Интересные факты и развлечения на Quizly. С 2015 года Quizly является ведущим поставщиком развлечений в Интернете, на мобильных устройствах и в социальных сетях.Мы стремимся как развлечь, так и обучить миллионы участников викторин по всему миру.

Благодаря таким темам, как история, язык и общие знания, наши викторины мотивируют пользователей не только проверять свои существующие знания, но и в то же время развивать новый опыт обучения. Вы давно не бросили школу? Бросьте вызов тому, чему вы научились в те дни, на этом экзамене в начальной школе, тесте по литературе для старшей школы и викторине для старшей школы.

Обучение на протяжении всей жизни очень важно.Чтобы отличаться от обычных школьных викторин, пройдите этот тест для 8-го класса из экзамена 1912 или 1895 года. Не забудьте получить свой IQ в этом тесте на интеллект.

Мы черпаем вдохновение в еде и путешествиях по миру, в музыке и фильмах, помогая нам создавать вызывающие улыбку индивидуальные викторины, даже если у вас всего десять минут до работы. Вы когда-нибудь задумывались, как вас на самом деле должно быть зовут, кто ваша родственная душа знаменитости и что ждет вас в будущем? Наши индивидуальные викторины призваны быть очень интересными и привлекательными для широкой аудитории.Как бы вы приготовили пиццу своей мечты, создали звездную команду супергероев или создали свою воображаемую семью? Наша страсть ко всему хорошему в жизни привносит в нашу команду странное, причудливое и прямо-таки причудливое, и мы бы не хотели, чтобы это было по-другому.

Команда Quizly любит читать отзывы, которые вы нам оставляете. Иногда это может быть указание на ошибку, которую мы допустили в викторине, но часто это добрый комментарий, чтобы сказать, что вам понравились наши викторины, и продолжать!

В Quizly мы делаем своим делом, чтобы вы были счастливы и развлекались, так как это наш смысл существования! Мы питаемся положительной энергией, которую вы оставляете здесь, поэтому, пожалуйста, продолжайте писать свои комментарии! Есть отличная идея для викторины? Пожалуйста дай нам знать.Еще лучше, если вы хотите участвовать в написании викторины, пишите в любое время! Свяжитесь с нами здесь.

Психологический тест Роршаха

Многие люди слышали о знаменитом тесте Роршаха, также называемом тестом Роршаха, в котором человека просят описать то, что он видит на неоднозначных изображениях чернильных пятен. Этот проективный тест часто появляется в популярной культуре и часто изображается как способ выявить бессознательные мысли, мотивы или желания человека.

История

Одной из любимых игр Германа Роршаха в детстве была Klecksography, которая включает создание чернильных пятен и сочинение рассказов или стихов о них.Ему так понравилась игра, что его школьные друзья прозвали его «Клецк», что по-немецки означает «чернильное пятно».

Его интерес к чернильным пятнам продолжался и во взрослой жизни. Работая в психиатрической больнице, Роршах заметил, что пациенты с шизофренией реагируют на пятна иначе, чем пациенты с другими диагнозами. Он начал задаваться вопросом, можно ли использовать чернильные пятна для создания профилей для различных психических расстройств.

Поэтому, возможно, вдохновленный как его любимой детской игрой, так и исследованиями символики сновидений Зигмунда Фрейда, Роршах разработал систематический подход к использованию чернильных пятен в качестве инструмента оценки.

Роршах не был первым, кто предположил, что интерпретация человеком неоднозначной сцены может раскрыть скрытые аспекты личности этого человека. Альфред Бине также экспериментировал с идеей использования чернильных пятен как способа проверки творческих способностей и первоначально планировал включить чернильные пятна в свои тесты интеллекта.

использует

Тест Роршаха стал одним из самых популярных психологических тестов. В основном он используется в психотерапии и консультировании.

Те, кто использует его регулярно, делают это как способ получения большого количества качественной информации о человеке, включая его личность, эмоциональное функционирование и модели мышления. Затем терапевт и клиент могут продолжить изучение некоторых из этих проблем во время терапии.

Администрация

Есть 10 официальных чернильных пятен, каждый из которых напечатан на отдельных белых карточках. Пять чернильных пятен — черные и серые; два — черный, серый и красный; а три — разноцветные, без черного.

Во время администрирования экзаменатор будет сидеть рядом с вами. Это помогает им видеть то, что вы видите. Тест включает в себя определенные этапы:

1. Подарок : Экзаменатор будет давать вам по одной карточке за раз и спрашивать вас: «Что это может быть?»
2. Ответить : Вы можете интерпретировать неоднозначное изображение, как хотите. Вы можете сколько угодно долго интерпретировать каждую карту и можете дать столько ответов, сколько захотите. Вы также можете держать карты в любом положении, будь то вверх ногами или боком.
3. Запись : Ваш экзаменатор записывает все, что вы говорите, независимо от того, насколько тривиально. Они отметят время, затраченное на каждый ответ, позицию, в которой держится карточка, ваши эмоции и т. Д. Во время теста.
4. Подтвердите : после того, как вы пройдете по всем чернильным пятнам один раз, ваш исследователь проведет вас через все чернильные пятна еще раз. Цель этого не в получении новой информации, а в том, чтобы помочь экзаменатору увидеть то, что вы видите. Они попросят вас определить, где вы видите то, что вы видели изначально, и благодаря каким особенностям это выглядит так.

В среднем на проведение теста и выставление баллов требуется около 1,5 часов.

Подсчет очков

Так что же именно ищут интерпретаторы теста Роршаха, анализируя ответы на чернильные пятна? Фактическое содержание ответов — это одно, но важны и другие факторы.

