Черная клякса / Блог Zemlyanin / Мир Адвайты

Мне в своё время попался поучительный рассказец-притча. Идея в притче очень была по сердцу, но смысл там был подан… как бы помягче сказать… слишком упрощенно. Но я решил сохранить здесь эту историю и текст оставил так как есть.

Однажды учитель, войдя в класс, попросил своих учеников приготовиться к очень сложному заданию. Ученики с тревогой ожидали, что же им предстоит выполнить.

Когда они получили листы с заданиями, они очень удивились, потому что на них ничего не было. Учитель, видя их недоумение, попросил перевернуть листы и описать как можно подробнее то, что они увидят. И что же там было? Черная клякса! И всё.

Ученики долго корпели над поставленной задачей. В конце занятия учитель собрал все ответы и стал зачитывать их вслух. Все присутствующие, без исключения, пытались рассказать как можно подробнее об увиденной черной кляксе – какого она размера, цвета, как расположена на листе, вверху, внизу или посередине, на что она похожа.

У кого-то на необычное животное, у кого-то на старинное здание, а кто-то даже увидел в черных очертаниях прекрасную девушку.

В конце концов, когда все ответы были зачитаны, учитель сказал, обращаясь к притихшей аудитории:

«Я не собирался оценивать видение каждого из вас черной кляксы. Я просто хотел узнать, видит ли кто-то на этом листе что-то, кроме черного пятна.

Оказалось, никто. Никто из вас не написал о белой части бумаги. Вы все сосредоточились на черной точке – и то же самое происходит в наших жизнях. У нас есть возможность обладать всеми радостями жизни, но мы всегда сосредотачиваемся на темных пятнах.

Наша жизнь — подарок, сделанный нам с любовью и добром Богом, и у нас всегда есть причины радоваться – природа, пробуждающаяся каждый день, любимая семья, наши друзья вокруг, работа, которая обеспечивает нам средства к существованию и многое другое…

Однако мы сосредотачиваемся только на темных пятнах – на проблемах со здоровьем, которые нас беспокоят, на отсутствие денег, на сложных отношениях с домочадцами и тому подобное».

гранж-фон 2 eps | UIDownload

гранж-фон 2 eps

ключевые слова

• Абстрактные
• абстрактный фон узор вектор
• Абстрактный фон вектор
• абстрактный фон вектор AI
• абстрактный фон вектор hd
• абстрактный фон векторные иллюстрации скачать бесплатно
• абстрактный фон вектор psd скачать бесплатно
• абстрактный векторный фон hd
• абстрактный вектор бабочка фон
• фон
• фоны
• пятно
• синий абстрактный фон вектор
• круг
• круги векторный фон
• зеленый
• зеленый вектор графика дизайн фон png
• гранж
• гранж векторные фоны
• гранж вектор круг
• полутон
• полутоновый векторный фон
• полутоновый вектор круг
• чернила
• чернила клякса картинки
• чернила клякса вектор
• чернила картинки фоны
• чернила брызги вектор
• краска
• краска пятно клипарт
• брызги краски
• брызги краски вектор
• брызги
• всплеск
• брызги клипарт без фона
• всплеск векторный фон
• вектор серый градиент абстрактный фон
• белый
• гранж-фон 2
• eps
• гранж-фон
• 2

DMCA Contact Us

бесплатная загрузка ( eps, 1. 14MB )

Связанная векторная графика

• Гранж Текстура eps ai
• Мокап логотипа тиснения кожи №2 psd
• 3D Wall Logo MockUp # 2 psd
• Бесплатные векторные цветок 2 eps
• Бесшовные фоны многоугольника Vol.2 psd pat
• Гранж-рамка eps
• гранж брызги вектор eps
• org/ImageObject»> бесплатный штрих-код вектор 2 eps
• Стили отраженного текста Chrome, том 2 psd
• Красный гранж-фон eps
• Версаче Фон 2 Вектор eps svg
• Гранж красочные баннеры ai
• Промышленный гранж-фон eps
• Монохромный гранж текстуры eps
• Гранж текстуры вектор svg ai
• Макет тисненой визитки №2 psd
• org/ImageObject»> Бесплатные листья 2 векторов ai svg
• Стрелки Disney Style 2 из легких материалов eps
• Грязный гранж-фон eps ai
• Исламская граница Том 2 вектор ai eps svg
• Макет логотипа с гравировкой на дереве №2 psd
• Гранж белые баннеры вектор svg ai
• Вектор гранж искусство svg ai eps
• Мазки кисти гранж ai
• org/ImageObject»> Тотем черепахи вектор 2 eps
• Старый гранж старинные бумажные текстуры ai eps svg
• 3 графических стиля в Illustrator, том 2 ai
• Подробная текстура гранж eps
• Гранж Штрихи ai
• Гранж-баннеры ai
• Векторный гранж текстуры svg eps ai
• Металлическая текстура черный гранж eps
• org/ImageObject»> Гранж рамки для фотографий eps svg
• 013d золотой текстовый эффект 2 превью psd
• Череп гранж бесшовные модели черный вектор eps
• гранж полутоновых точек узор фона eps
• Коллекция краев гранж eps
• Абстрактная волна с гранж фон вектор psd
• Наруто персонажей вектор 2 eps
• Гранж красочные брызги eps
• org/ImageObject»> Череп гранж фон векторов ai eps
• Песчаный гранж фоновой текстуры svg ai eps
• Гранж текстуры фона в черный цвет ai eps
• Гранж текстуры фона eps ai
• Художественные кисти иллюстратор 2 ai
• Гранж расписанные мазки кистью eps
• Векторный гранж наложения текстуры svg ai
• Набор векторных материалов гранж черная рамка ai
• org/ImageObject»> Винтаж гранж-фон вектор ai eps
• Красный гранж-фон eps

Загрузи больше

• Contact Us

Захаров против кляксы – Православный журнал «Фома»

Приблизительное время чтения: 9 мин.

Недавно в «Фейсбуке» разгорелась полемика о том, каков должен быть язык школьных учебников, должны ли они говорить с детьми языком прошлого века или, напротив, оперировать реалиями сегодняшнего, а то и завтрашнего дня. Позиции были высказаны разные. Мы приводим подборку основных мнений, экспертный комментарий — и надеемся, что в результате читатели смогут принять участие в этом крайне важном обсуждении.

Внимание! —  

в конце публикации — просьба ответить на наш вопрос.

 

Суть:

Руководитель рекрутингового портала Superjob Алексей Захаров возмутился у себя в «Фейсбуке» тем, что наших детей обучают по пособиям, которые говорят на давно устаревшем языке.

Он повесил вот эту картинку

С сайта издательства «Просвещение»

и написал под ней:

2016 год. Издательство Просвещение. Страница номер девять. И.Токмакова. Аля, Кляксич и буква «A».

Проверочный вопрос имеется: «Знаешь ли ты, что такое «клякса»? Посмотри в Толковом словаре или спроси у родителей».

Клякса, Карл!!! 2016 год. Сказка написана в 60-х, кажется. Там же и школа осталась вместе с Минобром и издательством Просвещение!

А ты знаешь, что такое клякса? — Жми Лайк.

Не знаешь, что такое клякса? — Жми репост!

 

 

По делу высказались:

‪Наталия Мушкарёва:

А в чем вопрос?

У наших младших детей это уже два года подряд (дети же разных возрастов) излюбленная книга для самостоятельного чтения и чтения сестренкой первоклашкой брату-дошкольнику. Чудные иллюстрации Чижикова, издание каких-то замшелых советских годов, прекрасное пособие для узнавания букв.

‪Алексей Захаров:

Замечу, я совершенно не против сказки как таковой и Кляксича. Но.

Вопрос простой.

Мы про «завтра» детей в школе (дома — дело иное) должны учить при малейшей возможности?.. Или про вчера?

Наталия Мушкарева:

Мы им должны про вечное. И про вчера, как проверенное временем. А простой вопрос довольно лукав, простите. Если сказать — нет, не должны, то ты тут же противник всяческого прогресса и светлого будущего наших детей. Но что такое — учить завтрашнему? Навыкам программирования? Крестьянскому труду, ибо всех роботы заменят? Выживанию в экстремальных условиях, особенно экологически экстремальных? В целом по первой эмоциональной моей реакции — нет, при любой возможности мы не должны учить первоклассников пресловутому «завтра».

‪Владимир Гурболиков:

А я бы, кстати, все же расширил вопрос.

Поскольку одно дело — единственную кляксу из этого учебника подвинуть, а другое — если учебник весь построен на «кляксах». ..

Каков общий баланс в этом учебнике?

‪Алексей Захаров:

Учебник весь построен на классике.

Слов: космос, компьютер, аэропорт, коньковый ход, формула 1, Интернет, видеоролик, игра с компьютером, клавиатура и прочего хлама там не наблюдается. Мышей — в избытке.

Тех, что в поле водятся.

‪Alla Tretyakova:

Вчера читали с сыном стихотворение Михалкова «Чистописание». Пришлось объяснять не только, что такое клякса, но и что такое перо ))))

«Дает ко-ро-ва мо-ло-ко»

Перо цепляется за «ко»,

‪И клякса чёрная, как жук,

‪С конца пера сползает вдруг.

‪Ольга Солдатенкова:

А что, на Ваш взгляд, актуально детям в 1-м классе?

И потом это всего лишь эпизод, который как раз таки дает понять как далеко в своем развитии шагнул человек.

 

‪Алексей Захаров:

Дома с ребёнком можно и про кляксу и про перо.

Но в школе…

Ну что-нибудь про то, как Байт поссорился с Килобайтом… Про то, что буквы на клавиатуре телефона перемешались… Нет?

‪Vitaly Kaplan:

Давайте обозначим проблему так: что важнее в школьном обучении — рассказывать о прошлом или готовить к будущему? Понятно, что тут не «или-или», а «и-и». Невозможно состояться как личность в настоящем, не зная прошлого, не ощущая с ним связей. Но невозможно и жить в настоящем, будучи всецело устремлённым в прошлое. Поэтому — «и-и». Но спор идёт о балансе, о соотношении того и другого. Ведь ресурсы-то ограниченные. И ресурсы восприятия, и учебный план, и финансы, само собой. Невозможно идеально научить всему. Невозможно стопроцентно научить и про кляксы, и про синхрофазотроны. Чем-то придётся жертвовать, на чём-то придётся делать акцент.

‪С чем я безусловно согласен — нельзя строить обучение, пользуясь устаревшими понятиями как самоочевидными для школьника. Нельзя говорить о математике или о морали, в качестве фона используя кляксы. Опираться нужно на те понятия, которые у ребёнка вопросов не вызывают. Не на кляксы, а на планшеты.

‪С чем я безусловно несогласен — нельзя обойтись без клякс. То есть нельзя готовить ребёнка к жизни в будущем, не рассказывая ему о прошлом. Причём рассказ о прошлом — это не только исторические факты типа «в 1917 году произошла революция», но и то, как люди тогда жили, чем жили, что ели, что читали, что любили, над чем смеялись, кого боялись. В том числе и про кляксы. Только таким образом создаётся связь времён, восприятие себя в контексте истории. И то, что сейчас такого восприятия практически нет, что дети понятия не имеют о том, что было до их рождения — это очень плохо. Тот, кто не умеет оценивать происходящее в исторической перспективе, тот легко становится объектом всяческих манипуляций.

