по Граму (

, Sigma-Aldrich) и перемешивали непосредственно на предметном стекле. Для окрашивания целлюлозы к ткани плода в пробирке добавляли 0,1% (мас./об.) красителя Calcofluor White [флуоресцентного осветлителя 28 (319945, Sigma-Aldrich)].Одну каплю окрашенного образца помещали на предметное стекло, покрытое полизином, затем подщелачивали одной каплей 10% (об./об.) NaOH. Образец исследовали с помощью инвертированного светового микроскопа для окрашивания толуидиновым синим O и йодом и УФ-флуоресцентного микроскопа для окрашивания Calcofluor White (Olympus, модель Bh3, Япония). Изображения получали с помощью цифровой камеры (Sony, модель sCMEX-3). Все окрашивание проводили при комнатной температуре.

Иммунофлуоресцентная маркировка клеточной поверхности

Ткань плода собирали, как описано выше.Поверхность плодовых клеток иммунизировали крысиными моноклональными антителами к полисахаридным эпитопам растительной клеточной стенки. Для этого эксперимента было отобрано семь антител: LM28 (Cornuault et al., 2015), LM25 (Pedersen et al., 2012), LM21 (Marcus et al., 2010), JIM5 и JIM7 (Clausen et al., 2003), LM5 (Jones et al., 1997), LM6-M (Cornuault et al., 2017). Список антител и эпитопов доступен на http://www.plants.leeds.ac.uk/pk/pdf/JPKab05.pdf. Супернатанты гибридомы антител разбавляли в 10 раз в 3% (масса/объем) обезжиренном сухом молоке (Marvel) в 10 мМ фосфатно-солевом буфере (PBS) перед использованием.Во-первых, слайды с силановым препаратом (Thermo-fisher) активировали с использованием 2,5% (об./об.) глутарового альдегида (A17876, Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в PBS, pH 7,45. Суспензию плодовых клеток (50 мкл) добавляли на предметное стекло с активированным силаном с последующей быстрой сушкой в ​​течение 10 минут на горячей пластине. Поверхностные неспецифические эпитопы блокировали 50 мкл 3% (масса/объем) обезжиренного сухого молока в 10 мМ PBS в течение 30 минут. Затем клетки плодов метили выбранными моноклональными антителами в течение 1 часа. После трехкратного промывания PBS по 5 минут клетки плодов инкубировали со 100-кратным разведением антикрысиного IgG-FITC (F1763, Sigma-Aldrich, St.Луис, штат Миссури, США) в обезжиренном сухом молоке с концентрацией 3% (масса/объем) в 10 мМ PBS в течение 1 часа с последующими тремя 5-минутными промываниями в PBS. Реагент против выцветания Citifluor AF1 (AGR1320, Agar Scientific) добавляли на предметное стекло перед исследованием под флуоресцентным микроскопом (Olympus, модель Bh3), оснащенным синей эпифлуоресценцией. Что касается отрицательного контроля, образец обрабатывали в соответствии с этапами, описанными выше, без первичных моноклональных антител. Все этапы мечения проводились при комнатной температуре.

Атомно-силовая микроскопия клеточной поверхности (АСМ)

Ткань плода собирали, как описано выше. Суспензии клеток далее пропускали через металлическое сито со средним размером ячеек (150 мкм) для удаления рыхлого крахмала, ретентат промывали водой MilliQ (3 × 50 мл) и ресуспендировали в воде MilliQ. 200 мкл клеточной суспензии наносили на покровное стекло и давали высохнуть в течение не менее 48 часов (комнатная температура) перед АСМ-визуализацией. Высушенные образцы визуализировали с помощью многомодового АСМ ^® со сканером J (Bruker, Калифорния, США) с PF QNM (количественное картирование наномеханических свойств PeakForce).Изображения были сглажены для удаления дуги в каждой строке сканирования и экспортированы в формат TIFF. Для каждого образца сканировали не менее пяти разных клеток с частотой 0,8–0,9 Гц. Для визуализации отбирались только целые отдельные клетки (т. е. клетки, которые не были прикреплены к другим клеткам), что сводило к минимуму вероятность того, что будет визуализирована внутренняя поверхность. Было выбрано пять областей на каждой клетке в областях, которые не пересекали очевидную складку или морщину, вызванную сушкой круглых клеток на плоской поверхности. Затем для статьи были отобраны репрезентативные изображения.

Получение нерастворимого в спирте остатка (AIR)

Из каждого фрукта готовили

нерастворимого в спирте остатка. Ткань плода (3 г ) гомогенизировали при 13000 г (Polytron, модель 2500 E, Швейцария) с 7 г 100% этанола в течение примерно 1 мин до получения гомогенного образца, что дало конечную концентрацию этанола 70%. . Затем образец центрифугировали при 3500 g в течение 20 мин (центрифуга Heraeus Megafuge 16R, Германия) при комнатной температуре.Супернатант удаляли, а остаток ресуспендировали в 70% (об./об.) этаноле, гомогенизировали при 13000 g в течение 30 с и центрифугировали при 5000 об/мин в течение 20 мин. Остаток неоднократно промывали серией растворителей: 80% (об./об.) этанол, 90% (об./об.) этанол, 100% (об./об.) этанол, 100% (об./об.) ацетон и метанол: хлороформ. (2:3). Эти этапы были направлены на осаждение растворимых волокон, удаление низкомолекулярных компонентов и инактивацию ферментов. Полученный AIR сушили в течение ночи в вытяжном шкафу перед экстракцией для определения профиля иммунного гликома.

Профилирование гликома клеточной стенки

Анализ

Glycome представляет собой метод, основанный на ELISA, который позволяет проводить быстрый анализ полисахаридных эпитопов, обнаруженных во фракциях солюбилизированных клеточных стенок (Pattathil et al., 2010). AIR последовательно экстрагировали 50 мМ ЦДТА, 4 М КОН и 1 мкг/мл целлюлазы 5а (NZYTech). AIR (4 мг) помещали в пробирки на 2 мл и добавляли шарикоподшипники в образец перед измельчением в Tissue Lyser при 50 Гц в течение 2 мин. Затем добавляли 50 мМ ЦДТА и растирали в течение 20 мин в лизере тканей с последующим встряхиванием пробирки в течение 40 мин и центрифугированием при 3500 g в течение 15 мин.Супернатант сохраняли как фракцию CDTA, а затем остатки подвергали следующему экстрагирующему реагенту. Остатки экстрагировали 4 М КОН с 1% NaBH _4, , получая фракцию КОН. Затем остатки обрабатывали 1 мкг/мл целлюлазы в 20 мМ трис-буфере рН 8,8 и инкубировали 2 ч при 37°С, затем центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант сохраняли в виде фракции целлюлазы. Экстрагированные фракции клеточных стенок или супернатанты из образцов с разделенными клетками разбавляли в 10 раз перед нанесением на иммуносорбентные планшеты (Nunc) в течение ночи при 4°C.Затем планшеты промывали водопроводной водой 9 раз и блокировали 5% (масса/объем) обезжиренным сухим молоком в 10 мМ PBS (M/PBS) в течение 2 часов. После промывки водопроводной водой еще девять раз добавляли моноклональные антитела в разведении 1:10 в М/ФСБ (только разведение 1:300 для каллозных антител) и инкубировали в течение 1,5 часов. Каждая лунка планшета содержала один тип антител, и каждое антитело вносили в дублирующие лунки. В анализе использовали сорок антител. Большинство из них представляли собой крысиные моноклональные антитела, за исключением антител против каллозы, которые были получены у мышей (BioSupplies, Австралия).После инкубации с первичными антителами лунки промывали водопроводной водой девять раз, затем вторичные антитела в разведении 1:1000 в M/PBS (анти-мышиные IgG-HRP для каллозных антител и анти-крысиные IgG-HRP для всех остальных антител). , оба получены от Invitrogen) наносили на 1 час. Планшеты девять раз промывали водопроводной водой с последующим добавлением субстрата для генерации сигнала. Субстрат содержал 1 М буферный раствор ацетата натрия рН 6,0, тетраметилбензидин, 6% (об./об.) перекиси водорода и дистиллированную воду в соотношении 100:10:1:1000.Реакцию останавливали добавлением 2,5 М серной кислоты, что давало желтую окраску. Силу связывания каждого антитела определяли по поглощению при 450 нм с помощью считывателя планшетов ELISA (считыватели микропланшетов Multikan Fc, Финляндия). Два плода каждого вида обрабатывали как биологические повторы, и каждый экстракт или надосадочную жидкость анализировали в повторных лунках.

Анализ данных

Для окрашивания клеток и иммунофлуоресцентной маркировки (качественный анализ) одно микроскопическое изображение было выбрано как репрезентативное из пяти захваченных изображений.Для профилирования гликомов клеточной стенки стандартное отклонение рассчитывали с использованием Microsoft Excel из двух повторных экспериментов, а коэффициент вариации <15% устанавливали в качестве приемлемого предела.

Результаты

Разделение клеток и окрашивание клеточной поверхности клеток банана и манго

Ткань паренхимы обоих плодов была спелой, мягкой, клетки легко отделялись при слабом стрессе. Окрашивание тканей выявило некоторые заметные различия в морфологии изолированных клеток (рис. 1).В ткани банана были обнаружены удлиненные, в основном неповрежденные клетки, которые оставались прикрепленными своими апикальными концами, контуры клеток четко визуализировались при окрашивании толуидиновым синим (рис. 1а). Они содержали несколько гранул крахмала, которые сильно окрашивались йодом (рис. 1б). Целостность клеточной стенки была подтверждена окрашиванием Calcofluor White (рис. 1в), которое также выявило наличие небольших отверстий, напоминающих ямочные поля (обозначены желтой стрелкой на рис. 1в), организованных на узкой полосе по длине клетки.Этот паттерн предполагает, что клетки когда-то прикреплялись вдоль этой полоски, но адгезия легко разрушалась при незначительном стрессе (например, осторожном соскабливании шпателем). Напротив, клетки манго имели более округлую форму (рис. 1d) и содержали мало гранул крахмала (рис. 1e). Окрашивание толуидиновым синим не позволяло очерчивать клетки так четко, как для банана. Окрашивание выявило овальные структуры на поверхности клеток. Нам не ясно, что это такое, но это могут быть очертания больших площадей с ямными полями. Окрашивание Calcofluor White показало большие участки клеточной стенки, которые, по-видимому, были разорваны (обозначены ^* на рис. 1f), а также ярко окрашенные овальные области, содержащие обширные поля ямок (обозначены стрелкой на рис. 1f).Локализация полей косточек как в банане, так и в манго предполагает, что они могут способствовать адгезии клеток в этих фруктах.

Рисунок 1. Микрофотографии клеток бананов, окрашенных толуидиновым синим (а) , йодом (б) и калькофлуоровым белым (в) ; и клетки манго, окрашенные толуидиновым синим (d) , йодом (e) и калькофлуорным белым (f) . Масштабная линейка = 100 мкм. Красные стрелки указывают на хорошо заметные гранулы крахмала в банане, желтые стрелки указывают на расположение полей косточек в полосках у банана и круглых косточек у манго. ^* Указывает на разрыв клеточной стенки плода манго.

Для более детального изучения распределения полимеров клеточных стенок на поверхности клеток ткани плодов метили семью моноклональными антителами, которые узнают различные эпитопы пектина и гемицеллюлозы. Как показано на рисунке 2, клеточные стенки бананов показали сильное и равномерное распределение эпитопов гемицеллюлозы, меченных антителами LM28 (анти-ксилан) и LM25 (анти-ксилоглюкан). LM21 (анти-маннан) и JIM7 (анти-метилэтерифицированный HG) показали точечную маркировку по всей клеточной стенке.Яркую флуоресценцию обнаруживали при мечении JIM5 (анти-гомогалактуронаном), с наиболее яркой маркировкой на вершине клеток, где наблюдалась клеточная адгезия. Мечение доменов рамногалактуронана-I (RG-I) с помощью LM5 (антигалактана) и LM6 (антилинейного арабинана) было менее интенсивным, хотя при мечении LM5 можно было различить полосатую структуру. Маркировка ткани манго показала другую схему маркировки. Наиболее сильное мечение наблюдалось с LM25 (анти-ксилоглюкан), за которым следовали LM5 (анти-галактан) и LM8 (анти-ксилан).Не наблюдалось точечной маркировки JIM7 (антиметилэтерифицированный HG) или LM21 (антиманнан). Мечение антителом JIM5 было слабым, но более сильное окрашивание наблюдалось на овальных участках, напоминающих поля ямок. Как и в случае с бананами, мечение LM5 и LM6 не было интенсивным. Таким образом, образцы маркировки предполагают различия в поверхностных свойствах клеток манго и бананов.