Содержимое

Контент относится к названию или классу объектов, используемых в ваших ответах. Некоторое распространенное содержимое включает:

• Целый человек (H) : Целая человеческая фигура.
• Деталь человека (Hd) : Неполная человеческая форма (например, нога) или целая форма без части тела (например, человек без головы).
• Деталь человека (вымышленный или мифологический; HD) : неполная вымышленная или мифологическая фигура человека (например, крылья ангела).
• Деталь животного (объявление) : неполная форма животного (например, голова кошки, клешня краба).
• Секс (Sx) : Все, что связано с половыми органами, действиями сексуального характера или половым размножением (e.г., половой акт, грудь).
• Природа (Na) : Все, что связано с астрономией или погодой (например, солнце, планеты, вода, радуга).

Некоторые ответы довольно распространены, в то время как другие могут быть гораздо более уникальными. Примечательны крайне нетипичные реакции, поскольку они могут указывать на нарушения в образцах мышления.

Расположение

Определение места вашего ответа — еще один элемент, оцениваемый в системе Роршаха. Местоположение означает, сколько чернильного пятна вы использовали, чтобы ответить на вопрос.

• «D», если использовалась обычно описываемая часть блота.
• «Dd», если использовалась необычно описанная или необычная деталь.
• «S», если использовалось белое пространство на заднем плане.
• «W», если для ответа на вопрос было использовано все чернильное пятно.

Детерминанты

Детерминантное кодирование — одна из самых сложных функций оценки по шкале Роршаха. Именно здесь экзаменатор рассматривает причины , по которым вы видите то, что видите.Какие чернильные пятна помогли определить вашу реакцию и как?

Есть шесть широких категорий детерминантов чернильных пятен, на которые вы можете реагировать:

• Цвет
• Форма
• Движение
• Пары и отражения
• Затенение

Например, если вы сообщаете, что видите цветок на карточке 8 из-за красного цвета, ваш экзаменатор может закодировать этот ответ как определитель цвета.

Каждая категория имеет свои собственные подкатегории и существует не менее 26 возможных определяющих кодов.В одном ответе можно использовать более одного детерминанта.

Интерпретация

Интерпретация записи Роршаха — сложный процесс. Это требует обширных знаний о динамике личности в целом, а также значительного опыта работы с методом Роршаха в частности.

Помимо формальных оценок, интерпретация Роршаха также основана на поведении, выраженном во время тестирования, паттернах оценок в ответах, уникальных или последовательных темах в ответах и ​​уникальных или идиосинкразических восприятии.

Относительно быстрый ответ может указывать на непринужденность с другими и комфортность в социальных отношениях. Однако отсроченный ответ может показать, что человек борется с социальным взаимодействием.

Критика

Несмотря на свою популярность, тест Роршаха вызывает споры. Многие критические замечания касаются того, как оценивается тест и имеют ли результаты какую-либо диагностическую ценность.

Множественные системы подсчета очков

До 1970 года существовало пять систем оценки, которые различались настолько сильно, что по сути представляли пять разных версий теста.В 1974 году Джон Экснер опубликовал новую исчерпывающую систему подсчета очков, которая объединила сильнейшие элементы прежних систем.

Система оценки Экснера теперь является стандартным подходом, используемым при проведении, оценке и интерпретации теста Роршаха.

Некоторые эксперты, однако, предупреждают, что, поскольку система оценок Экснера содержит ошибки, клиницисты могут быть склонны к чрезмерной диагностике психотических расстройств, если они в значительной степени полагаются на систему Экснера.

Недостатки надежности

Еще одна важная критика системы Роршаха заключается в том, что ей не хватает надежности.Надежность означает, что вы получаете одинаковые результаты независимо от того, кто ставит оценку теста. Оценка в значительной степени зависит от интерпретации экзаменатора. Из-за этого два экзаменатора могут прийти к двум совершенно разным выводам, глядя на ответы одного и того же человека.

Плохая достоверность

Помимо ранней критики непоследовательной системы подсчета очков, недоброжелатели также придираются к ее обоснованности. Другими словами, измеряет ли он то, что утверждает? В таком случае может ли Роршах правильно оценить ваши личностные характеристики и эмоциональное функционирование?

К сожалению, ответ — решительное нет.Исследования показывают, что Роршах чаще всего не может точно диагностировать большинство психологических расстройств, включая депрессию, тревогу или расстройства личности. Однако исследования показывают, что он имеет ценность для оценки нарушений мышления и симптомов, связанных с шизофренией.

Из-за всех этих проблем в 1999 году несколько психологов рекомендовали мораторий на использование теста в клинических и судебно-медицинских целях — по крайней мере, до тех пор, пока дальнейшие исследования не подтвердят его действительность.

Роршах все еще используется?

Сегодня некоторые психологи отвергают Роршаха как просто пережиток прошлого психологии, псевдонауку наравне с френологией.

Однако, хотя тест с чернильными пятнами не может быть идеальным инструментом, он по-прежнему широко используется, особенно для диагностики шизофрении, что было первоначальной целью Роршаха для этого теста. Тест используется в различных условиях, например в школах, больницах и залах судебных заседаний.

Мир в пятне чернил

Что это может быть? Мотылек, летучая мышь, крылатый музыкальный дирижер, космический корабль? Что бы вы ни увидели, вы также смотрите на Карту I теста Роршаха, серию из 10 неоднозначных симметричных чернильных пятен, которые почти столетие пленили популярную психологию.Хотя его в значительной степени вытеснили количественные методы, такие как Миннесотский многофазный опросник личности (MMPI), сравнительно субъективный интерпретационный стиль Роршаха напоминает нам о силе и эффективности широко гуманистических подходов. В книге «Чернильные пятна: Герман Роршах, его культовый тест и сила видения, » Дэмион Сирлс показывает нам грандиозное видение, скрывающееся за маленькими, кажущимися случайными цветными пятнами, напечатанными на картоне, видение ослепительного разнообразия способов существования человека. в мире.