‪Поэтому я за кляксу. Но за кляксу, которая не ставится во главу угла.

 

Комментарий эксперта: «Здесь нет противоречия»

Ирина Лукьянова, учитель литературы

Я не вижу ничего дурного в том, чтобы ребенок узнал слово «клякса». Честно говоря, если бы моему ребенку в учебнике попалось слово «клякса», я притащила бы домой стальное перо и разноцветные чернила — и мы бы с ребенком сажали кляксы, учились писать пером, делали бы из клякс деревья, раздувая чернила из пустой трубочки, превращали бы кляксы в цветы и звезды, складывали бы из них пятна роршаха и дорисовывали к пятнам картины. И само по себе понятие «клякса» дает большой педагогический простор: есть о чем поговорить с ребенком, что ему рассказать (как бабушка писала в школе — пером и чернилами, как мама писала шариковой ручкой, чем теперь пишут…).

1880. jean louis mazieres/www.flickr.com

Но сама по себе проблема выбора материала для учебника — проблема серьезная: любой язык меняется во времени, меняется жизнь, меняются реалии — и любые дидактические пособия устаревают. Например, классическая английская грамматика Рэймонда Мерфи «Engilsh Grammar in Use» недавно вышла новым изданием — и лексика в нем приближена к современным реалиям: современные люди гораздо меньше дела имеют с бумажными газетами, например, и гораздо больше — с мобильными телефонами. И если учиться языку — то языку, которым ты можешь пользоваться, а не какому-то дистиллированному образцовому языку. Когда мы говорим об иностранном языке — нам кажется, что ответ очевиден: нужен современный грамотный язык. Другой вопрос — а какой он, этот современный грамотный язык? Язык BBC? Язык CNN? Язык английской королевы?

И когда мы говорим о своих родных детях, которые учатся говорить по-русски — опять же многие задаются вопросом, где языковая норма, что взять за эталон. На кого мы ориентируемся? На дикторов ЦТ 80-х годов? На МХАТ Станиславского? На язык синодального перевода Библии?

1927. Yvonne Thompson/www.flickr.com

Разумеется, это вопросы, которые решаются не родителями в соцсетях, а учеными-филологами. И языковая компетентность — это не владение «эталонным» языком, а умение адекватно выразить мысль нужными словами для нужной аудитории.

Нужно ли ребенку разбираться в устаревших словах и знать реалии вне его повседневного кругозора? Нужно, конечно. Но здесь важно, чему мы этого ребенка учим. Если это урок чтения — то навык чтения текстов, где есть незнакомые слова, очень важен, и работа с этими незнакомыми словами тоже важна, но их количество не должно затемнять общего смысла текста.

1946. theirhistory/www.flickr.com

А если мы учим ребенка математике — то, с точки зрения здравого смысла понятно, что включать в учебник математики задачи, требующие лингвистического комментария — вроде «купец продал шесть аршин мадаполама по пяти гривен за аршин и пять аршин поплина по четыре гривны за аршин» —— не самое разумное решение. Их можно включать для другого: потом, когда он уже научился умножать метры на рубли, когда учишь его видеть математический смысл выражения — и тогда неважно, продал ли купец аршин мадаполама за гривны, или колхоз центнер силоса за рубли, или бизнесмен партию айпадов за доллары. Если нам нужно, чтобы ребенок научился узнавать один и тот же математический смысл в любой словесной обертке — можем включить. Если нам хочется включить в курс математики (или даже литературы) дополнительные задания и научить ребенка представлять себе вершки, сажени и аршины, сосчитать его собственный рост, рост Пушкина и так далее — почему нет? А если это дежурная домашка на закрепление умения решать задания с количеством товара и ценой — то лучше считать что-нибудь такое, что не требует перевода на современный русский язык и дополнительной словарной работы.

Вопрос об устаревших реалиях и устаревшей лексике решается всякий раз по-своему — в зависимости от целей и задач урока. Если у нас урок природоведения про раннюю осень — то имеет смысл сосредоточиться на приметах осени, а не посвящать весь урок разъяснениям слов серп, жать, жница, сноп, веялка и проч. Если у нас урок истории, посвященный жизни русских крестьян — все это нужно, и нужно еще в музей сходить, и своими глазами посмотреть на предметы крестьянского быта. Главное — не вбрасывать ребенку сразу и осень с приметами, и крестьян с работами, и выпечку хлеба из зерна как процесс, да еще все за один урок и безо всякой словарной работы.

1963. Michael 1952/www.flickr.com

С другой стороны, когда методисты, которые последний раз живого ребенка видели в собственном детстве, начинают подделываться под интересы воображаемого современного ребенка в вакууме — они вводят в книжки для него вместо привычных зайчат или котят каких-нибудь айфончиков и планшетиков, снабженных ручками и глазками. Дети, кстати сказать, прекрасно понимают всю фальшь таких попыток и относятся к ним с нормальным человеческим презрением. Так же, как и к искусственным детям, которые сообщают в учебнике английского: «Дорогая бабушка, твой чайный сервиз — это лучший подарок, который я когда-либо получала!».

При этом школьное обучение у нас совершенно явно страдает перекосами. Особенно обучение русскому языку. Уж на что я люблю русскую природу и русскую литературу, но количество текстов про прекрасную русскую природу в учебниках русского языка для средней школы совершенно невыносимо. Все мы в детстве из урока в урок читали в учебниках русского какое-то бесконечное описание природы, хлебали несъедобную окрошку из мелко порезанных Тургенева, Бунина и Паустовского. Все читали про токование тетеревов, при этом никто этого токования в жизни своей не слышал, разве что по телевизору у Николая Дроздова. Но ведь в жизни школьника — помимо токующих тетеревов, распускающихся почек и дождя, «этого нежданного, но желанного гостя», — столько всего происходит, столько людей, событий, явлений — но школа упрямо делает вид, что этого всего нет.

2012. Brad Flickinger/www.flickr.com

В результате вместо воспитания представлений о красоте и богатстве языка, литературы, природы — воспитывается стойкий иммунитет ко всем этим излишествам. Вместо любви — цинизм (так же, как изобилие морализаторских текстов в ЕГЭ по русскому заставляет нормального человека возненавидеть все эти ламентации по поводу умирающей русской деревни, угасающей культуры и загрязняемой природы, но это уже другая тема).

Так что вопрос о соотношении устаревшего и современного в школе — это не «или — или», а «и, и». Но здесь важно — как, когда, в каком объеме и с какой целью. А противоречия никакого нет: строим представления о новом, опираясь на те познания, которые у ребенка уже есть, расширяем круг его познаний, но не опираем одно новое на другое новое.

 

Вопрос читателям:

Какие именно современные слова следовало бы «впустить» в учебник по родной речи?

Ваши варианты ответа на этот вопрос оставляйте, пожалуйста, в комментариях к статье.

Yutaka Tsutano/www.flickr.com

 

На заставке: иллюстрация В. Чижикова из книги «Аля, Кляксич и буква А». Из свободных источников.

брызги, краска, спрей, задний план, белый, капля, чернила, грязь, всплеск, изолированный

брызги, краска, спрей, задний план, белый, капля, чернила, грязь, всплеск, изолированныйPublic Domain

Free for commercial use, DMCA Связаться с нами

Ключевые слова фото

• брызги
• краска
• спрей
• задний план
• белый
• капля
• чернила
• грязь
• всплеск
• изолированный
• грязный
• жидкость
• пятно
• графика
• капать
• элемент
• черный
• творческие
• иллюстрация
• падение
• фон
• текстура
• шероховатый
• дизайн
• беспорядок
• чернильное пятно
• искусство
• художественный
• splat
• гранж
• Чернила
• силуэт
• Брызги
• Абстрактные
• покрасить
• черный цвет
• воды
• Капля
• Пятнистый
• Грязь
• В помещении
• элемент дизайна
• шаблон
• Разлив
• нет людей
• Беспорядочный
• Текстурированный эффект
• Депрессия — грусть

Выберите разрешение и скачайте это фото

PC(720P, 1080P, 2K, 4K):

• 1366×768
• 1920×1080
• 1440×900
• 1600×900
• 1280×800
• 1024×768
• 1280×1024
• 1536×864
• 1680×1050
• 1280×720
• 1360×768
• 2560×1440
• 2560×1080
• 1920×1200
• 1280×768
• 800×600
• 3840×2160
• 4096×2304
• 5120×2880
• 2880×1800
• 2560×1600

Mobile(iPhone, Android):

• 320×480
• 640×960
• 640×1136
• 750×1334
• 1242×2208
• 1125×2436
• 1242×2688
• 828×1792
• 720×1280
• 1080×1920
• 480×854
• 480×800
• 540×960
• 600×1024
• 800×1280
• 1440×2560
• 320×480

Tablet(iPad, Android):

• 1024×768
• 2048×1536
• 2224×1668
• 2388×1668
• 2732×2048
• 2736×1824
• 2048×1536
• 1024×600
• 1600×1200
• 2160×1440

Украинский производитель — бренды военторг Милитарка — Камуфляж ABU США — Pencott Desert — Камуфляж клякса — Камуфляж метель — Горчичный цвет — Камуфляж Камыш — Камуфляж лесник — Цвет Foliage Green — Камуфляж нацгвардии — Желтый — Камуфляж дубок охотничий — Цвет синий — Камуфляж Pencott Green — Бронза — Цвет пустыня — Камуфляж партизан — Камуфляж зимний лес — Цвет белый

Многообразие маскировочных расцветок в мире настолько велико, что трудно даже предположить, когда же на украинском рынке они все будут представлены. Среди них имеются весьма экзотические. Но имеются и такие, которые уже получили достаточное распространение в мире. Одним из таких является камуфляж ABU. Пока еще достаточно редкий гость в Украине.

Для кого разрабатывался камуфляж ABU

Аббревиатура ABU означает Airman Battle Uniform. А сам камуфляж АБУ разрабатывался в качестве особой тактической формы для военно-воздушных сил Соединенных Штатов. 1 ноября 2011 года она пришла на смену стандарту Battle Dress Uniform (BDU) после постепенного четырехлетнего внедрения. Как и ACU, это не только вполне определенный крой, но и характерная маскировочная схема.

Разрабатывалась она долго, а работы начались еще в начале 2000-х. Летом 2003 года американской компанией ″Tiger Stripe Products″ была представлена первая наработка, сделанная на основе шаблона, популярного еще в годы Вьетнамской войны. Только вот цветовая схемы была совершенно иной. В ней присутствовали лишь серые и голубые оттенки. После четырехлетнего тестирования, 2 октября 2007 года, новая форма стала выдаваться стажерам, поступающим на военно-воздушную базу в Лакленде (Техас). С 2008-го года обмундирование поступало для летчиков ВВС США в Кувейт, Ирак и Афганистан. К этому времени американское командование уже признавало различные вариации оттенков в АБУ. В 2009-м появляется тактическая рубашка с характерным тигровым шаблоном на рукавах. Май 2012-го ознаменовался тем, что камуфляж ABU отныне официально наименовался RABU (Rip-stop Airman Battle Uniform). С июня 2016-го его разрешили носить также представителям Гражданского воздушного патруля (Civil Air Patrol).