Рисунок 2. Клетки банана (a–h) и манго (i–p) , меченные антителами LM28, LM25, LM21, JIM5, JIM7, LM5 и LM6-M, наблюдаемые под флуоресцентным микроскопом с синей эпифлуоресценцией .Масштабная линейка = 50 мкм. Стрелки указывают на маркировку на кончиках банановых клеток.

Атомно-силовая микроскопия

Поверхностные свойства клеток банана и манго, отделенных сдвигом, оценивали с помощью АСМ. Сканировали только клетки, которые четко отделились (а не разорвались), чтобы избежать наблюдения за внутренними поверхностями. На рисунке 3 показаны репрезентативные изображения клеточных поверхностей с заметными различиями в поверхностных свойствах (высоте), при этом банановые клетки демонстрируют аморфную текстуру с агрегатами на поверхности, которые маскируют волокнистые структуры.Эта текстура приписывается остаткам средней ламеллы, которые не растворились во время разделения клеток.

Рис. 3. АСМ-изображения высоты клеток банана (a,b) и манго (c,d) при размерах сканирования 1 мкм (слева) и 2 мкм (справа). Крупные агрегаты на поверхности клеток банана обозначены белыми стрелками. Напротив, в клеточной стенке манго отчетливо видны фибриллярные структуры, связанные с целлюлозой/гемицеллюлозой.

С другой стороны, поверхность клеток манго выглядела чище, демонстрируя четкую сеть микрофибрилл, встроенных в более темные области матрикса.Этот внешний вид предполагает, что у манго произошло более быстрое растворение средней пластинки.

Анализ гликома в супернатантах после разделения клеток и экстрактах клеточных стенок

Мы провели анализ супернатанта, собранного из отделенных клеток, а также экстрагированных полимеров из AIR (таблица 1).

Таблица 1. Профилирование гликома клеточной стенки супернатантов и фракций разделения клеток, извлеченных из банана и манго AIR, представлено на тепловой карте.

При рассмотрении эпитопов, солюбилизированных во время разделения клеток, профили гликомов оказались сходными в образцах банана и манго. В обоих случаях пектиновые эпитопы, обнаруженные с помощью LM18, LM19, LM20, JIM5 и JIM7, имели самое высокое относительное количество, что указывает на солюбилизацию как метилированного, так и неметилированного HG в супернатанте разделения клеток. В растворимой фракции обоих плодов также обнаружен пектиновый арабинан, но не галактан. Замещенный ксилоглюкановый эпитоп, распознаваемый LM25 (ксилоглюкан с мотивами XLLG, XXLG и XXXG, где L и G демонстрируют разные замены на ксилоглюкановой основе), также был обнаружен в супернатантах обоих плодов.Основное различие между двумя фруктами, на которое следует обратить внимание, заключалось в присутствии маннана (распознаваемого антителом LM21) и ферулированного ксилана (распознаваемого антителом LM12) в супернатанте отделения клеток банана, но не в манго. Этот анализ подтверждает присутствие маннана на поверхности клеток банана, часть которого растворяется при разделении клеток. Следует отметить, что не было предпринято никаких шагов для инактивации ферментов во время экспериментов по отделению клеток, поскольку большинство процедур, используемых для инактивации ферментов, вероятно, повлияют на разделение клеток и солюбилизацию полимера.Роль эндогенных ферментов в восприятии текстуры требует дальнейшего изучения. Недавно наблюдалась активность ПМЭ при пероральной обработке помидоров (Rabiti et al., 2018).

Последовательные экстракции с помощью ЦДТА, КОН и целлюлазы извлекают полимеры клеточных стенок из воздуха. В целом уровень растворимых эпитопов был выше в манго по сравнению с бананом. В частности, ЦДТА солюбилизировал больше HG и эпитопов ксилоглюкана из AIR манго по сравнению с бананом. Маннан был солюбилизирован из обоих фруктов с помощью CDTA, что позволяет предположить, что он легко экстрагируется.Эпитоп LM5 был очень распространенным во всех фракциях манго, но обнаруживался только в незначительных количествах, обнаруженных в банане. Эпитопы разветвленного галактана, обнаруженные с помощью LM26, были обнаружены на низких уровнях во всех фракциях манго, но не в банане. Относительное содержание AGP и экстенсинов было выше в манго по сравнению с бананом для большинства используемых антител. Анализ гликома позволяет проводить экспресс-анализ полисахаридных эпитопов, обнаруженных во фракциях солюбилизированных клеточных стенок (Pattathil et al., 2010). Однако он не позволяет количественно определять полимеры.

Объемная реология

На рис. 4А показано, что водные суспензии клеток как манго, так и банана демонстрируют четкое поведение при сдвиге, при этом кажущаяся вязкость показывает снижение на три порядка в зависимости от скорости сдвига в пределах экспериментального окна. Наблюдаемое сдвиговое истончение этих клеточных суспензий может быть связано с вызванным сдвиговым потоком разрушением тех агрегатов клеток банана или манго на отдельные клетки, которые выравнивались в направлении потока, как показано на схеме (рис. 4C).

Рисунок 4. Кажущаяся вязкость как функция скорости сдвига (A) и коэффициент трения как функция скорости захвата (B) для суспензий клеток манго и банана с соответствующими схемами, показанными для реологии (C) и явления трибологии (BL, граничный режим смазки; ML, смешанный режим смазки) (D) . Вода MilliQ использовалась в качестве контроля как в реологических, так и в трибологических экспериментах. Столбики погрешностей представляют собой стандартное отклонение по крайней мере трех измерений.

Примечательно, что суспензия банановых клеток показала определенную предельную вязкость при нулевой скорости сдвига при 10 Па·с и второе ньютоновское плато при 3 × 10 ^–3 Па·с. С другой стороны, суспензия клеток манго демонстрировала экстремальное истончение при сдвиге, при этом значения плато не наблюдались до скорости сдвига 100 с ^-1 . Более важным здесь является тот факт, что обе системы показали очень сходную вязкость (0,05 Па·с) ( p > 0,05) при скорости сдвига при пероральном приеме 50 с ^–1 (Ong et al., 2018), а также аналогичные значения конечной вязкости при 100 с и выше ^–1 . Модуль Юнга растительных клеток, измеренный с помощью зонда АСМ, может составлять от 100 кПа до 1 МПа (Radotić et al., 2012; Zdunek, Kurenda, 2013). Даже при самых высоких скоростях сдвига (1000 с 90 479 –1 90 480 ), используемых в этом исследовании, напряжение сдвига на клетках, создаваемое несущей жидкостью, не может превышать 10 Па. Следовательно, можно предположить, что обе системы сохраняют интактные клетки после сдвиг, как схематически показано на рисунке 4C, обеспечивая структурные аспекты с более высоким сопротивлением потоку по сравнению с водой.

Мягкая трибология

Смазочные характеристики суспензий клеток манго и банана показаны на рисунке 4B, где коэффициент трения (μ) нанесен в зависимости от скорости захвата. Для целей сравнения также показан график зависимости μ от скорости уноса для воды Milli-Q. Режим граничной смазки обычно встречается при самых низких скоростях уноса (≥10 мм с ^– 1) и характеризуется относительно высокими значениями μ, не проявляющими зависимости от скорости (сухое трение).На рисунке 4B граничный режим четко наблюдается как для суспензий клеток манго, так и для банановых клеток. Независимо от типа плода обе клеточные суспензии показали одинаковые значения μ ( p > 0,05) в режиме граничной смазки, что значительно ниже, чем у воды (рис. 4В). Это указывает на смазочное поведение.

Учитывая размер клеток (100–150 мкм в диаметре), крайне маловероятно, что любой из типов клеток попадет в зону контакта. Даже если бы они вошли в зону контакта, они бы сплющились (Sarkar et al., 2017; Torres et al., 2018) или разорвались из-за высокого давления внутри конфайнмента. Таким образом, такое снижение значений µ в граничном режиме свидетельствует о том, что оно произошло не за счет вовлечения интактных клеток (если они остались), а за счет растворимых полимеров в непрерывной фазе.

Эти растворимые полимеры, вероятно, адсорбировались на поверхностях и образовывали пленки толщиной в несколько молекул (схематично показано на рисунке 4D) и уменьшали μ по сравнению с водой ( p < 0.05). Это замечательное поведение граничной смазки отличается от поведения призраков гранул крахмала, наблюдаемых в предыдущем отчете (Zhang et al., 2017), где их профили граничной смазки были близки к воде из-за присутствия неадсорбирующих полимеров крахмала в непрерывной фазе.

При увеличении скорости уноса (≥10 мм с ^–1 ) кривые показали смешанный режим смазки с уменьшением значений μ. Снижение μ в этом режиме связано с частичным разделением контактных поверхностей прерывистым слоем смазки (Sarkar et al., 2019), где давление воспринимается как смазкой, так и поверхностями. Как видно на рисунке 4B, это смешанный режим, когда тип клеток проявляет отличительные свойства по своим смазочным свойствам. В частности, клетки манго с почти сферическим внешним видом (размером около 150 мкм) демонстрировали гораздо более быстрое начало режима смешанного смазывания (≥10 мм с ^–1 ) с резким снижением μ (μ < 0,05) при оральных скоростях (50 мм с ^–1 ). В случае банановых клеток эллипсоидальной формы граничный режим был расширен до 100 мм с 90 479 -1 90 480 (рис. 4B), что говорит о том, что существует ограниченная вероятность того, что банановые клетки вступали в контакт с орально соответствующими скоростями.В этом случае углеводные полимеры, солюбилизированные во время разделения клеток, могут оказывать влияние на реологические и трибологические свойства клеточных суспензий.

Обсуждение

Предполагается, что разделение клеток

из-за солюбилизации полимеров средней пластинки, а также разборка первичной клеточной стенки способствуют восприятию текстуры спелых фруктов. Результаты этого исследования показывают, что стенки клеток банана разбираются иначе, чем стенки клеток манго во время размягчения, связанного с созреванием.Клетки банана очень легко отделяются при стрессе, но остаются, по-видимому, неповрежденными, что свидетельствует о слабой средней пластинке, но более сильных первичных стенках. Согласно АСМ, банановые клетки, по-видимому, сохраняют агрегированный материал на поверхности, что здесь предполагается как остатки средней пластинки. Эти агрегатные структуры напоминают структуры, наблюдаемые с помощью АСМ экстрагированных пектинов из незрелой клубники (Paniagua et al., 2014), но они впервые наблюдаются непосредственно в muro . Иммунофлуоресцентная микроскопия позволила предположить, что эти агрегаты представляют собой метилэтерифицированный HG или маннан, которые появляются в виде точечной метки на поверхности клеток.Галактан также, по-видимому, имеет отчетливую картину мечения на поверхности, которая предполагает агрегацию на поверхности клетки. Кроме того, профилирование гликома подтвердило наличие пектинов и маннанов в супернатанте отделенных банановых клеток. Было показано, что маннаны являются основными компонентами стенок клеток бананов с относительно хорошей растворимостью (Shiga et al., 2017). Изолированные маннаны образуют слабые гели, которые легко ломаются и деформируются при деформации (Ben-Zion and Nussinovitch, 1997). Это свойство может быть очень полезным для банана, чтобы поддерживать слабую адгезию между клетками, которая легко разрушается с помощью механической силы, без необходимости ферментативного разрушения.Неясно, связано ли это поведение разделения клеток каким-либо образом с распространением семян или оно было выбрано в результате селекции человека. Предполагается, что маннаны и другие гемицеллюлозы играют роль в адгезии клеток при созревании плодов томата (Ordaz-Ortiz et al., 2009). Присутствие ферулированного ксилана в супернатанте сепарации клеток является неожиданным, поскольку в норме они экстрагируются из нерастворимых фракций клеточных стенок (Schendel et al., 2016; Ruthes et al., 2017) и локализуются в околоплоднике и алейроновых слоях затвердевающих клеточных стенок в развивающиеся зерна кукурузы (Chateigner-Boutin et al., 2016). Их присутствие не было обнаружено в плодах бананов, и их роль требует дальнейшего изучения.