Сегодняшний спрос на быстрые, дешевые и убедительные оценки поднял такие тесты, как MMPI, к господству. MMPI просит тестировщиков ответить более чем на пятьсот машинно-оцененных вопросов «да / нет» и «правда / ложь», от обыденных («Иногда мне хочется ругаться») до тревожных («Злые духи иногда овладевают мной»). Этот упрощенный и эффективный подход почти во всех отношениях контрастирует с концепцией Роршаха, открытой и стимулирующей интерпретацию как тестировщиков, так и бомбардиров. MMPI, тесты на завершение предложений и тесты рисования оценивают сознательную самопрезентацию человека: тестировщики заполняют ответы, которые звучат правильно, и создают картинки, которые выглядят нормально.Роршах, с головой погружая испытуемых в перцептивную и аффективную неопределенность, выявляет более глубокий и достоверный психический материал. Соответственно, для интерпретации требуется больше времени и навыков, а выводы могут показаться расплывчатыми — условия, которые не получили одобрения у занятых клинических психологов, особенно тех, кто работает со школами и судами. Сегодня Роршах с его неторопливым созерцанием и переменными оценками может показаться пережитком более медленного времени; однако в середине века его чистый гуманизм приобрел огромную популярность среди клинических психологов и их клиентов.

Действительно, увлекательная история теста является предметом The Inkblots , который великолепно исследован, увлекательно написан и полон идей о человеческом восприятии и личности. Inkblots предлагает не только окончательное слово о швейцарском психологе Германе Роршахе (1884–1922), но и подробный взгляд на себя 20-го и 21-го веков, представленный психологическим тестированием. В эпоху сокращения затрат и отмены государственного регулирования книга представляет собой убедительный аргумент в пользу непреходящей ценности теста Роршаха и тех глубин человеческой психологии, к которым он прибегает.Однако истинная гениальность теста заключалась в его привлекательности как для количественных, так и для гуманистических взглядов.

Как работает тест Роршаха? Вопреки широко распространенному мнению, карты не подвергаются упрощенному психоанализу на предмет содержания: вид гениталий или монстров не является решающим моментом. Роршаха интересовали компоненты визуального восприятия, поэтому он подсчитывал количество ответов для каждой карточки; были ли ответы целостными или сосредоточены только на деталях; учитывались ли в ответах форма, цвет и движение.Он обнаружил, что тест может быстро выявить психоз или шизофрению у субъектов, которые отвергали карточки, видели гораздо меньше животных, чем обычные люди, и плохо разбирались в форме. Хотя большое количество необычных ответов могло указывать как на творческий интеллект, так и на полную дисфункцию, тест мог отличить гениальность от заблуждения. В рамках нормального психологического диапазона элегантность теста заключалась в том, что он увязал привычки восприятия с аффективным опытом: например, люди, вовлеченные в движение, проявляли сочувствие, могли чувствовать себя в размытом изображении.Те, кто реагировал на цвет, были эмоционально непостоянными, даже маниакальными. Ответы, сбалансированные по форме и цвету, сочетают в себе интеллектуальные и эмоциональные реакции. Этот метод сочетал в себе романтический дух, который отдавал предпочтение микроскопическим уникальным индивидуальным восприятиям с современной научной уверенностью, что они могут быть рационально организованы и изучены.

Истинный гений теста Роршаха заключается в его привлекательности как для количественных, так и для гуманистических взглядов.

Может ли тест Роршаха точно диагностировать расстройства личности? Согласно беспристрастному мнению Сирлса, да, но с оговорками.В период его расцвета в середине столетия сторонники теста называли его «рентгеновским лучом души», способным за считанные часы раскрыть глубокое понимание, на которое традиционная терапия, основанная на беседе, потратила годы. Тем не менее, начиная с 1950-х годов, его недоброжелатели выступили с разрушительной критикой, демонстрируя, что тест показал немногим лучше, чем шанс предсказать будущие психологические проблемы. Примечательно, что на него снова напали в книге 2003 года « Что не так с Роршахом?». , который наглядно проиллюстрировал высокие ставки его неточностей.Например, шкала Роршаха была и остается широко используемой назначенными судом психологами для принудительного совершения душевнобольных и присуждения опеки над детьми. В одном случае отчим, подвергшийся сексуальному насилию и получивший хорошие баллы по тесту Роршаха, получил право опеки над девочкой из-за протестов ее матери, которая плохо прошла испытания. Сирлс отмечает, что эти тесты были выставлены неправильно, и дает конкурирующие отчеты о блестяще точных показаниях Роршаха. Тем не менее, более убедительным, чем вопрос о реальной эффективности теста, является интеллектуальная и культурная история, которую Сирлз собирает, чтобы понять его растущую и убывающую популярность.Его окончательное обоснование эффективности теста примиряет две стороны субъективной интерпретации и объективного расчета, как это сделал Роршах, когда он кропотливо разработал 10 исходных изображений.

Человек Роршах загадочен и манит, как чернильные изображения. Он описал себя как обладающего «талантом к жизни», который Сирлз умело упоминает в своем отчете о ярком союзе работы и игры, искусства и жизни Роршаха.