Камуфляж АБУ в наши дни

Нынешняя его палитра внешне похожа на универсальный шаблон камуфляжа (UCP), но в ней присутствуют сине голубые цвета. От прежней тигриной схемы осталась лишь полосатость. Однако к его отличительной особенности следует отнести отличные защитные качества в NIR диапазоне. Крой ныне также отличается от принятого стандарта ACU.

В нем, например, отсутствуют косые карманы и мандаринский воротник в виде стоечки. Внутренние карманы разрешено не подшивать, так как в жарком климате они ″утяжеляют″ ношение формы. Поставки осуществляются с 236 различными опциями размеров, позволяющих подобрать себе наиболее удобный вариант. Смешение камуфляжных шаблонов при ношении АБУ не допускается, кроме отдельных элементов снаряжения. Рюкзаки допускаются только в оригинальном маскировочном паттерне или черного цвета. В настоящее время, кроме ВВС США и Воздушного гражданского патруля, камуфляж ABU используется в военно-воздушных силах Египта и Доминиканской Республики. Выпускается он из двух типов материала. Первый − это NYCO50/50, смесь хлопка с нейлоном в равных долях. Он не требует глажки после высыхания, так как не дает складок. Поэтому личный состав в нем всегда выглядит аккуратно.

Второй вариант изготовления − чистый хлопок, который не плавится при высоких температурах. Такие изделия предназначены для механиков и авиационных электриков, работающих с системами отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха, и которые могут попасть под высокое напряжение.

Однако компания ″Tiger Stripe Products″, учитывая критику, которой подвергалась прежняя схема Airman Battle Uniform, не так давно разработала новый паттерн, ″All Terrain Tiger″ (АТТ). В нем в основном используются оттенки шаблона MultiCam, однако характерная полосатость схемы легко узнается.

Как ведет себя камуфляж АБУ в украинских ландшафтах?

Как это часто бывает, разработанный для одних условий применения шаблон, неожиданно оказался подходящим и в других широтах. Это касается и первого варианта АБУ, и АТТ. Последний особенно хорошо вписывается в ландшафты лесостепной зоны Украины.

Все реже и реже зимы радуют нас пушистым снегом. Но все же иногда повезет, и все становится вокруг белым бело. Как же спрятать свое присутствие в чистом поле или в заснеженном лесу военнослужащему, охотнику, любителю айрсофта? В таком случае на помощь приходит камуфляж клякса.

Камуфляж клякса на пути к своему рождению

Уроки советско-финской войны (1939 − 1940 годы), получившей в Финляндии название ″Зимней″, многому научили не только руководство РККА. Ведущие державы также приняли к сведению причину, почему советские войска несли столь многочисленные тяжкие потери.

Финские бойцы, воевали небольшими мобильными группами, которые очень быстро меняли свою дислокацию. Их костяком были опытные охотники, которые прекрасно стреляли, не используя даже оптических прицелов. Воевать с советскими подразделениями, которые передвигались в основном по дорогам, им было достаточно просто. Подбираясь поближе, они выцеливали и отстреливали командиров, а после короткой перестрелки исчезали в лесах. Преследовать их было просто бессмысленно.

Финны воевали в белых маскировочных комбинезонах, а в частях РККА зимнего камуфляжа катастрофически не хватало. Бойцы использовали все, что попадалось под руку, в ход шли обычные простыни. Сажа от костров оставляла на них пятна, делая маскировку, кстати, вполне подходящей.

Одна из лучших зимних маскировок на сегодняшний день − камуфляж клякса

Распространено мнение, что среди зимнего снежного покрова помогает скрыть свое присутствие ″городской″ (урбан) камуфляж. Это в корне ошибочно. Обилие оттенков серого лишь будет демаскировать владельца. К тому же существует определенный стандарт НАТО, регламентирующий, что процент темных пятен на белом фоне не должен составлять более пяти. Иначе возникает ″эффект далматинца″, выдающий присутствие человека ″с потрохами″. И стандарт этот не высосан из пальца.

В наши дни в мире предложено и эксплуатируется достаточно много зимних маскировочных паттернов. Некоторые появились сравнительно недавно и являются инновационными. Одним из них является американский коммерческий ″Kings Snow Shadow Camo″ или ″снежная тень″. Достаточно сложный рисунок, состоящий из тонких переходов белого в светло серые штрихи.

Конечно, нельзя не упомянуть о Kryptek Yeti или о A-TACS ATX. Multicam Alpine больше подходит для наших Карпат, поэтому его использование несколько ограничено. Британский PenCott Snowdrift достаточно сложен в воспроизведении, так как имеет палитру из трех цветов на белом фоне. Голландский ″Realtree AP Snow Camo″ хорош лишь на степных участках, где сквозь снег пробиваются остатки пожухлой прошлогодней растительности.

В общем случае для наших условий снежной зимы наиболее подходящим является все же камуфляж ″клякса″. Из всех перечисленных выше в плане производства он является наиболее простым. А маскирующие качества, несмотря на кажущуюся простоту, просто отличные И это уже доказано на полях боев АТО. Тем более, что украинские производители наладили его выпуск в виде раздельных камуфляжных костюмов и маскхалатов. В его основе лежит немецкий зимний маскирующий рисунок Schneetarn. Первоначально он представлял собой отдельные темные пятна на белом фоне, похожие на морских ежей. Но в конце 2015-го года был представлен новый вариант, который и получил в итоге название ″клякса″. Острые иголки исчезли, вместо них появились бесформенные небольшие пятнышки, напоминающие брызги чернил на белой бумаге.

Камуфляж клякса всегда доступен в военторге ″Милитарка″

Качественные изделия украинских производителей практичны, обладают прекрасными маскирующими качествами и предлагаются по весьма демократичным ценам. Модели импортного производства обойдутся, естественно, дороже.

Историю этого одного из очень популярных видов защитной окраски полевой формы можно проследить еще с моделей пятнистого паттерна М47, который использовался парашютистами. На его основе французские дизайнеры разработали маскировочный рисунок ″lizzard″ (″ящерица″). Фон представлял собой светло-зеленый оттенок, на который наносились узоры коричневого и темно-зеленого цветов.

Камуфляж камыш, эволюция и разновидности

Уже на основе ″ящерицы″ некоторые страны разрабатывали свои рисунки, приспосабливая их под определенные особенности ландшафта. Для структур специального назначения МВД был разработан цифровой паттерн ″Витязь″, или ″камыш″. Применяются зимние и летние варианты. Камуфляж серый камыш применяется в качестве зимнего или осеннего. Преобладают различные оттенки серого, паттерн имеет преимущественно горизонтальный рисунок.

Число поклонников активных видов отдыха растет с каждым десятилетием. Соответственно, они желают приобрести камуфлирующую форму, которая не будет выделять их на природных ландшафтах. Для тех, кто увлекается страйкболом и другими видами тактических игр, выпускаются модификации: камуфляж синий камыш, паттерн в зеленых тонах или в агрессивных расцветках в стиле ″питон″ или ″анаконда″, которые, тем не менее, отлично маскируют владельца.

Универсальный паттерн Камыш на многие случаи жизни

Разработчики данного фотопринта предлагают много разнообразных оттенков маскировки, которая позволит скрыть свое присутствие в любое время суток практически в любой местности. Работники охранных структур, которым приходится нести вахту под открытым небом, в числе наших постоянных покупателей. Охотники, рыбаки и туристы часто обращаются на наш сайт, чтобы приобрести вещи в различной маскировочной окраске. Ведь камуфляж камыш купить можно не только нанесенный на полевую форму. В этом цифровом паттерне предлагаются банданы, дождевики, ветровки, демисезонные костюмы, футболки камуфляжные. Люди, увлекающиеся фотографией и проводящие все свободное время на природе с камерой в поисках удачного и впечатляющего кадра, уважают этот камуфляж, позволяющий подобраться к интересующему объекту на минимальное расстояние ″фотовыстрела″.

Рыбаки, ловящие рыбу в прибрежной зоне в камышах, также стараются не выделяться на фон окружающей местности. Конечно, в этом случае камуфляж камыш отлично замаскирует владельца. Молодые побеги зеленого цвета, а прошлогодние − песочного, поэтому этот цифровой паттерн очень хорошо размывает силуэт удильщика. При ловле с лодки в плавнях также желательна хорошая маскировка. А при ужении нахлыстом она просто необходима, ведь подходя к поверхности, рыба, особенно крупная, становится очень осторожной.

Камуфляж камыш купить стремятся и туристы, которые не любят выделяться на фоне окружающей местности. Человек, ведущий себя тихо и хорошо ″размытый″ камуфлирующей одеждой, увидит гораздо больше интересного, чем путешественник в яркой одежде.

Foliage Green – вариант маскировочного цвета, который используется в камуфляжных схемах еще со времен Второй мировой войны. Сегодня его активно применяют в качестве одного из элементов маскировочных рисунков. Например, камуфляж A-Tacs FG, в котором такой цвет является чуть-ли не преобладающим, о чем и говорит маркировка в названии.

Но, прежде чем фольяж грин стали использовать в военной форме, он был одним из цветов для маскировки техники, в основном самолетов, в армии США и ВВС Австралии.

История применения цвета Foliage Green

С момента появления понятия маскировочной окраски, всевозможные оттенки хаки, оливы или серого цвета были доминирующими для цветовых схем формы, техники и прочего армейского снаряжения. Естественно, поиски оптимального варианта не останавливались. В Германии до начала Второй мировой войны разработали несколько вариантов камуфляжа, в других странах тоже были свои попытки. Однако, если в одежде существовали определенные, неизменные цветовые схемы, то в вопросе маскировки техники, как правило, каждый командир подразделения поступал по своему разумению. Но, в некоторых странах с одним условием – использовать рекомендуемые специальным каталогом цвета.

В RAAF Австралии (ВВС) одним из таких цветов и стал K3/177 Foliage Green, который рекомендовалось использовать в комбинации с другими цветами, создавая маскировочный рисунок для самолетов. В ВВС США, в начале 1940 года также выпустили свой каталог, в котором предписывалось применять для окраски истребителей и бомбардировщиков соответствующие оттенки. Ими стали Olive Drab, а также Medium Green 42 – американский аналог Foliage Green.

Green Foliage в камуфляжных схемах

Начиная с 70-х годов в большинстве армий мира начинается активный переход от однотонной формы, к камуфляжной. Появляются различные маскировочные рисунки: Tiger stripe, DPM, Flecktarn, Woodland. В них комбинировались оттенки зеленого, хаки, оливы и прочих. Foliage Green – цвет, который также попал в некоторые схемы, а иногда использовался и отдельно, ведь однотонная форма так и не вышла из употребления, даже сегодня, в 20-е годы XXI века.