Целостность банановых клеток, их размер и форма (высокое соотношение сторон (длина/диаметр), т. е. 2-4:1) снижают вероятность проникновения между поверхностями ротовой полости, т. е. языком и небом, что приводит к возможному восприятию терпкости. Действительно, банановые клетки были исключены из зоны контакта, как схематично показано на рисунке 4D, что привело к некоторой степени шероховатости, поскольку клетки не уменьшали трение.Агрегаты клеток манго или банана, наблюдаемые на рисунке 1, скорее всего, представляли собой большую эффективную объемную долю, чем доля составляющих их отдельных клеток, и, следовательно, давали повышенные значения вязкости при низких скоростях сдвига (10 ^–1 с ^–1 ) ( Genovese, 2012; Moelants et al., 2014). Клетки банана также остаются неповрежденными во время жевания и желудочно-кишечного пищеварения (Low et al., 2015; Chu et al., 2017), и эта устойчивость была очевидна в экспериментах по трению, когда клетки банана не разрушались при более высоких скоростях сдвига.Упругость можно объяснить более высокой деформируемостью или более высокой механической прочностью. Оба могут привести к меньшему разрыву. Необходимы дальнейшие эксперименты с АСМ, в которых измеряется механическая прочность клеточных стенок, для оценки свойств целых банановых клеток. Появляются последствия для здоровья неповрежденных клеточных стенок. Было показано, что клетки банана менее восприимчивы к ферментации микробиоты по сравнению с клетками манго (Low et al., 2015). Между тем было показано, что полисахариды, солюбилизированные из банановой мякоти, включая маннаны, пектины и AGP, вызывают иммуномодулирующие реакции, полезные для здоровья кишечника (Shiga et al., 2017). В супернатантах разделения клеток были обнаружены пектины и маннаны, что подтверждает их легкую растворимость.

Клетки манго, с другой стороны, как разделены, так и разорваны. Поверхности разделенных клеток, наблюдаемые с помощью АСМ, свидетельствовали о более выраженной разборке средней пластинки и клеточных стенок в этих областях. Однако более высокая склонность клеток манго к разрыву предполагает сильную клеточную адгезию в других областях, которая, вероятно, связана с полями ямок. Физические, химические и биологические изменения клеточных стенок манго во время созревания были изящно изучены с использованием ряда методов (Cárdenas-Pérez et al., 2018). Высокая активность ФМЭ и эндо-ФГ на более поздних стадиях созревания приводила к повышенной растворимости пектина, более коротким и менее организованным полимерам (по данным АСМ) и механически более слабым клеточным стенкам. Эти молекулярные изменения коррелировали с более мягкими текстурами в тканях (Cárdenas-Pérez et al., 2018). Эти наблюдения подтверждаются здесь, поскольку стенки клеток манго оказались деформируемыми при слабом сдвиге, что привело к образованию слоя, снижающего трение в экспериментах по трибологии. Основными полимерами, солюбилизируемыми при разделении клеток манго, были в основном пектины и ксилоглюканы, тогда как маннан растворялся только при химической обработке.Их солюбилизация и разрушение клеточной стенки в целом объясняется активностью эндогенных ферментов клеточной стенки во время созревания, включая PME, endo-PG, PL и XTH (Churasia et al., 2006, 2008). Солюбилизированный материал также может способствовать более быстрому началу режима смешанной смазки в клетках манго, что можно интерпретировать как гладкое и скользкое ощущение во рту.

Результаты объемной реологии показывают, что суспензии клеток манго и банана имеют одинаковую объемную вязкость при соответствующих скоростях сдвига при пероральном приеме и, следовательно, могут быть экстраполированы для получения сходного восприятия «толщины во рту» на начальных стадиях пероральной обработки.Но существенные различия в их биосмазывающем поведении могут объяснить их различные текстурные характеристики на более поздних стадиях обработки, которые включают трение между поверхностями полости рта (например, языком и небом). Например, более низкое трение между мягкими контактными поверхностями в этих трибологических экспериментах (имитация языка и ротового неба) в случае клеток манго связано с включением клеток манго между этими контактными поверхностями при скоростях, соответствующих ротовой полости (рис. 4). Такое более низкое трение может отражаться как «гладкое» сенсорное восприятие после пероральной обработки манго, поскольку можно предположить, что язык отделен от ротового неба тонким слоем клеток манго и не трется о ротовое небо.С другой стороны, в случае банановых клеток они не вступали в контакт (рис. 4D), что можно было бы интерпретировать в реальной жизни при оральной обработке, поскольку язык терся о нёбо в отсутствие каких-либо клеток, что приводило к повышенному трению, которое может быть отражено как «грубое» или «вяжущее восприятие». Сочетание реологии и трибологии с анализом клеточных стенок, использованное в этом исследовании впервые, предлагает уникальный подход к механистическому пониманию вклада клеток и полимеров клеточных стенок в восприятие текстуры спелых фруктов.Кроме того, такие знания можно также использовать для количественного понимания механизмов, лежащих в основе органолептических ощущений во рту во фруктах, а также в полутвердых пищевых продуктах, таких как фруктовые пюре и детское питание с высоким содержанием фруктов, где одной объемной реологии недостаточно для механистического объяснения поверхностных взаимодействий. возникающие на более поздних стадиях устной обработки. Будущие исследования необходимо проводить с различными концентрациями клеточных суспензий, чтобы четко изучить влияние объемной доли клеток, модуль упругости клеток, роль слюны и взаимодействие слюны как с клетками, так и с полимерами клеточной стенки.Инструментальные исследования должны сопровождаться количественным органолептическим анализом для изучения корреляции инструмент-привкус во рту.

Доступность данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой рукописи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок любому квалифицированному исследователю.

Вклад авторов

CO и YB-A задумали исследовательский проект. GR и SA выполнили микроскопию и эксперименты с гликомом. Компания EA-R провела объемные реологические и трибологические эксперименты.HL провел эксперименты с АСМ под руководством CO и SC. GR, SA, EA-R, AS и CO проанализировали данные. GR, CO и AS написали рукопись. YB-A и JPK критически рассмотрели и доработали рукопись.

Финансирование

HL был профинансирован EPSRC-SOFI CDT Ph.D. стипендия при поддержке PepsiCo Inc. «Взгляды и мнения, выраженные в данной презентации, принадлежат автору и не обязательно отражают позицию или политику PepsiCo Inc.» SA финансировалась за счет гранта Leverhume Trust RPG-2016-136.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Сноски

Каталожные номера

Али, З.М., Чин, Л.Х., и Лазан, Х. (2004). Сравнительное исследование ферментов, разрушающих стенки, модификаций пектина и размягчения во время созревания выбранных тропических фруктов. Растениевод. 167, 317–327.

Академия Google

Асиф, М. Х., Лахвани, Д., Патхак, С., Гупта, П., Баг, С. К., Нат, П., и др. (2014). Транскриптомный анализ тканей спелых и незрелых плодов банана позволяет выявить основные метаболические сети, участвующие в процессе созревания плодов. BMC Растение Биол. 14:15. doi: 10.1186/s12870-014-0316-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бен-Цион, О., и Нуссинович, А. (1997). Прогноз деформируемости при сжатии многослойных гелей и текстурированных фруктов, склеенных с помощью трех различных методов склеивания. Пищевой гидроколл. 11, 253–260.

Академия Google

Браммелл, Д. А., и Харпстер, М. Х. (2001). Метаболизм клеточной стенки при размягчении и качестве плодов и манипуляции с ним у трансгенных растений. Завод Мол. биол. 47, 311–340.

Реферат PubMed | Академия Google

Cádenas-Pérez, S., Chanona-Pérez, J.J., Güemes-Vera, N., Cybulska, J., Szymanska-Chargot, M., Chylinska, M., et al. (2018). Структурно-механические и ферментативные исследования пектина и клетчатки при созревании манго. Углевод. Полим. 196, 313–321. doi: 10.1016/j.carbpol.2018.05.044

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чарльз М., Эндрицци И., Апреа Э., Замбанини Дж., Бетта Э. и Гаспери Ф. (2017). Динамические и статические сенсорные методы изучения роли аромата во вкусе и текстуре: мультисенсорный подход к восприятию яблок. Качество пищевых продуктов. Предпочитать. 62, 17–30.

Академия Google

Шатенье-Бутен, А.-Л., Ордаз-Ортис, Дж.J., Alvarado C., Bouchet B., Durand S., Verhertbruggen Y. и соавт. (2016). Развитие околоплодника кукурузы: модель для изучения синтеза арабиноксилана и ферулоилирования. Фронт. Растениевод. 7:1476. doi: 10.3389/fpls.2016.01476

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чен, Дж., и Стоукс, Дж. Р. (2012). Реология и трибология: два различных режима ощущения текстуры пищи. Trends Food Sci. Технол. 25, 4–12.

Академия Google

Чурасия, А., Сане, В.А., и Нат, П. (2006). Дифференциальная экспрессия пектатлиазы при размягчении манго после сбора урожая этиленом (Mangifera indica var. Dashehari) . Физиол. Растение. 128, 546–555.

Академия Google

Chourasia, A., Sane, V.A., Singh, R.K., and Nath, P. (2008). Выделение и характеристика гена MiCel1 из манго: экспрессия, связанная со созреванием, и повышенная активность эндоглюканазы во время размягчения. Регулятор роста растений. 56, 117–127.

Академия Google

Чу, Дж., Игбетар, Б.Д., и Орфила, К. (2017). Волокнистые клеточные структуры присутствуют в коммерческом фруктовом коктейле и остаются неповрежденными во время имитации пищеварения. Дж. Нутр. Пищевая наука. 7:576.

Академия Google

Clausen, M.H., Willats, WG, and Knox, JP (2003). Синтетические метилгексагалактуронатные гаптеновые ингибиторы антигомогалактуроновых моноклональных антител LM7, JIM5 и JIM7. Углевод.Рез. 338, 1797–1800 гг.

Реферат PubMed | Академия Google

Колин-Хенрион, М., Кувелье, Г., и Ренар, C.M.G.C. (2007). Текстура протертых фруктов и овощей. Steward Postharvest Rev. 3, 1–14.

Академия Google

Контадор Л., Шинья П. и Инфанте Р. (2015). Фенотипирование текстуры в свежих мясистых фруктах. науч. Хортик. 193, 40–46.

Академия Google

Корнуо, В., Буффетто, Ф., Маркус, С.Э., Крепо, М.-Ж., Гийон, Ф., Рале, М.-К., и др. (2017). LM6-M: крысиное моноклональное антитело с высокой авидностью к пектиновому αα-1,5-L-арабинану. биоРксив 161604.

Академия Google

Cornuault, V., Buffetto, F., Rydahl, M.G., Marcus, S.E., Torode, T.A., Xue, J., et al. (2015). Моноклональные антитела указывают на малочисленные связи между гетероксиланом и другими гликанами клеточных стенок растений. Планта 242, 1321–1334. doi: 10.1007/s00425-015-2375-4

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Корнуо, В., Manfield, I.W., Ralet, M.C., and Knox, J.P. (2014). Хроматография с обнаружением эпитопов: метод анализа структурной неоднородности и взаимосвязей гликанов матрикса клеточной стенки растений. Завод J. 78, 715–722. doi: 10.1111/tpj.12504

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Д’Он, А., Дено, Ф., Ори, Дж. М., Бауренс, Ф. К., Каррил, Ф., Гарсмёр, О., и соавт. (2012). Геном банана (Musa acuminata) и эволюция однодольных растений. Природа 488, 213–217. doi: 10.1038/nature11241

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эспиноза, Л., То, Н., Симоно, Р., Ренар, К.М.Г.К., Биау, Н., и Кувелье, Г. (2011). Влияние обработки на реологические, структурные и органолептические свойства яблочного пюре. Проц. Пищевая наука. 1, 513–520.