Герман Роршах ок. 1910

В качестве штатного врача психиатрической больницы Кромбаха в Херизау, Швейцария, Роршах разработал оригинальные методы, позволяющие понять мысли своих пациентов.Он сделал десятки марионеток для теневой пьесы, к радости заключенных и персонала; он также брал с собой обезьяну, и ее озорство вызывало из панциря характерно невосприимчивых пациентов. Он просил их рисовать и часами анализировал их усилия в своих историях болезни. Идея использования чернильных пятен в психологическом тестировании не была чем-то неслыханным: в 1895 году французский психолог Альфред Бине (известный по тесту IQ Бине-Симона) испытал на них свое воображение, как и аспирант Университетской клиники в Цюрихе. Szymon Hens.Создание случайных симметричных изображений путем складывания забрызганной чернилами страницы было популярной детской игрой с 19 века, и Роршаху это так понравилось, что одноклассники прозвали его «Klex» или «Inkblot». В поисках способа связаться со своими пациентами, который улучшил бы тест на словесные ассоциации Карла Юнга, свободные ассоциации Зигмунда Фрейда и гипноз, Роршах начал экспериментировать с изображениями. Если бы он мог точно откалибровать их двусмысленность — ни слишком узнаваемую, ни слишком бесформенную — тогда он мог бы изучить тонкую связь между восприятием человека и его интерпретацией.Как визуальная информация превратилась в чувство и мысль, достигнув кульминации в самом опыте? Маленькие, тщательно расставленные чернильные пятна ответят на такие большие вопросы.

Трагическая ранняя смерть Роршаха оставила его испытание без внимания, оставив его последующее принятие на волю случая. В течение недели марта 1922 года он страдал от болей в животе, идя по коридорам Кромбаха, согнувшись пополам. Его жена Ольга с опозданием вызвала врача, который сразу же обнаружил аппендицит и вызвал хирурга из Цюриха.Но поздний снег закрыл дороги, и хирург поехал не в тот город, находящийся на расстоянии 15 миль. Дополнительная задержка была решающей. Аппендикс Роршаха разорвался, и он умер на операционном столе от перитонита в возрасте 37 лет. Позже Ольга писала, что когда они ждали хирурга, он сказал ей, что знает, что обречен. «В каком-то смысле это прекрасно — уйти посреди жизни, но это горько », — сказал он.

В прошлом году он опубликовал свою теорию теста с чернильными пятнами в виде книги « Психодиагностика ».Первоначально психиатрический мир не знал, что с этим делать. Однако без его поддержки испытание росло и процветало. Searls документирует свою миграцию в США и ее конкурирующих сторонников: Сэмюэля Бека, который представлял доминирующий, строго научный подход психометрической традиции конца 19-го века и, соответственно, сосредоточился на том, как оценивать результаты теста; и Бруно Клопфер, который продемонстрировал более философскую, целостную позицию, согласно которой тест выявил психическую «конфигурацию» человека. Вражда между двумя соперниками повысила популярность теста в 1930-х годах.Его привлекательность для обоих лагерей обеспечила его успех: он мог использоваться растущим фрейдистским движением, оцениваться подающими надежды бихевиористами и адаптироваться антропологами для изучения психологии незападных культур. Более того, он был достаточно интуитивным, чтобы его могла понять обычная читающая публика, увлеченная горячей темой личности. К началу 1940-х годов колледж Сары Лоуренс проверял весь свой поступающий класс, и армия США адаптировала версию с множественным выбором для проверки новобранцев.Роршах пережил своего изобретателя и захватил культурное воображение, потому что он был доступным, привлекательным и эффективным.

Помогло то, что тест прекрасно подходил для двух взаимосвязанных идеологий: озабоченности середины века глубокой субъективностью и американского империализма времен холодной войны. Тест основывался на концепции проекции, которая связывает эти два образования. Пройдя тест Роршаха, современные западные испытуемые раскрыли всю глубину своей психики. Напротив, антропологическое использование теста среди незападных и колонизированных людей выявило их общую культурную ориентацию больше, чем их уникальные психические глубины.

Согласно убедительному описанию Сирлса, проекция ликвидировала разрыв между фрейдистской психологией и множеством новых диагностических методов, призванных раскрыть личный мир западного человека. Как Сирлс озвучивает предпосылку, лежащую в основе проекции: «Мир — это темное, хаотичное место. Оно имеет только то значение, которое мы ему придаем. Но воспринимаю ли я форму вещей или создаю ее? Я найду волка в пятне или положу туда? » К середине века проективные тесты процветали, и к тесту Роршаха присоединились задачи на завершение предложений, карикатуры без заголовков, тест рисования «Дом-Дерево-Человек» и Тематический апперцепционный тест, который давал испытуемым неоднозначные образы социальных отношений, почерпнутые из страницы средних журналов, таких как The Saturday Evening Post .В эти годы, период наибольшего могущества, Роршах достиг своего культового статуса в массовой культуре, появляясь в голливудских фильмах, таких как «Темное зеркало » (1946) и на страницах журнала Life , и нашло отражение в искусстве. такие как абстрактные экспрессионистские картины Джексона Поллока.

Карточка 6GF Тематического апперцептивного теста

В то время как другие популярные проективные тесты углублялись в скрытую психику человека, только тест Роршаха также распространился по всему миру в антропологических оценках незападных культур.Поскольку считалось, что психология имеет отношение к национальной безопасности, правительство США финансировало тесты Роршаха на людях от Микронезии до Марокко и Вьетнама. В 1952 году Корнельский университет даже арендовал перуанскую деревню, изучая ее жителей и собирая данные, якобы подробно описывающие все следы их психической жизни. Аналогичное антропологическое исследование, проведенное гарвардским психологом Бертом Капланом, было направлено на сохранение психических явлений «примитивных» людей в том, что Ребекка Лемова назвала «базой данных сновидений».В отличие от западного столичного психоанализа, эти детали собирались не для индивидуальной терапии, а для имперского сбора информации и контроля.

Падение этого теста является темой самой острой главы The Inkblots , посвященной нацистским тестам Роршаха. Сирлс убедительно показывает, как сам тест не оправдал ожиданий культуры, подтверждающих психологическую ненормальность нюрнбергских подсудимых, которая могла бы объяснить их готовность разыграть зверства Холокоста.Вместо этого эксперты интерпретировали тесты Роршаха Германа Геринга, Адольфа Эйхмана и многих других как более или менее нормальные, открытие, которое подтвердило тезис Ханны Арендт о «банальности зла» в Eichmann in Jersualem (1963). Хотя в данном случае никакое психологическое или социологическое объяснение не могло удовлетворить жажду морального суждения, неспособность теста описать психологический профиль беспрецедентного зла нанесла ему «сокрушительный удар», по словам Серлза.Более того, нацистские тесты Роршаха вместе с печально известными экспериментами Стэнли Милгрэма с электрошоком вызвали растущее недоверие к психологам и психиатрам как к авторитарным фигурам.