Из современных разработок можно назвать такие адаптивные камуфляжи как: A-Tacs FG, A-Tacs iX, Kryptek Mandrake – в которых активно используется добавление цвета Green Foliage. Естественно, он остался в качестве оттенка для однотонной формы, а также активно употребляют для окраски снаряжения: бронежилетов, варбелтов, нагрудников, подсумков к ним. Применяют его и для покраски военной техники, как и в годы Второй мировой войны.

Foliage Green – цвет армейского, охотничьего, рыбацкого снаряжения

В XXI веке военная одежда однотонних расцветок получила новый виток развития благодаря появления концепции тактического снаряжения и формы. Которые в большинстве случаев производят без камуфляжных элементов, а в цветах, начиная с черного, заканчивая Foliage Green и разными оттенками оливы. Принцип в том, что подобные, одежда и снаряжение, не должны привлекать внимание окружающих, а при необходимости «работать» максимально эффективно, в том числе маскируя носителя.

Естественно, что такие цвета как: olive drab, foliage green, ranger green – будут иметь наилучшие показатели, а значит, именно им стоит отдать предпочтение, покупая снаряжение для выполнения служебных обязанностей.

Также, Foliage Green цвет, который часто используют в производстве охотничьего и рыбацкого снаряжения, а также специализированных костюмов, например ветро- влагозащитных.

Необходимые вещи такой расцветки можно приобрести сегодня в сети магазинов «Милитарка», или заказать их онлайн, с последующей доставкой по Украине.

Попытка создания нового мульти-ландшафтного камуфляжа (Multi-Environment Camouflage) была предпринята компанией Hyde Definition. А полное название новой линейки − PenCott multi-terrain camouflage pattern. Успехи в маскировке для армии США представлялись сомнительными, и созрела настоятельная необходимость перехода с Универсальной Камуфляжной Расцветки (UCP) на новый паттерн. Он позиционировался как 3 различных варианта окраски униформы и отдельно предлагалась маскирующая окраска для тактического снаряжения.

Прогресс не стоит на месте. Камуфляж PenСott − новое слово в искусстве маскировки

Дело в том, что после анализа боевого опыта в Ираке и Афганистане Конгресс США в 2009 году издал законопроект, который обязывал армейских специалистов разработать новую схему камуфляжа для ведения войны в Афганистане и проведении конструкторских и исследовательских работ в этом направлении. Признавалось, что схемы, используемые в камуфляжах военной одежды форменной ACU и ECWCS, во многих случаях уступают разработкам других стран и не работают достаточно эффективно. Летом 2010 года производителям было предложено создать 3 схемы цветовой адаптации для одежды: к пустынной местности («desert”), лесистой («woodland”) и переходной вариант («transitional”). Также предлагалось разработать паттерн для тактического навесного снаряжения − разгрузочных систем, подсумков, рюкзаков.

Особенности нового паттерна PenCott

Еще в 2008 году компания Hyde Definition создала дочернее отделение специально для разработки новых, гибридных видов камуфляжа. Результатом нескольких лет работы и явился паттерн PenCott. Он работает по принципу смешения контрастных тонов на фоне другого цвета, создавая размытые и четкие формы и грани. Этот принцип предполагает, что человеческий глаз не может обработать столь сложные схемы, переключаясь на более простые детали окружающего ландшафта. Такая гибридная фрактальная (ломаная, дробленая) геометрия растворяет человеческий силуэт на местности, делая его нераспознаваемым, как единое целое.

Кроме того, в паттерне присутствуют разные схемы ″размывания″ объекта. Расположенные на близком расстоянии контрастные тона, создают для наблюдателя иллюзию глубины. Иными словами, объект размывается не только в двухмерном пространстве, но и деформируется в глубину.

Для снаряжения предложенная схема называется PenCott-TEC™ («Tactical Equipment Camouflage – камуфляж для тактической экипировки»). Ключевые цвета этого паттерна подходят к «Pencott green zone» (″зеленка″), «Sandstorm» («песчаная буря») и «Badlands» («бесплодные земли»). Таким образом, можно носить форму одного паттерна, а снаряжение − другого без потери маскирующих качеств каждого.

Новое − не значит, что его нет в «Милитарке»

Появившийся недавно камуфляж Pencott уже можно приобрести в ″Мидитарке″. Особый интерес у покупателей вызывают зимние костюмы, головные уборы, разгрузочные системы. Ведь очень многие, делающие покупки а ″Милитарке″, а это страйкболисты, охотники и туристы, стремятся приобретать экипировку в передовых паттернах лучших брендов.

Слишком часто, к сожалению, пустынные районы земного шара становились ареной кровавых сражений, в которых гибли десятки тысяч человек. Причиной войн могли быть нефть, газ, религиозные мотивы и совсем уж притянутые за уши поводы. Так или иначе, но с развитием технологий маскировки бойцов на местности появилось и множество специфических камуфляжей, в общем случае называемых цвет пустыня.

Чем вызвано такое разнообразие камуфляжей класса ″цвет пустыня″?

Во-первых, пустыни в разных частях земного шара могут отличаться по окраске песков. Во-вторых, большое значение имеет время года и время суток. Даже небольшое изменение влажности уже может приводить к тому, что превалирующая окраска ландшафта изменится. В-третьих, не следует сбрасывать со счетов и весьма специфические зоны. Такие, каких много, например, в Афганистане. Со скальными выходами и бесплодными участками высохшей земли. А на всех на них велись (и ведутся) ожесточенные сражения.

Поэтому создатели маскировочных паттернов постоянно вели поиск все более совершенных и универсальных схем. Отличились в этом плане англичане, которые по праву считаются первооткрывателями камуфляжа. Хотя, что свойственно для консервативных жителей Великобритании, дело продвигалось со скрипом. Однако они первые ввели понятие разрушающей маскировки, назвав свой вариант маскировочной схемы Disruptive Pattern Material (DPM).

Африканская кампания 1940 − 1943 годов заставила англичан в который раз пересмотреть устоявшиеся взгляды на маскировочную окраску формы своих солдат. Однако лишь к 60-м годам прошлого века была окончательно принята схема оригинального рисунка, состоящая из трех цветов: темно коричневого, светло коричневого и редких вкраплений зеленого. Оказалось, что его можно использовать и в городских условиях. А такие страны, как Канада и Голландия применяли его вплоть до 90-х.

Но по-настоящему удачный вариант Desert DPM (DDPM) был создан лишь перед операцией ″Гранби″ в Персидском заливе (1990 − 1991). Он заслуженно получил свое прозвище ″sand and rust″, ″песок и ржавчина″. Эта схема лучше всего передавала специфику ландшафта того региона.

Американские военные тоже не сидели, сложа руки. Их усилиями был создан паттерн 6 Color Desert. Однако в процессе первого конфликта в Персидском заливе оказалось, что лучше всего себя ведет 3-цветная схема. За ней на волне внедрения нового стандарта ACU появляется цифровой ACU Pattern (ACUPAT), ACU Digital Desert. Появился свой камуфляж и у американских морских пехотинцев, Мarpat Digital Desert.

Над маскировкой в пустыне колдовали практически все страны − участницы Североатлантического альянса. Ведь им приходилось участвовать во всех операциях, проводимых на Ближнем Востоке. У канадцев появился специфический CADPAT AR. Французы разработали свой вариант, Daguet Desert pattern. В Италии применяют 4-хцветную схему Digital Vegetato Desert, которую называют еще ″Desertato″. Поляки в 2002-м году взяли на вооружение схему Pantera Pustynna. Имеют свои разработки также Норвегия, Швейцария и Дания. В Германии на основе Flectarn′а в 1991 году был разработан Tropentarn (раннее название − Wüstentarn). Схема очень проста, но эффективна: 70 % цвет хаки, 20 % светло коричневый, 10 % темно зеленый.

Цвет пустыня с точки зрения жителя Украины

Кроме всех перечисленных, существует еще множество всяких коммерческих камуфляжей, также прекрасно подходящих для наших степных районов. Их выпускают как зарубежные известные производители, так и украинские бренды. Их целевая аудитория − охотники и любители айрсофта. Но, кроме всего прочего, цвет пустыня популярен еще и у людей, которые любят модно одеваться. Ведь он в тренде уже давно. В чистом виде его часто называют тан или загар. Он сочетается со многими другими − кофейный, коричневый, желтый. А с практической точки зрения − он хорошо отражает солнечный свет в жаркую погоду и равномерно выгорает.

Всевозможные изделия ″цвет пустыни″ в нашем военторге на любой вкус

″Милитарка″ ведь предлагает не только тактическую экипировку, но и современную и модную одежду для повседневного ношения. Этим и вызван постоянный наплыв покупателей. Но самое главное, мы всячески оберегаем наших посетителей от опасности приобретения контрафактной продукции. Главное наше достижение − то доверие, которое оказывают нам люди уже много лет.

Обилие маскировочных паттернов на современном рынке так велико, что разобраться в них может далеко не каждый. Кроме тех, что начали разрабатывать еще в 20-е годы прошлого столетия, добавилось разнообразие камуфляжей многих стран мира. А ведь еще существует огромное количество так называемых коммерческих схем, одной их которых и является камуфляж партизан.

На каких прототипах построен камуфляж партизан?

Как и многие современные разработки, в его основе лежат принципы, опробованные специалистами Третьего рейха. Проследить историю этой камуфляжной схемы опытному глазу несложно. Достаточно внимательно рассмотреть камуфляж партизан, фото которого в избытке можно отыскать в мировой паутине. Сразу бросится в глаза то, что там отсутствуют параллельные штрихи, создающие ″эффект дождя″. Это означает, что схема разрабатывалась в войсках СС, а не в иных подразделениях вермахта.

В период Второй мировой войны в ваффен СС использовалось первоначально три сочетания цветов. Темно серый и светло серый использовались для весны. Зеленый и багрово коричневый применяли летом, а осенью − коричневый с желтым. Причем схем нанесения рисунков было пять: ″дубовые листья″, ″оскольчатый″, ″широколистное дерево″, ″горох″ и ″пальма″.

Вот именно с ″дубового листа″ (Oak Leaf) и срисован цвет ″партизан″. Oak Leaf продолжил эволюцию техники нанесения шаблона ″Blurred Edge″ (″размытый край″). Но в отличие от трех основных пар сочетаний цветов, в схеме присутствовало уже четыре разных оттенка, что послужило прорывом в дальнейшей технике построения маскировочных схем. Новинка выпускалась в летнем и в осеннем вариантах. Она оказалась настолько удачной, что ее не вытеснил даже позиционировавшийся с 1944 года в качестве стандарта ″Dot pattern″.

Таким образом, если быть совсем точным, в основу современной интерпретации положен паттерн ″Waffen SS Oak Type II″. В схеме четыре цвета в виде хаотично разбросанных пятен. Коричневый, светло-коричневый, зеленый и черный оттенки смешаны в равных процентных долях. На первый взгляд такое сочетание цветов выглядит отталкивающе. Однако это и является признаком хорошего камуфляжа. От него хочется поскорее отвести взгляд.

Что касается коммерческих названий, то они часто бывают звучными и запоминающимися. А даются они производителями коммерческих маскировочных схем из чисто маркетинговых соображений. Вместо ″партизана″ у некоторых российских производителей, слегка варьирующих насыщенность и весовую массу цветов, можно встретить и другие обозначения. Например, ″лягушка″. Украинские производители придерживаются лишь принятого названия.