Академия Google

Дженовезе, Д. Б. (2012). Сдвиговая реология твердосферных, дисперсных и агрегатированных суспензий и композитов наполнитель-матрица. Доп. Сб. Интерфейс наук. 17, 1–16. doi: 10.1016/j.cis.2011.12.005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хан, Ю., Чжу, К., Чжан, З., Мэн, К., Хоу, Ю., Бан, К., и др. (2015). Анализ генов ксилоглюкан-эндотрансгликозилазы/гидролазы (XTH) и различных ролей изоферментов во время развития плодов хурмы и послеуборочного размягчения. PLoS One 10:e0123668. doi: 10.1371/journal.pone.0123668

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Джонс, Л., Seymour, G.B., and Knox, J.P. (1997). Локализация пектинового галактана в клеточных стенках томата с использованием моноклонального антитела, специфичного к (1-> 4)-бета-D-галактану. Завод физиол. 113, 1405–1412.

Реферат PubMed | Академия Google

Кроп, Э. М., Хетерингтон, М. М., Холмс, М., Микель, С., и Саркар, А. (2019). О связи реологии и оральной трибологии с сенсорными свойствами гидрогелей. Пищевой гидроколл. 88, 101–113.

Академия Google

Лагуна, Л., Фаррелл Г., Брайант М., Морина А. и Саркар А. (2017). Связь реологии и трибологии коммерческих молочных коллоидов с сенсорным восприятием. Функц. 8, 563–573.

Академия Google

Лоу, Д.Ю., Уильямс, Б.А., Дарси, Б.Р., Фланаган, Б.М., и Гидли, М.Дж. (2015). Ферментация in vitro пережеванного манго и банана: размер частиц, влияние крахмала и сосудистых волокон. Функц. 6, 2464–2474. дои: 10.1039/c5fo00363f

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Маркус, С.E., Blake, A.W., Benians, T.A., Lee, K.J., Poyser, C., Donaldson, L., et al. (2010). Ограниченный доступ белков к маннановым полисахаридам в интактных клеточных стенках растений. Завод Ж. 64, 191–203. doi: 10.1111/j.1365-313X.2010.04319.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Moelants, K.R.N., Cardinaels, R., Van Buggenhout, S., Van Loey, A.M., Moldenaers, P., and Hendrickx, M.E. (2014). Обзор взаимосвязей между обработкой, структурой пищевых продуктов и реологическими свойствами пищевых суспензий на основе растительных тканей. Компр. Преподобный Food Sci. Пищевая безопасность 13, 241–260.

Академия Google

Муда, П., Сеймур, Г.Б., Эррингтон, Н., и Такер, Г.А. (1995). Композиционные изменения полимеров клеточных стенок при созревании плодов манго. Углевод. Полим. 26, 255–260.

Академия Google

Намби, В. Е., Тангавел, К., и Хесудас, Д. М. (2015). Научная классификация сроков созревания и разработка диаграммы цветов для индийского манго ( Mangifera indica L.) с помощью многофакторного кластерного анализа. науч. Хортик. 193, 90–98.

Академия Google

Онг, Дж. Дж., Стил, К. М., и Дуйзер, Л. М. (2018). Оспаривание предположений относительно скорости сдвига во время ротовой полости и глотания, основанное на сенсорном тестировании загущенных жидкостей. Пищевой гидроколл. 84, 173–180. doi: 10.1016/j.foodhyd.2018.05.043

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ордаз-Ортис, Дж. Дж., Маркус, С.Э. и Нокс, Дж. П. (2009). Анализ микроструктуры клеточной стенки указывает на участие полисахаридов гемицеллюлозы в адгезии клеток в паренхиме околоплодника плодов томата. Мол. Завод 2, 910–921. doi: 10.1093/mp/ssp049

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Orfila, C., Seymour, G.B., Willats, W.G.T., Huxham, I.M., Jarvis, M.C., Dover, C.J., et al. (2001). Измененный гомогалактуронан средней пластинки и нарушенное отложение (1 -> 5)-альфа-L-арабинана в околоплоднике Cnr, созревающего мутанта томата. Завод физиол. 126, 210–221.

Реферат PubMed | Академия Google

Паниагуа, К., Позе, С., Моррис, В.Дж., Кирби, А.Р., Кесада, Массачусетс, и Меркадо, Дж.А. (2014). Размягчение фруктов и разборка пектина: обзор наноструктурных модификаций пектина, оцененных с помощью атомно-силовой микроскопии. Энн. Бот. 114, 1375–1383. doi: 10.1093/aob/mcu149

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Паттатил, С., Авчи, У., Baldwin, D., Swennes, A.G., Mcgill, J.A., Popper, Z., et al. (2010). Комплексный набор моноклональных антител к гликанам клеточной стенки растений. Завод физиол. 153, 514–525. doi: 10.1104/стр.109.151985

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Pedersen, H.L., Fangel, J.U., McClary, B., Ruzanski, C., Rydahl, M.G., Ralet, M.-C., et al. (2012). Универсальные олигосахаридные микроматрицы высокого разрешения для исследований гликобиологии растений и клеточных стенок. J. Biol. хим. 287, 39429–39438. doi: 10.1074/jbc.M112.396598

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Посе, С., Паниагуа, К., Матас, А.Дж., Ганнинг, А.П., Моррис, В.Дж., Кесада, М.А., и соавт. (2018). Наноструктурный взгляд на процесс разборки клеточной стенки во время созревания плодов и послеуборочного хранения с помощью атомно-силовой микроскопии. Trends Food Sci. Технол. 87, 47–58.

Академия Google

Прадо, С.Б.Р. Д., Мелфи П. Р., Кастро-Алвес В. К., Броэтто С. Г., Араужо Э. С., Насименто Дж. Р. О. Д. и др. (2016). Физиологическая деградация пектина в клеточных стенках папайи: высвобождение длинноцепочечных галактуронананов, полученных из нерастворимых фракций во время послеуборочного созревания плодов. Фронт. Растениевод. 7:1120. doi: 10.3389/fpls.2016.01120

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Рабити Д., Орфила К., Холмс М., Бордони А. и Саркар А. (2018).Пероральная обработка сырых помидоров in vitro: новый взгляд на роль эндогенных фруктовых ферментов. J. Текстурный стержень. 49, 351–358. doi: 10.1111/jtxs.12338

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Радотич, К., Родуит, К., Симонови, Дж., Хорничек, П., Фанкхаузер, К., Мутавджи, Д., и соавт. (2012). Томография жесткости атомно-силовой микроскопии живых клеток Arabidopsis thaliana выявляет механические свойства поверхностных и глубоких слоев клеточной стенки во время роста. Биофиз. J. 103, 386–394. doi: 10.1016/j.bpj.2012.06.046

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Роуз, Дж.К.С., и Беннетт, А.Б. (1999). Совместная разборка целлюлозно-ксилоглюкановой сети клеточных стенок растений: параллели между расширением клеток и созреванием плодов. Trends Plant Sci. 4, 176–183.

Реферат PubMed | Академия Google

Рутес А.С., Мартинес-Абад А., Тан Х.-Т., Булоне В. и Вилаплана Ф.(2017). Последовательное фракционирование ферулоилированных гемицеллюлоз и олигосахаридов из пшеничных отрубей с использованием субкритической воды и ксиланолитических ферментов. Зеленый хим. 19, 1919–1931.

Академия Google

Саркар А., Андабло-Рейес Э., Брайант М., Доусон Д. и Невилл А. (2019). Смазывание мягких поверхностей полости рта. Курс. мнение Сб. Интерфейс наук. 39, 61–75.

Академия Google

Саркар А., Канти Ф., Гулотта А., Мюррей Б.С.и Чжан, С. (2017). Водная смазка, структура и реологические свойства частиц микрогеля сывороточного белка. Ленгмюр 33, 14699–14708. doi: 10.1021/acs.langmuir.7b03627

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шендель, Р. Р., Мейер, М. Р., и Бунзель, М. (2016). Количественное профилирование боковых цепей ферулоилированного арабиноксилана из клеточных стенок злаков. Фронт. Растениевод. 6:1249. doi: 10.3389/fpls.2015.01249

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шига, Т.М., Карпита, Н.К., Лайоло, Ф.М., и Корденунси-Лысенко, Б.Р. (2017). Два сорта бананов различаются по составу потенциально иммуномодулирующего маннана и арабиногалактана. Углевод. Полим. 164, 31–41. doi: 10.1016/j.carbpol.2017.01.079

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Солтани М., Алимардани Р. и Омид М. (2010). Прогнозирование качества бананов на стадии созревания с помощью емкостной сенсорной системы. австр. J. Crop Sci. 4, 443–447.

Академия Google

Стоукс, Дж. Р., Бем, М. В., и Байер, С. К. (2013). Пероральная обработка, текстура и ощущение во рту: от реологии до трибологии и не только. Курс. мнение Сб. Интерфейс наук. 18, 349–359.

Академия Google

Сувонсичон, С., Чемберс, И., Конгпенсук, В., и Упадиссакун, К. (2012). Сенсорная лексика манго в зависимости от сортов и стадий зрелости. J. Sens. Stud. 27, 148–160.

Академия Google

Торрес, О., Андабло-Рейес, Э., Мюррей, Б.С., и Саркар, А. (2018). Частицы эмульсионного микрогеля как высокоэффективные биосмазочные материалы. Приложение ACS Матер. Интерфейсы 10, 26893–26905. дои: 10.1021/acsami.8b07883

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Валенте М., Рибейр Ф., Селф Г., Бертио Л. и Ассемат С. (2011). Инструментальная и сенсорная характеристика текстуры плодов манго. J. Food Qual. 34, 413–424.

Академия Google

Ван, Д., Йейтс, Т. Х., Улуисик, С., Роуз, Дж. К. К., и Сеймур, Дж. Б. (2018). Смягчение фруктов: новый взгляд на роль пектина. Trends Plant Sci. 23, 302–310. doi: 10.1016/j.tplants.2018.01.006

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Здунек, А., и Куренда, А. (2013). Определение упругих свойств клеток плодов томата с помощью атомно-силового микроскопа. Датчики 13, 12175–12191. doi: 10.3390/s1305

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжан, Б., Selway, N., Shelat, KJ, Dhital, S., Stokes, JR, and Gidley, MJ (2017). Трибология суспензий набухших крахмальных зерен кукурузы и картофеля. Углевод. Полим. 155, 128–135. doi: 10.1016/j.carbpol.2016.08.064

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжан Т., Чжэн Ю. и Косгроув Д. Дж. (2016). Пространственная организация микрофибрилл целлюлозы и полисахаридов матрикса в первичных клеточных стенках растений по данным многоканальной атомно-силовой микроскопии. Завод Ж. 85, 179–192. doi: 10.1111/tpj.13102

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Инструмент для количественной оценки текстуры, неровностей и распространения одиночных клеток

Abstract

Ряд недавних исследований показал, что форма клетки и текстура цитоскелета могут использоваться в качестве чувствительных индикаторов физиологического состояния клетки. Однако использование этой информации требует разработки количественных показателей, которые могут описать соответствующие аспекты формы клеток.В этой статье мы разрабатываем набор инструментов TISMorph, который рассчитывает набор количественных показателей для удовлетворения этой потребности. Некоторые из представленных здесь мер использовались ранее, в то время как другие являются новыми и обладают желательными свойствами для количественной оценки формы и текстуры клеток. Эти показатели, широко классифицируемые по категориям показателей текстуры, неравномерности и распространения, проверяются путем их использования для различения клеточных линий остеосаркомы, обработанных различными цитоскелетными препаратами. Мы обнаруживаем, что, хотя конкретные задачи классификации часто полагаются на несколько мер, они не одинаковы для всех задач классификации, что требует использования всего набора мер для классификации и различения.Мы предоставляем подробные описания мероприятий, а также пакет TISMoph для их реализации. Количественные морфологические измерения, охватывающие различные аспекты морфологии клеток, помогут улучшить крупномасштабный количественный анализ на основе изображений, который становится новой областью биологических данных.