Контркультура 1960-х годов ознаменовала собой низшую точку теста: новый акцент того периода на релятивизме превратил все в бесконечный тест Роршаха, который никогда не мог быть оценен или оценен рационально. В 60-х годах психическое заболевание было переосмыслено как личная правда. И наоборот, сам тест приобрел дурную славу, потому что ученые — особенно финансируемые государством — никогда не могли по-настоящему увидеть уникальную сущность человека.Пути к личной правде все чаще искали не с помощью анализа внутренней мотивации, а с помощью психоделиков, поведенческих теорий и общественных проектов в области психического здоровья, основанных на социально-экономической критике. Хотя психолог Джон Экснер возродил Роршаха с новой системой оценок в 1980-х, 1960-е убили веру в его описательную силу и положили конец его первоначальному культурному авторитету.

В наши дни «Роршах» занял меньшую нишу, чем когда-то: по оценкам Серлса, в США его дают от 50 000 до 100 000 раз в год, по сравнению с пиком 1960-х годов в 1 000 000.Он также готов к возвращению в терапевтическую практику и в исследования зрительного интеллекта, зеркальных нейронов, болезни Альцгеймера, внимания и, что, возможно, наиболее важно, сочувствия. Именно по этой последней теме Сирлс делает наиболее глубокое заявление в своей книге о том, что тест Роршаха работает, потому что он выявляет универсальный визуальный компонент эмпатии. По его словам, «вы не почувствуете чьих-то чувств, не увидев этого человека таким, какой он есть на самом деле, а это означает, что вы видите мир их глазами». «Сила видения» заслужила дурную репутацию в академической критике современной власти, которая, как говорят, использует зрение для объективирования и наблюдения за своими объектами.Гуманистический взгляд Сирлса, напротив, восстанавливает видение универсального либерального способа сочувствия. Его широкое, но точное описание теста Роршаха показывает огромный потенциал социальных связей, скрытый в простом вопросе: «Что это может быть?»

Вторая клякса теста Роршаха. Wikimedia Commons

Лучшее изображение: первая клякса теста Роршаха. Wikimedia Commons

Техника, теория и устранение неполадок

Вестерн-блоттинг часто используется в исследованиях для разделения и идентификации белков.В этом методе смесь белков разделяется по молекулярной массе и, следовательно, по типу с помощью гель-электрофореза. Затем эти результаты переносятся на мембрану, образуя полосу для каждого белка. Затем мембрану инкубируют с метками антител, специфичных к интересующему белку.

Несвязанное антитело смывается, оставляя только связанное антитело к интересующему белку. Связанные антитела затем обнаруживаются проявлением пленки. Поскольку антитела связываются только с интересующим белком, должна быть видна только одна полоса.Толщина полосы соответствует количеству присутствующего белка; таким образом, стандарт может указывать на количество присутствующего белка. В документе сначала будет описан протокол вестерн-блоттинга с изображениями, которые помогут читателю и теории рационализировать протокол. За этим последует теоретическое объяснение процедуры, а в следующем разделе — советы по поиску и устранению распространенных проблем.

Теория

Подготовка образца

Лизаты клеток являются наиболее распространенной формой образцов, используемых для вестерн-блоттинга.Экстракция белка пытается собрать все белки в цитозоле клетки. Это следует делать при низкой температуре с ингибиторами протеаз, чтобы предотвратить денатурацию белков. Поскольку образец ткани демонстрирует более высокую степень структуры, для извлечения белков необходимо механическое изобретение, такое как гомогенизация или обработка ультразвуком.

После экстракции белка очень важно иметь хорошее представление о концентрации экстракта. В конечном итоге это позволяет исследователю гарантировать, что образцы сравниваются на эквивалентной основе.Концентрацию белка часто измеряют с помощью спектрофотометра. Использование этой концентрации позволяет измерить массу белка, загружаемого в каждую лунку, по соотношению между концентрацией, массой и объемом.

После определения подходящего объема образца его разбавляют загрузочным буфером, который содержит глицерин, так что образцы легко погружаются в лунки геля. Следящий краситель (бромфеноловый синий) также присутствует в буфере, что позволяет исследователю увидеть, насколько далеко продвинулось разделение.Образец нагревают после разбавления в загрузочном буфере, чтобы денатурировать структуру более высокого порядка, сохраняя при этом сульфидные мостики. Денатурация высокой структуры гарантирует, что отрицательный заряд аминокислот не нейтрализуется, позволяя белку перемещаться в электрическом поле (применяемом во время электропереноса).

Также очень важно иметь положительный и отрицательный контроли для образца. Для положительного контроля используется известный источник целевого белка, такой как очищенный белок или контрольный лизат.Это помогает подтвердить идентичность белка и активность антитела. Отрицательный контроль представляет собой нулевую клеточную линию, такую ​​как β-актин, также используется для подтверждения того, что окрашивание не является неспецифическим.

Гель-электрофорез

Вестерн-блот использует два разных типа агарозного геля: складывающий и разделяющий гель. Гель с более высокой степенью укладки имеет слабую кислотность (pH 6,8) и имеет более низкую концентрацию акриламида, образуя пористый гель, который плохо отделяет белок, но позволяет им образовывать тонкие, четко очерченные полосы.Нижний гель, называемый разделяющим или разделяющим гелем, является основным (pH 8,8) и имеет более высокое содержание полиакриламида, что сужает поры геля. Таким образом, в этом геле белки разделены по размеру больше, так как более мелкие белки перемещаются легче и, следовательно, быстрее, чем более крупные белки.