Кем востребован камуфляж партизан?

В силу сочетания своих четырех цветов данный камуфляжный паттерн хорошо подходит для маскировки владельца летом и осенью практически во всех ландшафтах Украины. Особенно это касается охотников, рыбаков, любителей подсмотреть за поведением птиц и животных в их естественной среде обитания. По некоторым данным его используют и в отдельных подразделениях ГРУ Российской Федерации.

Приобретают камуфляж партизан и поклонники айрсофта. Одним из достоинств этой схемы является то, что при намокании никакой цвет относительно других не становится темнее, сохраняя общий оттеночный баланс.

Военторг ″Милитарка″ предлагает различные изделия в паттерне камуфляж партизан

У нас можно приобрести летние костюмы в этом паттерне, зимние модели, куртки и штаны. Предлагаются кепки, балаклавы и футболки, а также зимние рукавицы на меху. Оплатить покупку можно разными удобными способами. А получить заказ быстро и без задержек в любом желаемом отделении ″Новой Почты″.

Маскировка в зимнем лесу или поле, несмотря на свою простоту, не так уж и проста. Поэтому профессиональный белый камуфляж и пользуется таким спросом среди охотников. Понятно, что для любителей айрсофта, которым не сидится дома зимой, это также необходимая экипировка. Но самое главное, что он жизненно необходим для наших бойцов, которые охраняют рубежи Украины.

Белый камуфляж многолик и разнообразен

Действительно, несмотря на вроде бы его простую схему (снег и есть снег!), в мире существует достаточное разнообразие маскировочных паттернов, предназначенных именно для снежной зимы. Каждый претендует на первенство, но существует все-таки камуфляж, который лучше всего подходит к нашей, украинской зиме?

В принципе, годятся практически все. Смотря в каких условиях их использовать. Хотя, исходя из отличных маскирующих качеств и простоты в изготовлении, наиболее подходящим оказался камуфляж ″клякса″. Он является развитием немецкой маскировочной схемы ″Schneetarn″. Прежний рисунок представлял собой мазки темного цвета с игольчатой структурой. Но в 2015-м году был предложен нынешний, современный вариант, оказавшийся более удачным.

Небольшие пятнышки, действительно напоминающие кляксу, даже при наблюдении в сильную оптику дезориентируют и не дают возможности сосредоточиться на знакомом человеческом силуэте. Кроме того, при разрыве гранат и мин земля, выбрасываемая на снег, еще больше усиливает маскировочный эффект.

История знает несколько примеров, когда отсутствие хорошей зимней маскировки приводило к большим человеческим жертвам. Советско-финский зимний вооруженный конфликт (1939 − 1940), в который войска РККА вошли практически без зимнего камуфляжа. Им снабжался ограниченный контингент бойцов. А вот к войне с Германией, учитывая прежние уроки, советская армия оказалась гораздо лучше подготовленной. Еще большую ошибку совершило германское командование, рассчитывая на быстрое завершение войны с СССР. К холодной и снежной зиме 1941 − 1942 годов войска Вермахта подошли не только без необходимого количества зимней экипировки, но и без соответствующей маскировки. Конфискация постельного белья и холстины у мирного населения тогда приобрела массовый характер. Из этих подручных средств делали импровизированные накидки.

Белый камуфляж на современном рынке

Его разнообразие объясняется большим количеством коммерческих паттернов, предназначенных для охоты. Делать выбор нужно исходя из конкретного ландшафта, где они будут применяться. Например, финский камуфляж отлично работает в сосновых зимних лесах. Менее насыщенный по цветности Multicam Alpine также содержит оттенки зеленоватого и серого цвета.

Разумеется, о маскировке оружия также не следует забывать. Для этого предназначена специальная самоклеющаяся лента, которая выпускается и в расцветке ″белый камуфляж″. Она не оставляет никаких следов на оружии и при необходимости легко снимается. Существуют ленты, которые не имеют клейкого слоя, а представляют собой эластичный бинт. Такие изделия служат не один сезон, если их правильно эксплуатировать и периодически стирать. Техника также требует своей маскировки. Кроме традиционных маскировочных сетей в настоящее время многие производители выпускают клеящуюся пленку на виниловой основе. Хотя ее в основном сегодня используют охотники. А тяжелую технику, как и во время Второй мировой войны, продолжают покрывать пятнами гашеной извести.

Купить белый камуфляж различного рода можно в военторге ″Милитарка″

У нас можно выбрать как самые последние паттерны, недавно появившиеся на рынке, так и проверенные годами схемы. Главное, что совершать покупки, можно не боясь приобрести контрафактную продукцию. Все поставки осуществляются без перекупщиков, напрямую от производителей, что служит надежной гарантией качества.

Наряду с ″хаки″ и ″оливой″ до сих пор с успехом применяется однотонный защитный цвет ″койот″ (″coyote″). Этот камуфляжный оттенок получил название в честь лугового волка, который обитает в Северной Америке в ареале от Аляски до Панамы. Умение этого животного скрываться буквально на ровном месте, слившись с окружающим ландшафтом, и послужило поводом для такого названия.

Универсальный защитный цвет coyote

Пожалуй, самый древний камуфлирующий цвет. Давным-давно его использовали американские индейцы, поступая очень просто. Отправляясь на охоту, они шили себе из койотовых шкур подобие маскировочного халата, что позволяло подобраться к вожделенной добыче на очень близкое расстояние. Интересно, что оттенок ″coyote brown″ (″койот коричневый″), судя по многочисленным отзывам профессионалов и оценкам экспертов, прекрасно заменяет собой ″оливу″ и ″пустыню″ на их ″родных″ ландшафтах. Койот используется и в сочетании с другими оттенками, обычно в качестве фона. Например, Литовская служба общественной безопасности в 2010 году приняла на вооружение пиксельный паттерн, для которого фоном выбран ″coyote brown″, а на нем довольно крупные пятна светло-коричневого, темно оливково-зеленого и черного цвета. В Афганистане 2008-й и 2009-й годы американский контингент провел в форме, где в цветовой схеме присутствовал ″Coyote Tan″. Его не следует путать с ″coyote brown″, так как он намного светлее, и его часто переводят как ″загар″.

″Койот″ хорошо маскирует владельца, особенно в неподвижном состоянии, в подлеске, весной или осенью. Возле водоемов − в зарослях прошлогоднего камыша и пожухлой траве.

Что предлагает современная индустрия камуфляжа в окраске ″coyote″?

Практически весь ассортимент изделий в этом камуфляже, предлагаемый брендами США, Германии, Италии, Великобритании, Польши, Украины можно найти в интернет магазине ″Милитарка″. Уже много лет очень популярны берцы и прочая тактическая обувь этого цвета. Мы предлагаем модели премиум класса таких монстров современного снаряжения и экипировки, как ″5.11″, ″LOWA″, ″Mil-Tec″, ″MAGNUM″. Большим спросом пользуются городские, штурмовые и тактические рюкзаки, которые приобретают любители горного и трекингового туризма.

Поклонники страйкбола, туристы, рыбаки, охотники часто выбирают экипировку цвета ″coyote″ за хорошие камуфлирующие качества. Популярны каверы на каски, разгрузочные жилеты и системы, кобуры, подсумки. В этом цвете предлагаются тактические ремни и головные уборы.

Советы по предотвращению высокого фона во время вестерн-блоттинга

Высокий фон — одна из наиболее распространенных проблем контроля качества, возникающих в процессе вестерн-блоттинга. Когда возникает высокий фон, может быть очень трудно отличить релевантные данные от нерелевантных данных. Однородный высокий фон может быть вызван многочисленными проблемами, и для их устранения может потребоваться некоторая работа, но без разрешения ситуации пятно может быть нечитаемым.

Проверка того, что буферы не загрязнены

Загрязненный буфер может легко привести к высокому фону во время вестерн-блоттинга.Чаще всего загрязнение буфера происходит из-за присутствия бактерий, но могут быть и другие загрязнители. Когда загрязняющие вещества попадают в сам буфер, они влияют на весь блот, включая фон. Единственный способ устранить этот тип помех — полностью заменить старые буферы.

Проверка правильности выполнения процедуры

Еще одна проблема, которая может привести к высокому фону, — несоблюдение надлежащей процедуры.Плохое обращение с мембраной, переэкспонирование мембраны и недостаточная промывка могут привести к высокому фону. Эти проблемы необходимо решить путем надлежащей обработки. Плохое обращение с мембраной обычно происходит, когда мембрана высыхает. Мембрана может высохнуть, если ее не увлажнить должным образом с помощью подходящего химического вещества; обычно метанол.

Переэкспонирование мембраны также может быть проблемой, но ее очень легко решить. Все, что нужно сделать, это выставить мембрану на меньшее количество времени.Точно так же недостаточная стирка просто требует, чтобы стирка была завершена более тщательно. Промывание требуется для удаления избытка антител. Когда в блоте присутствует слишком много антител, его трудно отличить от фона. Улучшение промывки также может быть реализовано за счет использования более качественных моющих растворов.

Удаление недостаточной блокировки

Без правильной блокировки вестерн-блоты не могут быть легко прочитаны. Недостаточная блокировка обычно возникает из-за проблем во время инкубации.Если время инкубации недостаточно велико, нужные области не будут заблокированы. Если температура инкубации неправильная, блокировка также не будет завершена. Существуют также химические вещества, которые можно добавлять в процесс для дальнейшего улучшения блокировки.

Обеспечение совместимости блокирующих агентов

Блокирующие агенты, как и другие продукты, используемые в процессе блоттинга, должны быть адаптированы к конкретным приложениям. Использование неправильного блокирующего агента может легко вызвать помехи и плохо различимое пятно.Некоторые блокирующие агенты основаны на белках сыворотки, а другие на белковой основе. Различные антитела потенциально могут взаимодействовать с блокирующими агентами, что делает необходимым поиск наиболее подходящих агентов. Безбелковые блокаторы являются одним из лучших и самых простых решений.

Снижение концентрации

антител

Обычно высокая концентрация антител также может вызывать высокий фон. Поскольку концентрация антител настолько высока, вся мембрана будет покрыта ими.Это очень затруднит определение чего-либо окончательного. Когда дело доходит до высокой концентрации антител, действительно есть только несколько решений. Антитела можно правильно отмыть или использовать более низкую насыщенность антител на протяжении всего процесса. Мембрана также может нуждаться в надлежащей обработке, чтобы она не была слишком сухой и не поглощала слишком много раствора антител.

Высокий уровень фона может также возникать, когда химикаты и расходные материалы либо не подходят для выполнения задачи, либо имеют низкое качество.Кроме того, высокий фон — это лишь одна из множества проблем, которые могут возникать при вестерн-блоттинге.

Другими факторами, которые следует учитывать и обсуждались ранее, являются выбор мембраны: PVDF или нитроцеллюлоза – какая мембрана лучше? . Часто упускаемый из виду вопрос с мембранами — это их срок годности. Перед использованием мембраны убедитесь, что она не просрочена и правильно хранилась.