Образец цитирования: Ализаде Э., Сюй В., Касл Дж., Фосс Дж., Прасад А. (2019) TISMoph: инструмент для количественной оценки текстуры, неравномерности и распространения одиночных клеток. ПЛОС ОДИН 14(6): е0217346.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217346

Редактор: Стивен М. Абель, Университет Теннесси, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ

Поступила в редакцию: 21.11.2018; Принято: 9 мая 2019 г.; Опубликовано: 3 июня 2019 г.

Copyright: © 2019 Alizadeh et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные доступны в рукописи и ее вспомогательных информационных файлах.

Финансирование: Мы признательны за поддержку гранта КАРЬЕРЫ Национального научного фонда (www.nsf.gov) (PHY-1151454) Ашоку Прасаду.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Форма клеточного распространения на подложке определяется балансом между внутренними и внешними силами, действующими на границу клетки.Клетка прилагает силы и реагирует на внешние силы со стороны внеклеточного матрикса (ECM) или соседних клеток с помощью молекулярных моторов и клеточного цитоскелета, который, таким образом, является основным фактором, определяющим форму клетки [1, 2]. Цитоскелет представляет собой сложную сеть, состоящую из трех основных видов филаментов — f-актина, микротрубочек и промежуточных филаментов, — которые образуют сшитую динамическую сеть в цитоплазме, придавая форму и структуру клетке [1, 3]. Наиболее динамичной составляющей цитоскелета, которая особенно важна для генерации силы и подвижности, является филаментозная актиновая (f-актиновая) сеть [4].Сеть f-актина принимает непосредственное участие в формировании ламеллиподий и филоподий посредством полимеризации f-актина против клеточной мембраны [5]. Третий вид клеточных выпячиваний, пузырьков, является результатом отсоединения кортикальной актиновой сети от клеточной мембраны [6], и было показано, что выпуклые формы прикрепленных клеток являются результатом сократимости актина, управляемой миозином-II [7].

Сеть f-актина также глубоко вовлечена в генерацию силы, восприятие силы и механотрансдукцию.Сократительные силы, генерируемые миозиновыми моторами в сетях цитоскелета, растяжение мембраны, вызванное полимеризацией актина, изменения осмотического давления при открытии водных или ионных каналов, являются примерами внутренних сил, которые играют роль в форме клетки. Внешние силы, приводящие к изменению формы, действуют через соседние клетки или ВКМ [8]. Актиновые филаменты могут генерировать, а также сопротивляться механическим напряжениям и деформации клеток. Но они также могут со временем реорганизоваться и изменить свою структуру, тем самым иногда ослабляя внешние стрессы.Различные механические свойства клеточного цитоскелета и внеклеточного матрикса приведут к разным формам клеток. Таким образом, f-актиновая сеть в первую очередь отвечает за форму, приобретаемую адгезивной клеткой. Из этого следует, что структура сети f-actin должна быть связана с общей формой клетки, хотя точная связь между ними, вероятно, будет сложной и нелинейной.

Экраны на основе изображений становятся широко используемыми в качестве маркеров и предикторов клеточного фенотипа и поведения.Достижения в технологии микроскопии предоставили средства для захвата субклеточной организации и формы клеток с высоким разрешением. Однако наша способность проникнуть в суть клеточных процессов посредством субклеточной организации и формы клеток ограничена количественными мерами, которые мы используем для их представления. В алгоритмах машинного обучения информация о каждом пикселе изображения может использоваться для скрининга фенотипа. Однако реализация функций объектов вместо пикселей обеспечивает интерпретируемые результаты с разрешением в одну ячейку, что более полезно в биологических приложениях.Кроме того, использование признаков объекта приводит к уменьшению шума в данных и может улучшить результаты.

В нашей предыдущей работе мы использовали моменты Цернике и геометрические параметры в качестве меры формы клеток, чтобы различать высокометастатические и низкометастатические линии раковых клеток остеосаркомы с точностью 99% [9, 10]. Другие группы также сообщили, что форма клеток может предсказать степень опухоли [11], изменения ядерно-цитоплазматического соотношения NFkB [12] и YAP (Yes-ассоциированный белок) [13], химиочувствительность клеточных линий рака толстой кишки человека [13]. 14, 15], различия в подвижности [16], формах подвижности [17], развитии эпителиально-мезенхимального перехода (ЕМТ) [18] и дифференцировке мезенхимальных стволовых клеток человека (чМСК) в остеобласты [19].Многие из этих разработок широко обсуждались в недавних обзорах [20, 21].

В дополнение к важности актинового цитоскелета в определении формы клетки и ядра, структура и организация f-актиновой сети могут предоставить дополнительную информацию, которая может улучшить предсказание клеточной физиологии и лучше различать клетки в разных состояния. Таким образом, необходимо включить показатели организации актина в исследования формы клеток и ее связи с клеточным фенотипом, особенно потому, что окрашивание актина часто используется в качестве основного средства для определения формы клетки.Окрашивание актина также предоставляет текстурную информацию, которая напрямую связана со структурой актина, и, как мы покажем ниже, добавление этой текстурной информации значительно улучшает различение типов клеток.

Важность клеточной и ядерной морфологии и организации цитоскелета как инструмента для понимания и прогнозирования клеточного поведения вызывает необходимость в надлежащем количественном определении формы и текстуры цитоскелета клетки. Здесь мы представляем TISMorph как инструмент для количественной оценки морфологии и субклеточной структуры клетки.Хорошие количественные измерения должны отражать биологически важные различия между различными экспериментальными условиями. Однако не все показатели будут оптимальными для каждого сравнения, и поэтому придется начинать с большего набора количественных показателей и при необходимости отбрасывать неинформативные. Кроме того, хорошие показатели не должны показывать существенных различий между техническими повторами в одном и том же эксперименте. Основываясь на этих аргументах, мы решили протестировать показатели, рассчитанные с помощью TISMorph, для клеток, обработанных фармакологическими модуляторами цитоскелета.Характеристики, рассчитанные с помощью TISOrph, также можно обобщить для использования для количественной оценки других субклеточных структур, таких как промежуточные филаменты, плазматическая мембрана, эндоплазматический ретикулум, митохондрии или даже надклеточные структуры, такие как гистопатологические изображения и магнитно-резонансные изображения головного мозга. Эти количественные показатели также соответствуют критериям хорошей морфометрии, предложенным Pincus et. др. [22], т. е. меры формы должны обладать точностью, фиксировать биологически важные вариации и быть осмысленными и интерпретируемыми.

Экспериментальные методы

Для этого исследования использовали раковые клетки остеосаркомы DUNN и DLM8. Линия DLM8 получена из клеточной линии DUNN с отбором на метастазирование [23]. Следовательно, DLM8 тесно связан с DUNN, за исключением степени его инвазивности. Обе клеточные линии были подарком доктора Дугласа Тамма (Университет штата Колорадо, Колорадо, США). Их культивировали на стеклянных субстратах, промытых детергентом и высушенных на воздухе (GDA) в стандартных условиях культивирования при 37° C и концентрации диоксида углерода 5% в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) (Sigma Alrdich) в трех повторностях в один и тот же день.DMEM был дополнен 10% EquaFETAL Fetal Bovine Serum (Atlas Biologicals) и 100 единиц / мл пенициллина со 100 мкг / мл стрептомицина (Fisher Scientific-Hyclone). После 45 часов культивирования клетки инкубировали с различными цитоскелетными препаратами с описанием, условиями и поставщиками, указанными в таблице А в файле S1, в течение 3 часов. Затем клетки промывали и фиксировали 4% параформальдегидом. Наконец, их флуоресцентно окрашивали для ядер (DAPI от Molecular probes) и актина (фаллоидин Acti-stain 488 от Cytoskeleton, Inc).Все препараты растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) (Fisher BioReagents) и для снижения его влияния на форму клеток и структуру актина контрольное исследование также обрабатывали ДМСО с той же молярностью, что и другие препараты. Затем клетки визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии. Репрезентативные изображения каждой клеточной линии, обработанной этими препаратами, показаны на рис. 1.

Обработка изображений

Чтобы найти баланс между производительностью и точностью обработки изображений, обработка изображений полностью контролируется оператором, чтобы уменьшить количество артефактов, а также максимально автоматизирована для ускорения обработки. изображений.Код обработки изображений объединен в последовательный пошаговый рабочий процесс, который состоит из следующих четырех шагов. 1) Графический пользовательский интерфейс (GUI) позволяет устанавливать бинарные пороги изображений актина и ядра. В то время как пороговое значение предлагается автоматически методом Оцу, пользователи могут легко настроить пороговое значение с помощью ползунка в графическом интерфейсе, визуально проверяя исходное изображение и изображение с пороговым значением, отображаемые рядом в графическом интерфейсе. 2) Декластеризация клеток в пороговых изображениях выполняется с использованием оптимизированного шаблона программного обеспечения с открытым исходным кодом CellProfiler [24].3) Выходные данные CellProfiler затем визуально проверяются оператором, и при необходимости могут быть внесены исправления с использованием модулей, функционирующих на этом этапе. Для облегчения последующего анализа каждая ячейка центрируется и сохраняется отдельно в одно изображение 1024×1024. За исключением CellProfiler, все остальные коды обработки изображений были запрограммированы собственными силами с использованием Matlab (Mathworks) и доступны на https://github.com/Wenlong-Xu/Image_Processing_Cell_Shape. Также доступны подробный протокол о том, как настроить коды обработки изображений и шаблон CellProfiler, используемый для декластеризации клеток.

Методы анализа данных

Количественная оценка изменений в многомерном пространстве форм

Мы используем около 260 признаков для количественной оценки формы и структуры клетки. Таким образом, морфология каждой клетки представляется в виде вектора с 260 числами или, что то же самое, в виде точки в 260-мерном пространстве, где каждая ось представляет собой морфологическую меру. Мы можем назвать это 260-мерное пространство «многомерным пространством формы». Многомерные наборы данных, подобные этому, обычно анализируются с использованием методов уменьшения размерности, таких как анализ основных компонентов (PCA) [25].PCA является нашим методом выбора здесь также из-за его простоты и того факта, что он основан на поиске направлений максимальной дисперсии в наборе данных и, следовательно, хорошо работает с задачами классификации. Вектор параметров формы может быть спроецирован в пространство более низкой размерности первых нескольких основных компонентов (ПК). Однако, поскольку главные компоненты представляют собой линейную комбинацию реальных параметров, мы часто не можем выделить роль отдельных категорий параметров в морфологических различиях.Например, нам может быть интересно узнать, какие аспекты морфологии изменились наиболее резко, когда определенный тип клеток обрабатывают фармакологическим препаратом, но эту информацию часто трудно различить либо в многомерном пространстве форм, либо в пространстве главных компонентов более низкого измерения. . Чтобы облегчить этот анализ, мы рассчитали основные компоненты для каждого лекарственного лечения и каждой из категорий форм, обсуждаемых ниже отдельно. В большинстве случаев первые четыре главных компонента объясняют почти все вариации данных.При сравнении двух экспериментальных условий мы часто выбираем наиболее информативную главную компоненту для нашего анализа среди первых четырех ПК. Это делается следующим образом. Мы выбираем ПК, чей наихудший случай, т. е. наибольшее значение p для t-теста для сравнения средних значений между ячейками в двух экспериментальных условиях, лучше (т. е. меньше), чем у любого другого ПК, так что это лучший случай. мера для различения всех сравнений. Другими словами, для каждого главного компонента максимальное значение p между всеми сравнениями рассчитывается по уравнению (1).Обратите внимание, что p-значение t-критерия используется здесь не для расчета статистической значимости, а просто для того, чтобы помочь нам легко выбрать наилучшие разделенные данные среди 16 возможных двумерных графиков для сравнения любых двух категорий формы. (1) Где P-значение _{PC 1, n} — это p-значение для сравнения n ^th в первом главном компоненте. Затем из первых четырех ПК выбирается тот, который имеет наименьшее MAX-P, максимальное значение p между различными сравнениями.В каждой категории формы мы выбираем лучший главный компонент по этому критерию и будем описывать их как основные основные компоненты (PPC) каждой количественной меры или категории формы для каждого анализа.