Белки при загрузке на гель имеют отрицательный заряд, поскольку они денатурированы при нагревании, и будут перемещаться к положительному электроду при приложении напряжения. Гели обычно получают путем заливки их между двумя стеклянными или пластиковыми пластинами с использованием раствора, описанного в разделе протокола.Образцы и маркер загружаются в лунки, а пустые лунки загружаются буфером для образцов. Затем гель подключают к источнику питания и дают ему растечься. Напряжение очень важно, так как высокое напряжение может перегреть и исказить полосы.

Блоттинг

После разделения белковой смеси ее переносят на мембрану. Перенос осуществляется с помощью электрического поля, ориентированного перпендикулярно поверхности геля, в результате чего белки перемещаются из геля на мембрану.Мембрана помещается между поверхностью геля и положительным электродом в виде сэндвича. Сэндвич включает волокнистую прокладку (губку) на каждом конце и фильтровальную бумагу для защиты геля и промокательную мембрану []. Здесь очень важны две вещи: (1) тесный контакт геля и мембраны для обеспечения четкого изображения и (2) размещение мембраны между гелем и положительным электродом. Мембрана должна быть размещена как таковая, чтобы отрицательно заряженные белки могли мигрировать из геля на мембрану.Этот тип переноса называется электрофоретическим переносом и может выполняться в полусухих или влажных условиях. Влажные условия обычно более надежны, так как менее вероятно высыхание геля, и они предпочтительны для более крупных белков.

Сборка сэндвича в вестерн-блоте

Мембрана, твердая подложка, является неотъемлемой частью этого процесса. Есть два типа мембран: нитроцеллюлоза и ПВДФ. Нитроцеллюлоза используется из-за ее высокого сродства к белку и способности удерживать.Однако он хрупкий и не позволяет использовать мембрану для повторного зондирования. В этом отношении мембраны из ПВДФ обеспечивают лучшую механическую поддержку и позволяют повторно зондировать и хранить блот. Однако фон PVDF-мембран выше, поэтому очень важна тщательная промывка.

Промывание, блокирование и инкубация антител

Блокирование — очень важный этап вестерн-блоттинга, поскольку он предотвращает неспецифическое связывание антител с мембраной. Блокировка часто производится с помощью 5% BSA или обезжиренного сухого молока, разбавленного TBST для уменьшения фона.

Часто предпочитают обезжиренное сухое молоко, поскольку оно недорогое и широко доступно. Однако молочные белки совместимы не со всеми метками для обнаружения, поэтому следует внимательно выбирать подходящий блокирующий раствор. Например, растворы, блокирующие БСА, предпочтительны с метками биотина и АР-антител и антифосфопротеиновых антител, поскольку молоко содержит казеин, который сам по себе является фосфопротеином и биотином, что мешает результатам анализа. Часто хорошая стратегия — инкубировать первичное антитело с BSA, поскольку его обычно требуется в более высоких количествах, чем вторичное антитело.Помещение его в раствор BSA позволяет повторно использовать антитело, если блот не дает хорошего результата.

Концентрация антитела зависит от инструкции производителя. Антитело можно развести в промывочном буфере, таком как PBS или TBST. Промывание очень важно, поскольку оно сводит к минимуму фон и удаляет несвязанные антитела. Однако мембрану не следует оставлять для стирки на очень долгое время, так как это также может уменьшить сигнал.

Затем мембрану выявляют с помощью антитела-метки, обычно с помощью фермента, такого как пероксидаза хрена (HRP), который обнаруживается по сигналу, который он производит, в соответствии с положением белка-мишени.Этот сигнал фиксируется на пленке, которая обычно проявляется в темной комнате.

Количественная оценка

Очень важно знать, что данные, полученные с помощью вестерн-блоттинга, обычно считаются полуколичественными. Это потому, что он обеспечивает относительное сравнение уровней белка, но не абсолютную меру количества. На это есть две причины; Во-первых, существуют различия в загрузке и скорости переноса между образцами на отдельных дорожках, которые различаются для разных блотов.Эти различия необходимо будет стандартизировать, прежде чем можно будет провести более точное сравнение. Во-вторых, сигнал, генерируемый детектированием, не является линейным в диапазоне концентраций образцов. Таким образом, поскольку создаваемый сигнал не является линейным, его не следует использовать для моделирования концентрации.

Устранение неполадок

Несмотря на то, что процедура вестерн-блоттинга проста, может возникнуть множество проблем, приводящих к неожиданным результатам. Проблему можно разделить на пять категорий: (1) необычные или неожиданные полосы, (2) отсутствие полос, (3) слабые полосы или слабый сигнал, (4) высокий фон на пятне и (5) неоднородные или неравномерные пятна на пятнах. пятно.

Необычные или неожиданные полосы могут быть следствием деградации протеазой, которая приводит к образованию полос в неожиданных положениях. В этом случае рекомендуется использовать свежий образец, который хранился на льду, или изменить антитело. Если кажется, что белок находится в слишком высоком положении, повторный нагрев образца может помочь разрушить структуру четвертичного белка. Точно так же размытые полосы часто возникают из-за высокого напряжения или пузырьков воздуха, присутствующих во время переноса. В этом случае необходимо убедиться, что гель работает при более низком напряжении и что сэндвич для переноса подготовлен должным образом.Кроме того, решить проблему может также изменение рабочего буфера. Плоские полосы могут быть результатом слишком быстрого прохождения геля из-за низкого сопротивления. Чтобы исправить это, гель следует оптимизировать, чтобы он соответствовал образцу. Наконец, белые (отрицательные) полосы на пленке вызваны слишком большим количеством белка или антител.