 

Вестерн-блоттинг Устранение неполадок: высокий фон

Высокий фон (равномерное распределение)

Слишком высокая концентрация антител

• Используйте более высокие разведения антител.

Недостаточная блокировка

• Увеличьте концентрацию блокирующего реагента (например, с 5 до 7%).

• Увеличьте время блокировки и/или температуру.

• Добавьте Tween 20 в блокирующий буфер.

• Включите блокирующий реагент и Tween 20 в первичный буфер для разведения антител.

Недостаточное мытье

• Увеличьте время и объем стирки.

Сухая мембрана

• Убедитесь, что мембрана не высыхает во время процесса иммуноблоттинга.

Неспецифическое связывание вторичного антитела

• Проведите вторичный контрольный эксперимент только с антителами (пропустите этап первичной инкубации).

• Используйте предварительно адсорбированные вторичные антитела с пониженной перекрестной реактивностью к нежелательным видам.

• Для обнаружения фосфорилированного белка не используйте буферы на основе молока, такие как обезжиренное молоко или казеиновый буфер. (Молоко и казеин богаты фосфопротеинами.)

Слишком долгое экспонирование пленки / Реагент для обнаружения слишком чувствителен

• Проверьте различные типы и разведение реагента для обнаружения.

 

Высокий фон (неспецифические полосы)

Советы по устранению неполадок для высокого фона (равномерное распределение) также можно применять к сценариям, когда на мембране Вестерн-блота появляются неспецифические, но отчетливые полосы.

Следует также учитывать следующее:

Содержание целевого белка ниже порога неспецифического связывания

• Загрузите больше белка на лунку в SDS-PAGE.

• Обогащение белков с низким содержанием с помощью иммунопреципитации, фракционирования и т. д.

Деградация образца

• Каждый раз готовить свежие лизаты

• Используйте свежеприготовленный образец, хранящийся на льду до добавления буфера для образца и немедленного нагревания до 95°C в течение 5–10 минут.

• Экстракты тканей, как правило, дают больше неспецифических полос и продуктов деградации. Используйте свежие, обработанные ультразвуком и осветленные экстракты тканей.

• Всегда включайте ингибиторы протеазы (и ингибиторы фосфатазы для обнаружения фосфорилированных мишеней).

• Убедитесь, что образец не испортился.

Влияние других изоформ

Неэффективное разделение SDS-PAGE

• Измените процентное содержание геля в соответствии с молекулярной массой целевого белка.

• Для более крупных белков следует использовать гели с трис-глицином с более низким процентным содержанием или использовать гели и буферы на основе трис-ацетата. (См. стр. 12 для наших рецептов геля SDS-PAGE). •

• Для белков меньшего размера (<20 кДа) следует использовать гели Tris-Glycine с более высоким процентным содержанием (до 15 %) или использовать гели Tris-Tricine.

Наличие посттрансляционных модификаций

• Знайте интересующий вас белок, размеры полос могут изменяться из-за гликозилирования, фосфорилирования, созревания предшественника и т. д.

Отсутствие средств управления

Хотя отсутствие контрольных образцов в Вестерн-блоттинге не является причиной неспецифических полос, их включение может сказать вам, почему вы можете видеть их на своей мембране. Вы можете включить следующие элементы управления: 

Положительный контроль:

Отрицательные контроли:

Вестерн-блоттинг Поиск и устранение неисправностей | Thermo Fisher Scientific

Возможная причина	Решения
Неполный или неэффективный перенос	После переноса окрасьте гель красителем общего белка, чтобы определить эффективность переноса.
	После переноса оцените эффективность переноса путем окрашивания мембраны с помощью набора реверсивных белковых красителей Thermo Scientific Pierce (PVDF) или (нитроцеллюлозные мембраны).
	Обеспечьте достаточный контакт между гелем и мембраной во время переноса, используя гелевый валик поперек стопки переноса.
	Убедитесь, что стопка помещена в устройство для переноса в правильной ориентации, чтобы белки могли мигрировать на мембрану.
	Смочите и активируйте мембрану в соответствии с инструкциями производителя.
	Используйте положительный контроль, например предварительно окрашенные маркеры молекулярной массы, для оценки эффективности переноса.
	В качестве положительного контроля используйте маркеры молекулярной массы, совместимые с субстратом для визуализации Western, например Invitrogen iBright Prestained Protein Ladder или Invitrogen MagicMark XP Western Protein Standard.
	Увеличьте время переключения и/или напряжение.
	Убедитесь, что условия подготовки образца не нарушили антигенность образца. (Некоторые белки нельзя запускать в восстанавливающих условиях.)
Недостаточное связывание с мембраной	Для антигенов с низкой молекулярной массой (ММ) добавьте 20% метанола в буфер для переноса, чтобы облегчить связывание и предотвратить прохождение белков через мембрану.
	Сокращение времени передачи. Антигены с низкой молекулярной массой могут проходить через мембрану.
	Для антигенов с высокой молекулярной массой добавьте 0.01–0,05% SDS для переноса буфера для вытягивания белков из геля на мембрану.
	Изменить тип мембраны (NC вместо PVDF).
	Заменить на мембрану с меньшим размером пор.
Слишком низкая концентрация антител	Увеличить концентрацию антител. Антитело может иметь плохое сродство к белку-мишени.
	Возможно, антитело потеряло активность. Выполните точечный блот, чтобы определить активность.
Недостаточное количество антигена	Добавьте больше белка в гель.
Антиген, замаскированный блокирующим буфером	Уменьшение концентрации белка в блокирующем буфере.
	Попробуйте другой блокирующий буфер. Воспользуйтесь нашим руководством по выбору блокирующего буфера, чтобы найти наиболее совместимый блокирующий буфер для вашего эксперимента.
Буфер содержит азид натрия	Азид натрия ингибирует HRP. Не используйте его с HRP-конъюгированными антителами.
Слишком слабый сигнал от хемилюминесцентного субстрата	Увеличьте время инкубации мембраны с субстратом.
	Увеличение времени экспонирования пленки.
	Убедитесь, что срок годности субстрата не истек.
	Если у вас минимальное количество белка, используйте субстрат максимальной чувствительности Thermo Scientific SuperSignal West Femto, чтобы максимизировать ваши сигналы вестерн-блоттинга.
Мембрана снята и подвергнута повторному зондированию	Избегайте повторного снятия одной и той же мембраны.
	Сокращение времени инкубации в буфере для отпарки для предотвращения потери антигена.
Расщепление антигена на мембране	Блокирующее вещество может обладать протеолитической активностью (например, желатин).
Распад белка при длительном хранении блотов	Подготовьте новый блот.

Руководство по поиску и устранению неисправностей: Вестерн-блоттинг: R&D Systems

Руководство по поиску и устранению неисправностей: Вестерн-блоттинг: R&D Systems

Для получения дополнительной помощи, пожалуйста, свяжитесь с нашим отделом технической поддержки.

 

Наблюдение: полос не наблюдается

Возможный источник	Предложение
Недостаточное количество антител	Антитело может иметь низкую аффинность к интересующему белку. Увеличьте концентрацию антител (в 2-4 раза выше рекомендованной исходной концентрации).
	Возможно, антитело потеряло активность.Выполните точечный блот.
Недостаток белка	Увеличьте количество общего белка, загруженного в гель.
	Подтвердите наличие белка другим методом.
	Используйте положительный контроль (рекомбинантный белок, клеточную линию или обработанные клетки для экспрессии интересующего аналита).
	Проведите дот-блоттинг.
Плохая передача	Влажная мембрана PVDF/Immobilon-P в метаноле или нитроцеллюлозная мембрана в буфере для переноса.
	Убедитесь, что между мембраной PVDF и гелем имеется хороший контакт.
Неполная передача	Оптимизация времени передачи. Белок с высокой молекулярной массой может потребовать больше времени для переноса.
	Чтобы гарантировать завершение переноса, окрасьте мембрану Ponceau S, Amido Black или India Ink.
	Используйте предварительно окрашенный маркер MW.
Передача	Уменьшите напряжение или время переноса низкомолекулярных белков (< 10 кДа).
Изоэлектрическая точка >9	Используйте альтернативную буферную систему с более высоким pH, такую ​​как CAPS (pH 10,5).
Использованы неправильные вторичные антитела	Подтвердите вид хозяина и тип Ig первичного антитела.
Старое антитело	Если срок годности антител истек или гарантия производителя истекла, приобретите свежие антитела.
Неправильное хранение антител	Соблюдайте рекомендации производителя по хранению и избегайте циклов замораживания/оттаивания.
Загрязнение азидом натрия	Убедитесь, что буферы не содержат азид натрия, поскольку он может подавлять сигнал HRP.
Недостаточное время инкубации с первичным антителом	Увеличьте время инкубации до ночи при 4°C.

 

Наблюдение: слабые полосы (слабый сигнал)

Возможный источник	Предложение
Низкое связывание белка с антителом	Сократите количество стирок до минимума.
	Уменьшите концентрацию NaCl в буфере для блоттинга, используемом для этапов промывки (рекомендуемый диапазон 0.15М — 0,5М).
	Уменьшите концентрацию NaCl в растворе антител (рекомендуемый диапазон 0,15–0,5 М).
Недостаточное количество антител	Антитело может иметь низкую аффинность к интересующему белку. Увеличьте концентрацию антител (в 2-4 раза выше рекомендованной исходной концентрации).
Недостаток белка	Увеличьте количество общего белка, загруженного в гель.
Неактивный конъюгат	Смешайте фермент и субстрат в пробирке. Если цвет не развивается или слабый. Сделайте свежие или купите новые реагенты. Переключитесь на ЭКЛ.
Слабый/старый ECL	Купите новые реагенты ECL.
Обезжиренное сухое молоко может маскировать некоторые антигены	Уменьшите процентное содержание молока в растворах блоков и антител или замените их 3% BSA.

 

Наблюдение: дополнительные полосы

Возможный источник	Предложение
Неспецифическое связывание первичного антитела	Уменьшить концентрацию первичных антител.(См. рис. 1)
	Уменьшите количество общего белка, загруженного в гель.
	Используйте моноспецифические или очищенные по антигенной аффинности антитела (например, антитела, обозначенные R&D Systems как «MAB» или «AF»).
Неспецифическое связывание вторичного антитела	Проведите контроль только с вторичным антителом (исключая первичное антитело). Если появляются полосы, выберите альтернативное вторичное антитело.
	Используйте моноспецифические или очищенные по антигенной аффинности антитела (например, вторичные антитела, обозначенные R&D Systems «BAF» или «HAF»).
Неспецифическое связывание первичных или вторичных антител	Добавьте 0,1–0,5 % Tween® 20 в первичный или вторичный раствор антител.
	В качестве отправной точки для разбавления первичных и вторичных антител используйте 2% обезжиренное сухое молоко в промокательном буфере.При необходимости отрегулируйте концентрацию антител вверх или вниз. (См. рис. 2а и 2б)
	Увеличьте количество стирок.
	Увеличьте концентрацию NaCl в буфере для блоттинга, используемом для стадий разбавления и промывки антител (рекомендуемый диапазон 0,15–0,5 М). (См. рис. 2с)
	Увеличьте концентрацию Tween® 20 в буфере для блоттинга, используемом для этапов промывки (0,1–0,1%5%).
Агрегация аналита	Увеличьте количество ДТТ, чтобы обеспечить полное восстановление дисульфидных связей (20–100 мМ ДТТ). Нагревать на кипящей водяной бане 5-10 минут перед нанесением на гель.
	Выполните кратковременное центрифугирование.
Разложение аналита	Сведите к минимуму циклы замораживания/оттаивания образца.
	Добавьте ингибиторы протеазы в образец перед хранением.
	Сделать свежие образцы.
Загрязнение реагентов	Проверьте буферы на предмет загрязнения твердыми частицами или бактериями. Приготовьте свежие реагенты.