Корреляция Пирсона

Многие функции, вычисляемые нашим набором инструментов, частично избыточны и, следовательно, коррелируют друг с другом. Простым методом оценки степени избыточности является использование коэффициента корреляции Пирсона, который вычисляет степень линейной корреляции двух переменных.Коэффициент корреляции Пирсона рассчитывается между признаками, как показано в уравнении (2). Здесь R — коэффициент корреляции Пирсона, x I — это функция X I ^y образец, y _{9117 y I y за I ^TH Образец, x x — это среднее значение функции x для всех образцов, а μ y — это среднее значение функции y для всех образцов.Этот коэффициент рассчитывается в пределах каждой категории формы для всех 14 клеточных линий и комбинаций лекарственных средств (2 клеточные линии x 7 лекарственных средств) и записывается усредненный коэффициент. Результаты показаны на тепловых картах на рис. А в файле S1. На этих графиках диагональные элементы коррелируют между объектами сами по себе, поэтому все они равны 1. Обратите внимание, что, поскольку коэффициент корреляции Пирсона симметричен, каждый график тепловой карты также будет симметричным. (2)}

Результаты

Разработка квантификаторов формы

Структура актина получена из интенсивности пикселей меченого актина, которую мы можем представить в виде изображения в градациях серого, рис. 2А.Эти изображения клеток в градациях серого или изображения окрашенных ядер преобразуются в бинарное изображение (рис. 2C), и записываются координаты краев (рис. 2B), что дает границу клетки. Чтобы извлечь особенности морфологии из этих числовых данных, мы вводим три класса мер формы, описываемых как классы текстуры, нерегулярности и растекания. Текстурные измерения делятся на три подкатегории, называемые измерениями на основе полос, фрактальной размерностью шкалы серого и мерами шкалы серого, которые рассчитываются на основе графиков интенсивности актина, рис. 2А.Меры неравномерности включают такие параметры, как волнистость и шероховатость, которые используют информацию о пикселях на границе ячейки, рис. 2B. Каждая из этих категорий форм описана ниже. Меры расширения, которые включают меры, основанные на представлении формы моментом Цернике, а также подкатегории, включающие основные геометрические параметры, такие как площадь и периметр, извлекаются из бинарного представления ячейки (рис. 2C, ее выпуклой оболочки или аналогичного изображения). ядра.

Рис. 2. Представление формы ячейки.

(A) Изображения в градациях серого с использованием меченого актина. Интенсивность каждого пикселя записывается и представляется в виде графика интенсивности в градациях серого. (B) 2D-контур: положение каждого пикселя на границе записывается в полярных или декартовых координатах. (C) Бинарное изображение актина.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217346.g002

Текстурные меры.

Текстурные меры, которые мы адаптировали или разработали, были основаны на организации актина и были разработаны для охвата аспектов глобальной и локальной структуры актина.На многих изображениях актин часто был организован в виде полос, что потребовало разработки измерения на основе полос, обсуждаемого ниже. Актин часто был поляризован или частично поляризован, и были различия в распределении более толстых стрессовых волокон и более тонких волокон, при этом некоторые клетки проявляли большую гетерогенность, чем другие. Для их количественной оценки мы адаптировали плоскую фрактальную размерность, а также меры, основанные на матрице совпадения уровней серого (GLCM), обсуждаемые ниже.

Измерения на основе полос Этот параметр чувствителен к изменениям радиальной симметрии распределения актиновых филаментов.Мы делим изображение на 10 равномерно расположенных концентрических областей (Δ r ) вокруг центра масс изображения, называемых полосами, как показано на рис. B в файле S1. Пять квантификаторов используются для измерения различий в распределении актина между этими полосами. Сначала вычисляется средняя интенсивность для каждой полосы. Затем записывают индексы полос, имеющих наименьшую или наибольшую среднюю интенсивность, и их значение. Последнее измерение — это то, что называется выше средней скорректированной интенсивностью полос, которая сформулирована в таблице B в файле S1 вместе с другими измерениями на основе полос [26].Меры на основе полос особенно важны для характеристики распределения актина в клетках, обработанных цитохалазином D, где актин имеет очень уникальное симметричное распределение. В этих клетках вокруг ядра образуются плотные очаги. Полосы, расположенные в центральной области клеток, лишены актина. На внешних дисках наблюдаются короткие линейные актиновые структуры, выровненные по радиусу.

Фрактальная размерность шкалы серого Фрактальная размерность ( FD ) является мерой шероховатости объектов и может применяться для характеристики текстуры в инженерных и естественных изображениях.Существует множество методов расчета этой меры, и мы выбрали метод подсчета ящиков из-за присущей ему простоты. В этом методе бинарное изображение сначала покрывается равномерно расположенной сеткой со стороной ϵ . Затем подсчитывается количество ящиков, покрывающих фрактальное изображение. Этот процесс повторяется с уменьшением длины стороны, и FD рассчитывается на основе уравнения (3) (3) Здесь х — это размер каждого прямоугольника в сетке, а переменная N ( х ) — это количество ящиков, содержащих фрактал.Мы рассчитываем FD на основе бинаризации изображения в градациях серого с использованием методов обнаружения краев для выявления актиновых пустот. Это делается с использованием четырех различных методов обнаружения краев в Matlab. В качестве примера на рис. C в файле S1 показаны бинаризованные изображения клетки из клеточной линии DUNN, обработанной цитохалазином D с использованием этих четырех методов обнаружения краев. Мы обнаружили, что разные методы обнаружения краев улавливают разные аспекты структуры актина, и поэтому для каждой клетки их полутоновое изображение бинаризируется с использованием этих четырех методов и вычисляется их FD [27].

Другие меры шкалы серого Haralik et al. представил процедуру количественной оценки текстуры спутниковых изображений на основе пространственного отношения между оттенками серого соседних пикселей в изображении для классификации изображений [28]. Этот метод основан на матрице совпадения уровней серого (GLCM, иногда называемой матрицей пространственной зависимости), которая рассчитывается следующим образом. Для изображения с интенсивностью 1, 2, …, 91 117 g 91 118 матрица совпадения представляет собой матрицу 91 117 g 91 118 x 91 117 g 91 118, такую, что ее ij-й элемент представляет собой количество раз, когда пиксель в изображении интенсивность равна « i », а пиксель на заранее определенном расстоянии (которое мы выбираем равным 1 пикселю) от него имеет интенсивность j .Пример изображения размером 4 x 4 пикселя с 5 уровнями серого показан на рис. D в файле S1. В матрице GLCM, когда очень мало доминирующих переходов серого тона изображения в соседних пикселях, матрица будет иметь небольшое значение для всех элементов. Каждый диагональный элемент матрицы GLCM представляет количество раз, когда оттенок серого не меняется в соседнем пикселе. Крупные диагональные элементы подразумевают однородность изображения. Большие числа в крайнем верхнем правом и крайнем нижнем левом углу матрицы означают большие переходы интенсивности и высокую контрастность изображения.После расчета матрицы GLCM, показанной для примера изображения на рис. D в файле S1, вычисляются 23 различных показателя для количественной оценки текстуры на изображении. Список мер сведен в таблицу C в файле S1 [28–30]. Например, одним из параметров является контрастность. Для интерпретации этой меры полезно иметь в виду, что контраст изображения пропорционален изменениям в оттенках серого, n = | i − j |, поэтому крайний верхний правый и крайний нижний левый, которые имеют большее значение n , будут иметь больший вклад в параметр контрастности.Для однородных изображений диагональные элементы будут большими и будут иметь больший вклад в меру однородности. В этом исследовании мы рассчитываем матрицу GLCM для вектора, равного 1 пикселю по величине и с направлениями 0 °, 45 °, 90 ° и 135 °, а затем сообщается среднее значение для каждого параметра. Этот процесс дает инвариантные к вращению меры.

Неравномерность граничных мер.

Помимо текстурных показателей, неровности границы также несут информацию о состоянии клетки.Например, неправильная граница может возникнуть из-за большого количества филоподий в клетке, что является признаком высокодинамического цитоскелета. Клетка с высокой сократимостью может сокращаться от фокальных спаек на границе, создавая множество выпячиваний мембраны, которые увеличивают изменчивость. Для количественной оценки неравномерности границы ячейки используется двумерная граница ячейки, как показано на рис. 2В. Мы используем положения пикселей, которые отмечают границу ячейки, для расчета волнистости, которая оценивает периодическое изменение границы, и шероховатости, которая измеряет непериодические изменения границы, как обсуждается ниже.

Меры волнистости Используя ряд Фурье, сигнал можно разложить по линейным комбинациям ортогональных базисных функций синусов и косинусов с возрастающими частотами. В разложении в ряд Фурье предполагается, что входной сигнал является периодическим. Контур ячейки представляет собой замкнутую кривую, поэтому считается периодическим сигналом. Граница ячейки может быть представлена ​​в декартовых координатах x и y или в полярных координатах ρ и θ .Независимо от выбора координат это приведет к двум независимым сигналам, которые можно отдельно записать в виде линейной комбинации базисных функций cos и sin в виде уравнения (4). (4) Где nPixel — количество пикселей на границе ячейки и основная частота, равная . Переменная n — целое число, а n * w — частота n ^th в разложении. Переменные A x , N и B x , N N , C x , 0 среднее значение сигнала, а f ( x ) — входной сигнал.Если мы используем очень большое количество частот, мы можем восстановить ячейку почти идеально, но количество дескрипторов будет излишне большим. Существует компромисс между количеством используемых частот (дескрипторов формы) и точностью реконструкции. Мы заинтересованы в количественной оценке формы, не имея дело с большим количеством параметров. Поскольку амплитуда уменьшается с увеличением частоты, мы можем отфильтровать более высокие частоты и просто использовать более низкие частоты, чтобы уменьшить количество дескрипторов, используемых для анализа.Здесь, при качественном анализе реконструированных ячеек с разной частотой, мы решили использовать только первые 35 частот в качестве дескриптора ячейки. Реконструкция формы даже довольно неправильных ячеек с использованием этих 35 частот является превосходной, как показано на рис. 3. Наконец, оставшаяся проблема для коэффициентов Фурье заключается в том, что они не инвариантны относительно вращения. Мы можем построить вращательно-инвариантную меру, используя уравнение (5), которое устраняет разность фаз в разложении Фурье.Это также уменьшает количество параметров вдвое. Несмотря на то, что реконструкция формы клеток невозможна с вращательно-инвариантными мерами, наши результаты показывают, что они, тем не менее, являются полезными параметрами для различения клеток с разной степенью вариаций радиуса. Мы будем называть эти параметры параметрами волнистости. Интересно, что для параметров Фурье все признаки имеют низкий коэффициент корреляции друг с другом (0,35), что свидетельствует о том, что каждый коэффициент несет в основном независимую информацию.Это наблюдение было ожидаемым, поскольку мы используем ортогональные базисные функции. (5)

Рис. 3. Реконструкция ячеек с помощью разложения Фурье.

Синяя линия — это фактическая граница ячейки, а черная линия — реконструкция ячейки с использованием первых 35 членов разложения в ряд Фурье.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217346.g003

Шероховатость Как объяснялось ранее, при разложении границы ячейки в ряд Фурье более высокие частоты имеют малую амплитуду, и мы ими пренебрегаем.Однако мы все же можем получить информацию о небольших вариациях амплитуды из этих высокочастотных членов. Следуя методу Villanueva et. др. [31] для учета высокочастотных показателей мы реконструируем ячейку с 35 компонентами Фурье и вычитаем ее из исходного сигнала. Разница представляет собой шероховатость периметра в меньшем масштабе, чем вариации, достоверно улавливаемые 35 частотами Фурье. Статистические показатели величины этой разницы называются показателями шероховатости и перечислены в таблице H в файле S1.Визуальные примеры шероховатости, как определено здесь, можно увидеть на нижней панели рис. 3.