Другая проблема: полосы также не могут возникнуть по многим причинам, связанным с используемыми антителами, антигенами или буфером. Если используется неподходящее антитело, первичное или вторичное, полоса не будет видна.Кроме того, концентрация антитела также должна быть подходящей; если концентрация слишком низкая, сигнал может быть не виден. Важно помнить, что некоторые антитела нельзя использовать для вестерн-блоттинга. Другой причиной отсутствия видимых полос является самая низкая концентрация или отсутствие антигена. В этом случае можно использовать антиген из другого источника, чтобы подтвердить, связана ли проблема с образцом или с другими элементами, такими как антитело. Более того, длительная стирка также может уменьшить сигнал.Буферы также могут способствовать возникновению проблемы. Следует убедиться, что все буферы, такие как буфер передачи, TBST, рабочий буфер и ECL, новые и незагрязненные. Если буферы загрязнены азидом натрия, он может инактивировать HRP.

Точно так же слабые сигналы могут быть вызваны низкой концентрацией антитела или антигена. Увеличение времени экспозиции также может помочь сделать полоску более четкой. Другой причиной может быть обезжиренное сухое молоко, маскирующее антиген. В этом случае используйте BSA или уменьшите количество используемого молока.

Высокий фон часто вызван слишком высокой концентрацией антител, которые могут связываться с мембранами PVDF. Другой проблемой могут быть буферы, которые могут быть слишком старыми. Увеличение времени стирки также может помочь уменьшить фон. Кроме того, к этой проблеме может привести слишком высокая экспозиция. Поэтому рекомендуется проверять разное время выдержки для достижения оптимального времени.

Пятнистые и неровные пятна на пятнах обычно возникают из-за неправильного переноса. Если между гелем и мембраной остались пузырьки воздуха, на пленке он станет темнее.Также важно использовать шейкер для всей инкубации, чтобы не было неравномерного перемешивания во время инкубации. И снова мытье имеет первостепенное значение для размытия фона. Эта проблема также может быть вызвана связыванием антител с блокирующими агентами; в этом случае следует попробовать другой блокирующий агент. Фильтрация блокирующего агента также может помочь удалить некоторые загрязнения. Наконец, эта проблема также может быть вызвана агрегацией вторичного антитела; в этом случае вторичное антитело следует центрифугировать и профильтровать для удаления агрегатов.

постобработка — чернильное пятно Роршаха (также известное как Психологические тестовые изображения) шейдер

Чтобы получить этот аутентичный чернильный вид, лучше всего, вероятно, собрать библиотеку изображений чернильных пятен, полос и потеков.

Затем вы можете случайным образом выбрать некоторое количество из них, чтобы расположить и случайным образом повернуть на половину изображения. (Со смещением к краю шва, чтобы середина теста Роршаха была наиболее плотной. Вы могли бы использовать систему частиц для этого рассеивания)

Выполните рендеринг в текстуру с зеркальным режимом обтекания, и теперь у вас есть симметричное чернильное пятно, которое можно отображать без каких-либо настраиваемых шейдеров.

Вот пример результата, который можно получить таким образом:

Если вас не волнуют эти подписные чернильные формы, вы также можете сделать это с помощью шейдера, который ограничивает два шаблона шума, прокручивающих друг друга. Он приобретает симметричную неправильную форму, которую можно заставить непрерывно меняться с течением времени, если хотите, но это не будет похоже на чернила.

Это метод, который dnk drone.vs.drones предлагает в другом ответе, и он может дать примерно следующие результаты:

Edit: вот подробное описание того, как работает шумовой подход…

Сначала мы начнем с шума. Шум 1 / f, часто называемый турбулентностью, работает довольно хорошо. Вы можете запекать мозаичный шум в текстуру, а затем суммировать из нее один или несколько сэмплов, изменяя их смещения / вращения, чтобы варьировать получаемые формы.

Если мы установим пороговое значение напрямую, мы получим изображение, подобное изображенному справа. Формы примерно правильные, но чтобы выглядеть как тест Роршаха, он должен быть наиболее плотным около середины и более тонким к краям.

Мы можем сделать эту работу, добавив градиент поверх (контраст здесь преувеличен для ясности)

Затем порог, взяв (сумма - blackLevel) * контраст

(Здесь blackLevel — это параметр, который контролирует, насколько пятнистый или пятнистый будет результат — более высокие значения означают более сплошной черный цвет — и контраст контролирует, насколько резкими будут края)

Зеркальное отображение этого изображения даст вам приведенный выше пример Роршаха.

Новые стандарты представления данных об изображениях: новая политика PLOS ONE и PLOS Biology требует необработанных данных изображений блотов и гелей

Примечание. Этот блог был написан Рене Хох, старшим редактором, менеджером группы

Целостность данных изображений в первичных исследовательских статьях стала серьезной проблемой в этике публикации. Исследования, посвященные частоте проблем с изображениями, показали, что 4-25% опубликованных исследовательских статей в области биомедицины и наук о жизни могут включать несообщаемое сращивание изображений, дублирование и / или манипуляции с потенциальными последствиями для надежности результатов [1-4] .Эти проблемы могут возникать из-за честных ошибок, попыток улучшить или уточнить результаты, плохого управления данными, плохого знания стандартов передовой практики в представлении данных изображений или мошеннического искажения результатов экспериментов. Какова бы ни была основная причина, проблемы с целостностью изображений могут нанести ущерб надежности научной литературы и доверию общественности к ней.

Что могут делать журналы?