 

Наблюдение: высокий фон

Возможный источник	Предложение
Неспецифическое связывание первичного антитела	Используйте моноспецифические или антиген-аффинно-очищенные антитела (например, антитела, обозначенные R&D Systems как «MAB» или «AF»).
	Блок на 5% молоке. Отрегулируйте концентрацию молока (2–5%) или NaCl (0,15–0,5 М) основного раствора антител. (См. рис. 3).
	Уменьшить концентрацию антител.
Неспецифическое связывание вторичного антитела	Проведите контроль только с вторичным антителом (исключая первичное антитело). Если появляются полосы, выберите альтернативное вторичное антитело.
Недостаточная блокировка	Начните с 5% сухого молока с 0,1–0,5% Tween 20, 0,15–0,5 М NaCl в 25 мМ Трис (pH 7,4). Время инкубации может быть увеличено. Увеличьте или уменьшите концентрацию молока по мере необходимости.
	Блокирование в течение ночи при 4°C может снизить эффективность блокирования, поскольку моющие средства могут быть неэффективны при более низких температурах.
Сухое обезжиренное молоко может содержать антиген-мишень	Заменитель с 3% BSA.
Сухое обезжиренное молоко содержит эндогенный биотин и несовместимо с авидином/стрептавидином	Заменитель с 3% BSA.
Некоторые антитела IgY могут распознавать молочный белок	Заменитель с 3% BSA.
Недостаточная стирка	Увеличьте количество стирок.
	Увеличьте концентрацию Tween 20 в промывочном буфере (0.1%-0,5%).
Неспецифическое связывание первичного антитела	Увеличьте концентрацию NaCl в первичном растворе антител и буфере для блоттинга, используемых для разбавления первичных антител и этапов промывки (рекомендуемый диапазон 0,15–0,5 М). (См. рис. 4).
Передержанная пленка	Уменьшить время экспозиции.
	Если сигнал от цели слишком сильный, подождите 5-10 минут и повторно экспонируйте пленку.

 

Наблюдение: диффузные полосы

Возможный источник	Предложение
Избыток белка на геле	Уменьшить количество загруженного белком

 

Наблюдение: белые полосы (метод ECL)

Возможный источник	Предложение
Генерируется избыточный сигнал	Уменьшить концентрацию антител или белка. Чрезмерное количество антител или белка может вызвать очень высокий уровень локализованного сигнала (обычно в одной полосе). Это приводит к быстрому и полному потреблению субстрата в этот момент. Поскольку после завершения этой реакции свет не образуется, при воздействии на пленку появляются белые полосы.

 

Наблюдение: пятнистые неровные пятна по всему пятну

Возможный источник	Предложение
Загрязнение реагентов	Проверьте буферы на предмет загрязнения твердыми частицами или бактериями.Приготовьте свежие реагенты.
Недостаточно раствора во время инкубации или промывки	Убедитесь, что мембрана полностью погружена во время промывок и инкубации антител.
Пузырьки воздуха в мембране	Аккуратно удалите пузырьки воздуха. Особенно во время переноса.
Неравномерное перемешивание во время инкубации	Обеспечьте равномерное перемешивание, поместив на качалку/шейкер.
Загрязненное оборудование	Убедитесь, что блок электрофореза правильно вымыт.Белки или кусочки геля, оставшиеся на приборе, могут прилипнуть к мембране. Тщательно промойте мембрану.
Агрегат HRP	Фильтр конъюгата для удаления агрегатов HRP.
Длинная выдержка	Уменьшить время экспозиции.

Tween 20 является зарегистрированным товарным знаком ICI Americas.

© Copyright 2022 R&D Systems, Inc.Все права защищены.

Вестерн-блоттинг Руководство по устранению неполадок | Технология сотовой сигнализации