Меры по разбрасыванию.

В этом классе кванторов формы используется бинарное изображение клетки и ядра. Эти меры включают геометрические параметры для ядер и клеток, меры выпуклой оболочки и моменты Цернике для клеток.

Геометрические меры Геометрические меры, возможно, являются наиболее широко используемыми морфологическими мерами, и те, что представлены ниже, были взяты из предыдущих исследований.Такие параметры, как площадь, периметр, большая ось подобранного эллипса, малая ось подобранного эллипса и их отношение, являются примерами геометрических мер. Все геометрические меры, используемые в этом исследовании для количественной оценки формы клеток и ядер, перечислены в таблице E и таблице F в файле S1.

Измерения выпуклой оболочки Ближайшим правильным геометрическим объектом к растянутой ячейке, вероятно, является окружающий выпуклый многоугольник. Выпуклый многоугольник — это замкнутый многоугольник, у которого линия, соединяющая любую пару точек внутри многоугольника, полностью лежит внутри многоугольника.На рис. E в файле S1 показан пример выпуклого и невыпуклого многоугольника. Выпуклая оболочка 2D-фигуры — это наименьший выпуклый многоугольник, охватывающий всю фигуру [32], а его геометрические свойства отражают свойства замкнутой ячейки. Пример выпуклой оболочки двумерной ячейки показан на рис. E в файле S1. Геометрические размеры выпуклой оболочки, используемые в этом исследовании, перечислены в таблице G в файле S1.

Моменты Цернике Для расчета моментов Цернике изображение ячейки проецируется на полиномиальную базисную функцию Цернике, а коэффициенты, называемые моментами Цернике, используются в качестве дескриптора формы ячейки.Многочлены Цернике образуют полный ортогональный набор базисных функций над единичным кругом. Моменты Цернике — это комплексные числа, величина которых инвариантна к вращению, и их можно сделать инвариантными к смещению, переместив ячейку в центр кадра изображения так, чтобы центр масс изображения приходился на геометрический центр кадра. Процедура широко обсуждалась ранее [9], а моменты Цернике использовались ранее в других типах распознавания биологических изображений [33].Разложение момента Цернике также является разложением по базисной функции, как и ряд Фурье, и в принципе способно к идеальной реконструкции ячейки. Однако на практике численные ошибки препятствуют точной реконструкции, когда используется слишком много моментов, и, таким образом, моменты Цернике не могут отражать тонкие особенности формы ячейки так, как это могут делать ряды Фурье. Мы получили наилучшие результаты при использовании примерно 147 моментов Цернике (порядок до 30, повторение для каждого порядка до 10), что в настоящее время рассчитывается TISMorph.Эти номера могут быть изменены пользователем при необходимости.

Проверка эффективности разработанных мер на клетках остеосаркомы, пораженных различными цитоскелетными препаратами

Лекарства, которые непосредственно воздействуют на микротрубочки, миозин-II или актин, оставляют уникальную подпись на структуре актина, которая поддается количественному определению по текстурным измерениям.

Мы обнаружили, что самые драматические и уникальные эффекты на форму и текстуру клеток возникают у препаратов, которые непосредственно воздействуют на микротрубочки или актиновые филаменты.Как показано на рис. 1, контрольные клетки приобретают на поверхностях многоугольную форму. Деполимеризация актина с использованием Cytochalasin D приводит к округлым клеткам, в которых актин реорганизован в чередующиеся концентрические кольца высокой и низкой плотности. Внутри каждого кольца актин структурирован в виде очень уникальных радиальных полос! Увеличение скорости деполимеризации микротрубочек с использованием нокодазола приводит к небольшой округлой морфологии. Ингибирование активности миозина II и уменьшение сократительной способности клеток с помощью блеббистатина приводит к увеличению неровностей клеточной границы.Эти изменения формы и структуры клетки сходны как для клеточных линий DUNN, так и для клеточных линий DLM8. Изменения в структуре и морфологии клеток при использовании других препаратов в наших экспериментах с более косвенным воздействием на цитоскелет малозаметны и не так легко различимы на глаз. Для количественной оценки изменений формы и структуры клеток, нарушенных различными препаратами, шкала серого и бинарное изображение клеток вместе с информацией о границах клеток использовались для измерения всех характеристик в 9 категориях формы, подробно описанных выше для каждой клетки.На рис. H в файле S1 показаны количественные изменения всех показателей для всех препаратов. Как показано на этой фигуре, изменения в показателях текстуры для всех лекарств значительны, что измеряется с помощью t-критерия. Это означает, что все препараты, воздействующие на актин либо прямо, либо опосредованно, воздействуя на другие компоненты цитоскелета, приводят к значительным изменениям в организации актинового цитоскелета. Наши морфологические меры значительно улучшают классификацию клеток по условиям эксперимента по сравнению со стандартными геометрическими мерами.Некоторые примеры улучшения задач классификации показаны на рис. 4. В частности, меры на основе полос и планарные фрактальные меры значительно улучшают некоторые задачи классификации, где относительно небольшие изменения в форме клеток сопровождаются значительными изменениями в структуре актина.

Рис. 4. Примеры задач классификации, которые улучшились после использования морфологических мер в TISMoph.

А). Клетки, обработанные цитохалазином D, можно значительно лучше отличить от контрольных клеток, используя измерения на основе полос (правая панель) по сравнению с геометрическими измерениями (левая панель).Б). Клетки, обработанные PP2, значительно перекрываются по своим геометрическим размерам с контрольными клетками (левая панель), но группируются отдельно при использовании фрактальной размерности. С). Клетки из одного экспериментального условия группируются вместе, когда наносятся первичные главные компоненты (PPC) разных морфологических классов. (Слева) Меры ядер (представленные их PP1) по сравнению с геометрическими мерами клеток (PP2). (Справа) Меры на основе полос (PP2) и фрактальная размерность (PP2).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217346.g004

Реорганизация актина изменяет меры распространения как для клетки, так и для ядра.

Чтобы изучить изменения в 2D-форме клетки и ядра путем изменения распределения актина, мы сравнили PPC геометрических размеров клетки и ядра. Как показано в таблице I в файле S1, возмущающий актин значительно изменяет геометрические размеры клеток, отличные от клеточной линии DLM8, обработанной джасплакинолидом. Интересно, что изменения в структуре актина изменяют не только геометрические размеры клеток, но также изменяют геометрические размеры ядер для всех условий, отличных от обеих клеточных линий, обработанных блеббистатином, и клеточной линии DUNN, обработанных препаратами джасплакинолида и PP2.Моменты Цернике и параметры выпуклой оболочки в некоторых отношениях похожи. Хотя их методы количественной оценки сильно различаются, как показано на реконструкции изображения клеток с использованием моментов Цернике (рис. F в файле S1), обе меры игнорируют неровности и тонкие колебания границы. Как показано в Таблице I в файле S1, изменения в PPC для обоих показателей неразличимы для клеточных линий DUNN, обработанных PP2, и для обеих клеточных линий, обработанных FAKI 14. Кроме того, геометрические параметры корпуса существенно не изменяются для клеток DLM8, обработанных Клетки Cytochalasin-D и DUNN, обработанные джасплакинолидом.Кроме того, моменты Цернике существенно не изменяются для клеток DLM8, обработанных блеббистатином, и клеток DUNN, обработанных цитохалазином-D. Все другие препараты приводят к заметным изменениям в показателях выпуклой оболочки и момента Цернике. Поскольку ожидается, что многие параметры формы клеток будут коррелировать друг с другом, мы провели корреляционный анализ всех показателей в каждой категории количественного определения формы, которые показаны на рис. A в файле S1. Эти результаты показывают, что моменты Цернике, геометрические меры ячеек, геометрические меры ядер и геометрические меры выпуклой оболочки сильно коррелируют друг с другом.

Реорганизация цитоскелета приводит к изменению неровностей границ клетки.

Как показано на рис. H в файле S1, показатели волнистости для всех состояний, связанных с лекарственными препаратами, за исключением клеточных линий DUNN, обработанных джасплакинолидом или PP2, и обеих клеточных линий, обработанных FAKI 14, значительно отличаются от контрольных. Кроме того, показатели шероховатости значительно изменились для обеих клеточных линий, обработанных блеббистатином, цитохалазином-D, FAKI 14 и нокодазолом. В обеих клеточных линиях джасплакинолид существенно не изменяет меру шероховатости, что также имеет место для клеточных линий DUNN, обработанных PP2.

Различные категории квантификаторов формы представляют частично неизбыточную информацию о форме.

Хотя мы показали, что каждая из наших основных категорий и подкатегорий служит мерой хорошей формы в том смысле, что их можно использовать для поиска интерпретируемых изменений формы при различных наркотических состояниях, неясно, нужны ли нам все они для представления формы. . Чтобы оценить степень избыточной информации, содержащейся в различных категориях формы, мы рассчитали коэффициент корреляции Пирсона между всеми функциями из разных категорий формы (показан в файле S2).В целом, признаки из двух разных категорий формы относительно слабо коррелированы (<0,4), за исключением признаков выпуклой оболочки и геометрических ячеек, которые сильно коррелируют друг с другом, как и ожидалось. Есть несколько других конкретных исключений, для которых признаки также сильно коррелированы. Они следующие. Моменты Цернике с n < 16 и m = 0 сильно коррелируют с площадью. Коэффициент корреляции между площадью ячейки и моментом Цернике 0-0 равен 1.Он уменьшается с увеличением порядка, пока не станет почти нулевым для момента Цернике (22-0), затем становится отрицательным и увеличивается по величине (рис. G в файле S1). Коэффициент C ₀ признаков волнистости имеет корреляцию 1 со средним радиусом ячейки. Он также сильно коррелирует с площадью ячейки (0,93) и площадью выпуклой оболочки. Поскольку разложение Фурье основано на радиальном представлении формы ячейки, C ₀ является мерой среднего радиуса ячейки, и следует ожидать, что она покажет эти высокие корреляции.Показатели фрактальной размерности также имеют высокую корреляцию с показателями Cell Geometric, Nuclei Geometric, Gray Scale и моментами Зернике с m = 0 и n < 17. Однако, помимо этих конкретных случаев, относительно большое количество слабых корреляций между различные категории формы подразумевают, что эти категории формы содержат неизбыточную информацию о форме ячейки. Таким образом, количественный анализ формы в идеале должен выполняться с представлениями всех этих категорий формы, чтобы наиболее эффективно различать различные экспериментальные условия.

Обсуждение

В этой статье мы представляем и предоставляем пакет TISMorph для количественной оценки формы клеток и структуры цитоскелета на основе двумерных изображений морфологии клеток и структуры актина. Набор инструментов Matlab, используемый для обработки изображений и количественного определения формы и структуры ячейки, находится в репозитории GitHub для использования другими. Эти наборы инструментов можно найти по следующим адресам: https://github.com/Wenlong-Xu/Image_Processing_Cell_Shape, https://github.com/Elaheh-Alizadeh/Количество формы и структуры. Некоторые текстурные и морфологические признаки, рассчитанные с помощью TISOrph, аналогичны показателям, рассчитанным с помощью CellProfiler(CP) [24]. Геометрические характеристики ядер и клеток, а также показатели шкалы серого, рассчитанные в этой статье, перекрываются с показателями, рассчитанными в CellProfiler с помощью модулей MeasureObjectSizeShape и MeasureTexture. CP также вычисляет моменты Цернике, но только до 10-го порядка, в то время как мы используем моменты Цернике до 30-го порядка, потому что мы обнаруживаем, что меньшее количество порядков не дает достаточного разрешения объектов.Некоторые рассчитываемые нами меры не реализованы в актуальной на момент подачи версии КП. Это фрактальная размерность, геометрические меры корпуса, меры на основе полос и меры неравномерности. Однако CP вычисляет несколько дополнительных показателей в модуле MeasureObjectIntensity, которые являются статистическими показателями интенсивности объектов, такими как среднее значение и стандартное отклонение интенсивности, которые в настоящее время не включены в TISMoph. Таким образом, TISMorph включает в себя значительные дополнения к предыдущему уровню техники, представленные количественными показателями, рассчитанными с помощью CP.