До сих пор большинство случаев, связанных с изображениями в PLOS ONE и PLOS Biology , были подняты после публикации, хотя некоторые из них были замечены во время рецензирования.Мы следим за такими проблемами независимо от того, когда они возникают, но авторам, журналам и читателям было бы полезно попытаться выявить и решить больше этих проблем до публикации. С этой целью, как недавно обсуждалось на 6-й Всемирной конференции по честности исследований, некоторые журналы внедрили специальный просмотр изображений перед публикацией; разработчики работают над программными инструментами, помогающими выявлять такие проблемы, как сращивание и дублирование; и группа в Headt Center в Берлине разрабатывает базу данных целостности изображений [5], которую можно использовать для тестирования новых программных инструментов.Требуются решения, которые можно применять в широком масштабе в контексте журнальных проверок и / или экспертной оценки.

В PLOS ONE и PLOS Biology мы применяем политический подход для упреждающего решения проблемы целостности изображений для результатов блотов и гелей: теперь мы требуем, чтобы авторы отправляли исходные необработанные изображения для поддержки всех представленных данных изображений блотов и гелей. в рисунках или вспомогательных информационных файлах. Необработанные данные будут оцениваться во время экспертной оценки ( PLOS ONE ) или перед принятием ( PLOS Biology ), и если рукопись будет принята, основные данные изображения будут опубликованы в качестве вспомогательной информации или предоставлены через общедоступное хранилище данных.

Зачем нужны необработанные данные блоттинга и геля?

Наша новая политика фокусируется на отчетах о пятнах и гелях, потому что эти типы изображений составляют наиболее распространенную категорию проблем с изображениями, с которыми сталкиваются наши редакционные группы, а необработанные данные изображения, лежащие в основе этих цифр, особенно информативны для уточнения надежности представленных результатов. В соответствии с новой политикой редакторы и рецензенты будут иметь доступ к основным данным изображения перед публикацией, чтобы они могли проверить полученные результаты и учитывать эти данные при принятии решений относительно того, соответствует ли работа руководящим принципам журналов и требованиям к публикации.Имея необработанные данные, редакторы и рецензенты будут лучше подготовлены для выявления любых опасений по поводу этих результатов в контексте экспертной оценки, чтобы авторы могли задавать вопросы о своих данных и устранять ошибки честной отчетности до публикации. Благодаря этой новой политике и поддержке наших авторов, академических редакторов и рецензентов мы стремимся повысить целостность и воспроизводимость наших опубликованных статей.

Рис. 1. Доступность данных изображения, запрашиваемых в случаях, связанных с проблемами изображения после публикации

(на основе

Новая политика приведет наши требования к отчетности по результатам блоттинга и геля в большее соответствие с PLOS и целями открытого обмена данными большего сообщества.С 2014 года политика доступности данных PLOS требует, чтобы авторы предоставляли базовые данные, подтверждающие результаты статьи. В отношении данных изображений наша политика оговаривает, что авторы предоставляют «образцы» изображений для подтверждения результатов, но не предоставили четких инструкций относительно наших ожиданий в отношении образцов изображений. Можно рассматривать опубликованные панели с фигурами как репрезентативные образцы изображений, но они редко включают исходные данные изображения: изображения обычно обрезаются, корректируются, а в некоторых случаях обрабатываются (растягиваются, соединяются, регулируется контраст и т. Д.) во время подготовки рисунка. Несмотря на то, что такие изменения могут быть приемлемыми, если они прозрачно сообщены и соответствуют стандартам передовой практики, они также могут вызвать вопросы о целостности рисунка, затруднить оценку результатов и в некоторых случаях привести к потере важной информации, например, о специфичности реагента. или экспериментальные контроли. Исходные данные играют важную роль в прояснении таких вопросов, когда они возникают, но, к сожалению, авторы часто не могут предоставить эти данные после публикации (рис. 1 и [6]).Наша новая политика подробно разъясняет наши требования к данным изображения блотов / гелей и направлена ​​на обеспечение доступности данных изображений блотов / гелей после публикации статьи. Мы также обновили наши инструкции по составлению отчетов по блотам / гелям и подготовке фигур, чтобы повысить осведомленность о передовых методах представления блот и гелей и обеспечить прозрачность в отчетности.

Мы искренне благодарим всех, кто давал советы по этим недавним обновлениям PLOS ONE и PLOS Biology , и мы заранее благодарим наших авторов за сотрудничество с нами над этими более высокими стандартами представления данных изображений.Мы понимаем, что новая политика может потребовать дополнительной работы, но мы надеемся, что эти усилия положительно повлияют на целостность и воспроизводимость опубликованных данных и в конечном итоге принесут пользу научному сообществу.

Список литературы

1. Bik EM, Casadevall A, Fang FC. Распространенность ненадлежащего дублирования изображений в публикациях по биомедицинским исследованиям. mBio 7 (3): e00809-16. (2016) DOI: 10.1128 / mBio.00809-16. http://mbio.asm.org/content/7/3/e00809-16.full
2. Оксволд, МП.Частота дублирования данных в случайно выбранном пуле научных публикаций. Наука и инженерная этика 22 (2): 487-496. (2015) https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs11948-015-9668-7
3. Бик Е.М., Фанг Ф.К., Куллас А.Л., Дэвис Р.Дж., Касадевалл А. Анализ и исправление несоответствующего дублирования изображений: опыт молекулярной и клеточной биологии. Mol Cell Biol. 38 (20). pii: e00309-18. (2018) DOI: 10.1128 / MCB.00309-18. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30037982
4. Кристофер Дж.Выявлена ​​систематическая фабрикация научных изображений. Письма FEBS 592 (18): 3027-3029. (2018) https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1873-3468.13201
5. Бек Т. Борьба с неправомерным использованием изображений в науке: новая база данных Гумбольдта предоставляет «недостающее звено». Elsevier Connect, 9 октября 2018 г. https://www.elsevier.com/connect/combating-image-misuse-in-science-new-humboldt-database-provides-missing-link
6. Vines TH, Альберт AYK, Эндрю Р.Л., Дебарре Ф. и др. Доступность данных исследований быстро снижается с возрастом статьи.Current Biology 24 (1): 94-97. (2014) https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960982213014000