Количественные показатели в пакете TISMorph были разработаны на основе эмпирического исследования статистически значимых различий между экспериментальными условиями в пространстве главных компонент. Хотя клеточная морфометрия зашумлена, наши данные показывают, что морфометрические показатели технических повторов перекрываются друг с другом, указывая на то, что клетки в идентичных условиях демонстрируют одинаковое распределение морфологии (рис. I в файле S1). В этой статье мы исследовали способность этих количественных показателей фиксировать биологически важную информацию.Мы нарушали цитоскелет клеток различными препаратами и изучали их влияние на форму и структуру клеток. Данные можно найти в файле S3. Сначала мы использовали текстурные измерения, чтобы убедиться, что актиновая структура клетки изменяется в клетках, обработанных цитоскелетными препаратами, а затем мы исследовали изменения в двумерной форме клеток и ядер и неровности клеточных границ, сопровождающиеся изменениями в структуре актина. Здесь мы показали, что большинство препаратов, использованных в этом исследовании, прямо или косвенно приводят к значительным изменениям в структуре актина.Затем мы исследовали влияние изменений в структуре клетки на показатели неровностей клеточных границ, распространения ядер и распространения клеток. В большинстве случаев изменения структуры актина сопровождаются значительными изменениями неровностей клеточных границ, распластывания клеток и ядер. Результаты показывают, что текстурные меры и меры распространения связаны, но их связь непростая, и два класса мер несут неизбыточную информацию. Стоит отметить, что, хотя мы внедрили текстурные меры для количественной оценки структуры актина, их можно использовать и для количественной оценки других субклеточных и надклеточных структур.Методы количественного определения формы, представленные в этой статье, окажутся полезными для морфологического скрининга для использования в компьютерной диагностике таких заболеваний, как рак, которые связаны с нарушениями цитоскелета, для оценки качественных клеточных изменений в различных экспериментальных условиях и для механистического понимания определения клеточных форма. В частности, морфологический скрининг становится новым высокопроизводительным методом с широким применением для оценки функциональных биологических реакций [20, 21], и TISmorph должен помочь повысить чувствительность и специфичность морфологических сравнений.

Каталожные номера

1. 1. Флетчер Д.А., Маллинз Р.Д. Клеточная механика и цитоскелет. Природа. 2010;463(7280):485–492. пмид:20110992
2. 2. Поллард ТД, Купер Дж.А. Актин, центральный игрок в форме и движении клеток. Наука. 2009;326 (5957). пмид:19965462
3. 3. Ингбер Д.Е., Сунь З., Бетенский Х.Е., Цитоскелетный контроль Ec и Cs в ангиогенезе. Наука. 1994;7(12).
4. 4. Стрикер Дж., Фальцоне Т., Гардель М.Механика F-актинового цитоскелета. Журнал биомеханики. 2010;43(1):247–253. http://doi.org/10.1016/j.jbiomech.2009.09.003.
5. 5. Поллард ТД, Борисий ГГ. Клеточная подвижность, управляемая сборкой и разборкой актиновых филаментов. Клеточная подвижность, управляемая сборкой и разборкой актиновых филаментов. Клетка. 2003;112(4):453–465. пмид:12600310
6. 6. Чаррас Г.Т., Кафлин М., Митчисон Т.Дж., Махадеван Л. Жизнь и времена клеточного пузыря. Биофизический журнал.2008; 94 (5): 1836–1853. пмид:17921219
7. 7. Бишофс И.Б., Кляйн Ф., Ленерт Д., Бастмайер М., Шварц США. Механика нитевидных сетей и активная сократимость определяют форму клеток и тканей. Биофизический журнал. 2008;95(7):3488–96. пмид:18599642
8. 8. Палух Э., Гейзенберг К.П. Биология и физика изменения формы клеток в процессе развития. Текущая биология. 2009;19(17):R790–R799. пмид:19

   1

9. 9. Ализаде Э., Лайонс С.М., Касл Дж.М., Прасад А.Измерение систематических изменений формы инвазивных раковых клеток с использованием моментов Цернике. Интегр биол. 2016;8(11):1183–1193.
10. 10. Лайонс С.М., Ализаде Э., Мангеймер Дж., Шуамберг К., Касл Дж., Шредер Б. и др. Изменения в форме клеток коррелируют с метастатическим потенциалом в остеосаркомах мыши и человека. Биология открытая. 2016. pmid:26873952
11. 11. Сайлем Х.З., Бакал С. Идентификация клинически предсказуемых метагенов, которые кодируют компоненты сетевой формы соединительной клетки для транскрипции с помощью имидж-омики.Исследование генома. 2017;27(2):196–207. пмид:27864353
12. 12. Sero JE, Sailem HZ, Ardy RC, Almuttaqi H, Zhang T, Bakal C. Форма клеток и микроокружение регулируют ядерную транслокацию NF- κ B в эпителиальных и опухолевых клетках молочной железы. Молекулярная системная биология. 2015;11(3):790. пмид:26148352
13. 13. Sero JE, Bakal C. Многопараметрический анализ формы клеток демонстрирует, что β -PIX напрямую связывает активацию YAP с адгезией внеклеточного матрикса.Клеточные системы. 2017;4(1):84–96.e6. пмид:28065575
14. 14. Паскуалато А., Лей В., Кучина А., Диникола С., Д’Ансельми Ф., Проетти С. и др. Форма миграции: количественный анализ изображений мигрирующих химиорезистентных клеток рака толстой кишки HCT-8. Сотовый Адх Мигр. 2013;7(5):450–459. пмид:24176801
15. 15. Паскуалато А., Паломбо А., Кучина А., Мариджио М.А., Галли Л., Пассаро Д. и др. Количественный анализ формы химиорезистентных клеток рака толстой кишки: корреляция между морфотипом и фенотипом.Экспериментальные исследования клеток. 2012;318(7):835–846. пмид:22342954
16. 16. Керен К., Пинкус З., Аллен Г.М., Барнхарт Э.Л., Марриотт Г., Могилнер А. и др. Механизм детерминации формы в подвижных клетках. Природа. 2008;453(7194):475–480. пмид:18497816
17. 17. Купер С., Садок А., Бусгуни В., Бакал С. Аполярные и полярные переходы управляют преобразованием между амебоидными и мезенхимальными формами в клетках меланомы. Молекулярная биология клетки. 2015;26(22):4163–70. пмид:26310441
18. 18.Ren ZX, Yu HB, Li JS, Shen JL, Du WS. Выбор подходящего параметра количественной морфологии клеток А549 при эпителиально-мезенхимальном переходе. Об этом сообщает Биология. 2015 г.; п. 1–7.
19. 19. Мацуока Ф., Такеучи И., Агата Х., Кагами Х., Шионо Х., Киёта Ю. и др. Морфологическое предсказание потенциала остеогенной дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток человека. ПЛОС ОДИН. 2013;8(2).
20. 20. Прасад А., Ализаде Э. Форма и функция клеток: интерпретация и контроль формы прикрепленных клеток.Тенденции биотехнологии. 2019;37(4):347–357. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2018.09.007. пмид:30316557
21. 21. Маркляйн Р.А., Лам Дж., Гувендирен М., Сунг К.Е., Бауэр С.Р. Функционально релевантное морфологическое профилирование: инструмент для оценки клеточной гетерогенности. Тенденции биотехнологии. 2018;36(1):105–118. пмид:272
22. 22. Пинкус З., Териот Дж. А. Сравнение количественных методов анализа формы клеток. Дж Микроск. 2007; 227 (часть 2): 140–156. пмид:17845709
23. 23.Асаи Т., Уэда Т., Ито К., Йошиока К., Аоки Ю., Мори С. и др. Создание и характеристика клеточной линии мышиной остеосаркомы (LM8) с высоким метастатическим потенциалом в легких. Международный журнал рака. 1998;76(3):418–422. пмид:9579581
24. 24. Каменский Л., Джонс Т.Р., Фрейзер А., Брей М.А., Логан Д.Дж., Мэдден К.Л. и др. Улучшенная структура, функциональность и совместимость для cellprofiler: модульное высокопроизводительное программное обеспечение для анализа изображений. Биоинформатика. 2011;27(8):1179–1180.пмид:21349861
25. 25. Джоллифф ИТ. Анализ главных компонентов. 32-е изд. Нью-Йорк: Springer-Verlag; 2002.
26. 26. Slater JH, Culver JC, Long BL, Hu CW, Hu J, Birk TF, et al. Перепросмотр и модуляция клеточной архитектуры интересующей пользователя клетки с использованием клеточного биомиметического паттерна. АКС Нано. 2015;9(6):6128–6138. пмид:25988713
27. 27. Коста А. Хаусдорф (подсчет коробок) Фрактальная размерность; 2013. Доступно по адресу: https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/30329-hausdorff — подсчет ящиков — фрактальная размерность.
28. 28. Харалик Р., ШАНМУГАМ К., ИТСХАК Д. Текстурные признаки для классификации изображений. Транзакции IEEE по системам, человеку и кибернетике. 1973; SMC-3(6):610–621.
29. 29. Soh Lk, Tsatsoulis C, Member S. Анализ текстуры изображений морского льда SAR с использованием матриц совпадения в оттенках серого Анализ текстуры изображений морского льда SAR с использованием матриц совпадения явлений в оттенках серого. IEEE Transactions по геонаукам и дистанционному зондированию.1999;37(2):780–795.
30. 30. Уппулури А. Расчет признаков GCLM; 2010. Доступно по адресу: https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/22354-glcm-features4-m—vectorized-version-of-glcm-features1-m—with-code-changes-?s{ _}tid=prof{_}вклад.
31. 31. Вильянуэва JD. Разработка и реализация программы расчета на платформе Matlab для оценки шероховатости. Политехнический университет Каталонии. https://upcommons.upc.edu/handle/2117/85844?; 2015.
32. 32. Welzl E, Gärtner B. Вычислительная геометрия; 2014. Доступно по адресу: https://www.ti.inf.ethz.ch/ew/Lehre/CG13/index.html.
33. 33. Тахмасби А., Саки Ф., Шокоухи С.Б. Классификация доброкачественных и злокачественных образований на основе моментов Цернике. Компьютеры в биологии и медицине. 2011;41(8):726–735. пмид: 21722886

часто задаваемых вопросов | Текстура

- (ASCellNode *)pagerNode:(ASPagerNode *)pagerNode nodeAtIndex:(NSInteger)index
{
    NSArray *животные = я.UIViewController * _Nonnull{
        return [[AnimalTableNodeController alloc] initWithAnimals:animals];
    } didLoadBlock:nil];
    
    node.style.preferredSize = pagerNode.bounds.size;
    
    возвратный узел;
}
 

func pagerNode(_ pagerNode: ASPagerNode, nodeAt index: Int) -> ASCellNode {
    пусть животные = allAnimals[index]
    
    пусть узел = ASCellNode(viewControllerBlock: { () -> UIViewController в
        вернуть AnimalTableNodeController (животные: животные)
    }, didLoad: ноль)
    
    узел.style.preferredSize = pagerNode.bounds.size
    
    узел возврата
}
 

func pagerNode(_ pagerNode: ASPagerNode, nodeAt index: Int) -> ASCellNode {
    пусть животное = животные[индекс]
    
    пусть узел = ASCellNode { () -> UIView в
        вернуть SomeAnimalView (животное: животное)
    }

    node.style.preferredSize = pagerNode.bounds.size
    
    узел возврата
}
 

node.neverShowPlaceholders = ДА;
 

node.neverShowPlaceholders = истина