Низкая экспрессия белка в ткани или клеточной линии	Мы рекомендуем использовать инструменты профилирования экспрессии, такие как BioGPS или The Human Protein Atlas, а также научную литературу, чтобы проверить, должны ли ваши клетки или ткани животных в достаточной степени экспрессировать интересующий белок-мишень. Мы всегда рекомендуем включать известный положительный контроль для подтверждения экспериментальных результатов. Список рекомендуемых контролей для многих наших антител можно найти в таблице «Контрольное лечение по мишеням». Белковая нагрузка не менее 20–30 мкг на дорожку рекомендуется для экстрактов цельных клеток и для обнаружения тотальных/немодифицированных мишеней в экстрактах цельных тканей. Однако часто бывает необходимо увеличить общую белковую нагрузку по меньшей мере до 100 мкг на дорожку для обнаружения модифицированных мишеней (например,г., фосфорилированные и расщепленные) в экстрактах целых тканей. Более высокая белковая нагрузка для экстрактов цельных тканей может быть необходима, когда только небольшая часть клеток в ткани включает посттрансляционно модифицированную мишень. Включение ингибиторов протеазы и фосфатазы в клеточный экстракт необходимо для предотвращения деградации белка и поддержания выхода белка. Мы рекомендуем, чтобы буфер для лизиса включал лейпептин (конечная концентрация 1,0 мкг/мл) и PMSF (#8553) в качестве ингибиторов протеазы. Также можно использовать коктейль ингибиторов протеазы (100X) (#5871) или коктейль ингибиторов протеазы/фосфатазы (100X) (#5872).
Низкий уровень фосфорилированного или модифицированного белка	Многие посттрансляционно модифицированные белки экспрессируются на низких базальных уровнях в клеточных линиях или тканях без обработки. Мы рекомендуем использовать PhosphoSitePlus для поиска документов с низкой пропускной способностью, ссылающихся на ваш конкретный сайт модификации, или использовать нашу таблицу Control Treatments by Target, чтобы найти пример лечения и клеточной линии или ткани, которые хорошо работают в качестве положительного контроля. Включение ингибиторов протеазы и фосфатазы в клеточный экстракт необходимо для предотвращения деградации белка и поддержания выхода белка. Пирофосфат натрия (конечная концентрация 2,5 мМ) и бета-глицерофосфат (конечная концентрация 1,0 мМ) должны быть включены в буфер для лизиса в качестве ингибиторов серин/треонинфосфатазы. Ортованадат натрия (конечная концентрация 2,5 мМ) должен быть включен для ингибирования тирозинфосфатазы. Также можно использовать коктейль ингибиторов протеазы (100X) (#5871) или коктейль ингибиторов протеазы/фосфатазы (100X) (#5872).
Секретируемые белки	Некоторые белки-мишени секретируются клеткой и не могут быть надежно обнаружены в экстракте целых клеток. Среду для клеток можно осаждать ацетоном или концентрировать для обнаружения секретируемой мишени. В некоторых случаях можно использовать химические модуляторы, такие как брефельдин А (#9972), для ингибирования секреции интересующего белка из клетки.
Чувствительность к антителам и реактивность	Обязательно ознакомьтесь с разделом Чувствительность/специфичность на веб-странице антитела.Трансфицированное или рекомбинантное антитело недостаточно чувствительно для обнаружения своей мишени на эндогенном уровне. Антитела эндогенной чувствительности будут работать со всеми типами образцов (эндогенными, трансфицированными или рекомбинантными белками). Количество используемого антитела также может потребоваться увеличить или уменьшить для достижения оптимального сигнала в зависимости от количества целевого белка в ваших образцах. Мы рекомендуем использовать разбавление, показанное на веб-странице продукта и в техническом описании, в качестве отправной точки для оптимизации. Другим фактором, который следует учитывать, является видовая реактивность антитела. Виды, перечисленные в разделе «Реакционная способность» на веб-странице продукта, прошли внутреннюю проверку CST. Если интересующий вас вид отсутствует в списке, обратитесь в нашу группу технической поддержки, и они будут рады помочь определить прогнозируемую реактивность антитела с белковой последовательностью вашего модельного вида.
Неполный лизис	CST рекомендует обработку ультразвуком для обеспечения полного лизиса и максимального/стабильного выделения белка независимо от используемого лизирующего буфера. Обработка ультразвуком необходима для обеспечения эффективной экстракции белка мембраносвязанных и локализованных в органеллах (например, ядерных и митохондриальных) целей, а также служит для сдвига ядерной ДНК, которая может мешать загрузке гелей SDS-PAGE. Ультразвуковые зонды рекомендуются для наилучшей пробоподготовки. Для образцов объемом 1 мл лучше всего подходят 3 импульса по 10 секунд с помощью ультразвукового зонда с микронаконечником мощностью 15 Вт (или 50% мощности) на льду. Тем не менее, хорошими альтернативами являются повторное прохождение через иглу тонкого калибра (например, 24 калибра) или перемешивание со стеклянными шариками.После обработки ультразвуком образец можно центрифугировать, чтобы осадить нерастворимый клеточный дебрис, а супернатант использовать для вестерн-блоттинга.
Неоптимальный выбор буфера	Для получения оптимальных результатов с отдельными антителами ознакомьтесь с протоколом вестерн-иммуноблоттинга на веб-странице продукта, чтобы узнать о рекомендуемом буфере для разведения первичных антител (например, BSA или молоко). Неспособность инкубировать наши антитела в рекомендуемых буферах для разведения может серьезно снизить чувствительность/специфичность результатов.Например, обезжиренное сухое молоко слишком жестко для инкубации первичных антител со многими из наших антител. В целом CST рекомендует проводить инкубацию блокирующих и вторичных антител с использованием 1X TBS/0,1% Tween-20/5% обезжиренного сухого молока, чтобы свести к минимуму неспецифический фон. Использование альтернативных блокирующих агентов, таких как желатин, сыворотка, безбелковые блокирующие агенты, казеин или смешанные блокирующие агенты, может снизить интенсивность целевого сигнала. Многие клиенты обеспокоены использованием обезжиренного сухого молока в качестве буфера для разбавления для обнаружения фосфопротеинов.В частности, считается, что казеин в молоке приводит к высокому фону. В CST мы не наблюдали каких-либо проблем при использовании обезжиренного сухого молока для обнаружения фосфопротеинов. Все антитела CST тестируются как в 5% обезжиренном сухом молоке, так и в 5% BSA перед выпуском, и для рекомендации выбирается оптимальный буфер для разведения. Буферы для блокировки, инкубации антител (первичные и вторичные) и промывочные буферы должны включать 1X TBS/0,1% Tween-20. Более высокий или более низкий процент Tween-20 может поставить под угрозу чувствительность/специфичность результатов.Использование PBS вместо TBS может ослабить интенсивность сигнала с некоторыми из наших антител.
Неоптимальные условия передачи	Обычно мы рекомендуем влажные переносы при 4°C в течение 2 часов при 70 В (200–250 мА) в 25 мМ трис, 192 мМ глицина и 20 % метанола. Однако для высокомолекулярных белков мы рекомендуем уменьшить содержание метанола в буфере для переноса до 5-10% и увеличить время переноса до 3-4 часов (200-250 мА) при 70 В.Для полусухого переноса следуйте рекомендациям производителя системы. Для белков с низкой молекулярной массой важно избегать чрезмерного переноса или «прорыва» более мелких мишеней. Мы рекомендуем более короткое время переноса и использование нитроцеллюлозной мембраны для переноса с размером пор 0,2 мкм, чтобы свести к минимуму потерю низкомолекулярных белков (т. е. менее 25-30 кДа).
Несколько полос или неспецифическое связывание	Реактивность изоформ	Некоторые модели клеточных линий и тканей могут содержать более одной изоформы белка или варианта сплайсинга, которые могут мигрировать при различной молекулярной массе.Обратитесь к разделу «Специфичность/чувствительность» на веб-странице антитела, чтобы определить, прогнозируется или подтверждается ли обнаружение более одной изоформы. Вы также можете сослаться на интересующий вас белок на UniProt, чтобы увидеть, перечислены ли последовательности нескольких изоформ.
	Посттрансляционные модификации	Посттрансляционные модификации (PTM) могут привести к тому, что часть целевого белка будет работать с другой скоростью, чем немодифицированный белок. Следовательно, условия обработки, которые индуцируют или ингибируют определенные посттрансляционные модификации, могут привести к наблюдению множественных полос на вестерн-блоттинге. Гликозилирование, СУМОилирование, убиквитинирование и фосфорилирование являются примерами модификаций, которые могут вызывать появление нескольких полос на вестерн-блоттинге, в зависимости от используемых образцов и обработок. Если вам нужна дополнительная информация о PTM, связанных с вашим целевым белком, см. PhosphoSitePlus.
	Образцы тканей	Поскольку образцы тканей неоднородны (т.т. е., состоящих из разных типов клеток), увеличивается вероятность появления неспецифических полос с антителом, которые могут быть не обнаружены в других типах образцов, таких как клеточные линии. Кроме того, некоторые модели тканей могут содержать более одной изоформы белка или варианта сплайсинга, которые могут мигрировать при различной молекулярной массе.
	Деградация лизата	Протеазы и фосфатазы в вашем образце могут быстро расщепить ваш белок.Добавление ингибиторов протеазы и фосфатазы в лизат может помочь замедлить или предотвратить деградацию белка. Мы рекомендуем лизисный буфер, включающий лейпептин (конечная концентрация 1,0 мкг/мл) и PMSF (#8553) в качестве ингибиторов протеазы. Также можно использовать коктейль ингибиторов протеазы (100X) (#5871) или коктейль ингибиторов протеазы/фосфатазы (100X) (#5872). Старение лизата также может привести к увеличению количества продуктов деградации белка, которые затем улавливаются антителом. Убедитесь, что вы используете свежий образец, чтобы свести к минимуму деградацию белка.Некоторые белки менее стабильны, чем другие, в одном и том же флаконе с образцом, поэтому, хотя образец может работать для одного белка-мишени, другой белок уже может разлагаться в том же образце.
	Высокая концентрация белка	При работе с высокочувствительным антителом избыток белка на мембране может вызвать появление нескольких полос и высокий фон, а также интенсивный сигнал по всей дорожке, которого в противном случае может не быть при меньшем количестве белка. Попробуйте загрузить меньше белка, чтобы получить более чистый сигнал.
	Длительное время экспозиции	Если количество загруженного белка слишком мало, это затруднит обнаружение интересующего белка, особенно если его меньше в вашем типе образца. Это, в свою очередь, приведет к необходимости увеличить время воздействия для обнаружения целевого белка на вашем пятне. Антитела CST разработаны для получения сигнала в течение двухминутного времени воздействия с обычными реагентами ECL.Если в течение этого времени сигнал не появляется, может потребоваться более высокая концентрация белка.
	Субоптимальный буфер для разведения первичных антител	Буфер, используемый для разведения первичного антитела, может повлиять на фон вашей мембраны. Например, буфер, такой как обезжиренное сухое молоко, лучше справляется с уменьшением появления неспецифических полос и общего фона на пятне по сравнению с BSA. Однако молоко может быть слишком жестким для некоторых антител и приводить к снижению сигнала-мишени.Важно ознакомиться с рекомендуемым протоколом вестерн-иммуноблотинга на веб-странице продукта CST, чтобы выбрать подходящий буфер для разведения первичных антител (например, BSA или обезжиренное сухое молоко). В целом CST рекомендует проводить инкубацию блокирующих и вторичных антител с использованием 1X TBS/0,1% Tween-20/5% обезжиренного сухого молока, чтобы свести к минимуму неспецифический фон.
Намазывание	Гликозилированные белки	Дифференциальное гликозилирование часто приводит к смазыванию полос при молекулярных массах выше расчетных.Потенциальные сайты для гликозилирования в вашем целевом белке можно найти на сайте PhosphoSitePlus. Обработку ваших образцов с помощью PNGase F, фермента, отщепляющего N-гликаны от гликопротеинов, также можно использовать для подтверждения изменения молекулярной массы из-за гликозилирования.
	Деградация лизата	Протеазы и фосфатазы в вашем образце могут быстро расщепить ваш белок. Добавление ингибиторов протеазы и фосфатазы в лизат может помочь замедлить или предотвратить деградацию белка.Мы рекомендуем буфер для лизиса включать лейпептин (конечная концентрация 1,0 мкг/мл) PMSF (#8553) в качестве ингибиторов протеазы. Также можно использовать коктейль ингибиторов протеазы (100X) (#5871) или коктейль ингибиторов протеазы/фосфатазы (100X) (#5872). Возраст лизата также может привести к увеличению количества продуктов деградации белка, которые затем улавливаются антителом и могут проявляться в виде мазка с молекулярной массой ниже ожидаемой целевой. Убедитесь, что вы используете свежий образец, чтобы свести к минимуму деградацию белка.Если необходимо длительное хранение, мы рекомендуем хранить лизаты при температуре -80°C, чтобы уменьшить деградацию. Некоторые белки менее стабильны, чем другие, в одном и том же флаконе с образцом, поэтому, хотя образец может работать для одного белка-мишени, другой белок уже может разлагаться в том же образце.
	Неполный лизис	CST рекомендует обработку ультразвуком для обеспечения полного лизиса и максимального/стабильного выделения белка независимо от используемого лизирующего буфера.Обработка ультразвуком необходима для обеспечения эффективной экстракции белка мембраносвязанных и локализованных в органеллах (например, ядерных и митохондриальных) целей, а также служит для сдвига ядерной ДНК, которая может мешать загрузке гелей SDS-PAGE. Ультразвуковые зонды рекомендуются для наилучшей пробоподготовки. Для образцов объемом 1 мл лучше всего подходят 3 импульса по 10 секунд с помощью ультразвукового зонда с микронаконечником мощностью 15 Вт (или 50% мощности) на льду. Тем не менее, хорошими альтернативами являются повторное прохождение через иглу тонкого калибра (например, 24 калибра) или перемешивание со стеклянными шариками.После обработки ультразвуком образец можно центрифугировать, чтобы осадить нерастворимый клеточный дебрис, а супернатант использовать для вестерн-блоттинга.
Темное или черное пятно	Высокая концентрация вторичного антитела	Черные пятна с белыми «фантомными» полосами или без них чаще всего возникают, когда используется слишком много вторичных антител (например, пероксидазы хрена) с более чувствительными реагентами для обнаружения [например,g., наш реагент SignalFire™ Elite ECL (#12757)]. Это лучше всего решить путем увеличения разведения вторичного антитела, конъюгированного с HRP (например, с 1:2000 до 1:10000).
	Недостаточная стирка	Сокращение времени промывки может привести к тому, что на мембране останется избыток антител, что приведет к появлению темных пятен после хемилюминесцентного воздействия. CST рекомендует выполнять три пятиминутные промывки при комнатной температуре в растворе 1X TBS/0. 1% Tween-20 после инкубации первичных и вторичных антител для достижения оптимальных результатов.
	Неоптимальный выбор буфера	Используемый блокирующий буфер, а также включение или отсутствие дополнительного моющего средства могут повлиять на фон мембраны. Например, обезжиренное сухое молоко состоит из смеси белков, что делает его более эффективным блокирующим агентом в более широком диапазоне молекулярной массы, чем БСА, который состоит только из одного белка.Важно ознакомиться с рекомендуемым протоколом вестерн-иммуноблотинга на веб-странице продукта, чтобы выбрать подходящий буфер для разведения для инкубации первичных антител (например, BSA или обезжиренное сухое молоко). В целом CST рекомендует проводить инкубацию блокирующих и вторичных антител с использованием 1X TBS/0,1% Tween-20/5% обезжиренного сухого молока, чтобы свести к минимуму неспецифический фон.
	Мембранная регидратация	Для оптимальной работы мы рекомендуем регидратировать нитроцеллюлозные мембраны непосредственно в буфере для переноса. Однако при работе с ПВДФ мембрану следует ненадолго регидратировать в метаноле перед перемещением мембраны в буфер для переноса.
Крапчатые или пятнистые пятна	Загрязненные губки для переноса	Старые губки для переноса, которые не были должным образом продезинфицированы, могут содержать бактериальные загрязнения. Чтобы исключить этот фактор, используйте новые губки для переноса.
	Загрязненные буферы	Буферы старше нескольких дней будут содержать повышенное количество бактериальных и грибковых загрязнителей, что может привести к появлению пятен на мембране.Мы рекомендуем всегда использовать свежеприготовленные буферы для достижения оптимальных результатов.

Уменьшение количества неспецифических полос в вестерн-блотах

Образцы блотов с неспецифическими полосами и без них

Неспецифические полосы являются неприятной проблемой при Вестерн-блоттинге. Вот некоторые из различных причин, по которым вы можете получить неспецифические полосы, и советы о том, как сделать так, чтобы эти нежелательные дополнения к вашему вестерн-блоту исчезли. .

Неполная блокировка

Одной из наиболее частых причин появления неспецифических полос является неполная блокировка.Блокирующие буферы используются для предотвращения связывания первичных и вторичных антител с мембраной или с чем-либо, кроме интересующего белка.

Некоторые блокирующие буферы маскируют эпитопы на мишени, что снижает связывание первичного антитела. Это может затруднить обнаружение целевого белка без длительного времени воздействия и, таким образом, снизить отношение сигнал/шум. Кроме того, общие блокирующие буферы, такие как молоко или БСА, не предназначены для предотвращения неспецифического связывания первичных антител с другими белками лизата.Мы рекомендуем переключиться на специально созданный блокирующий буфер, например блокирующий буфер Azure Chemi Blot или блокирующий буфер Azure Fluorescent Blot. Они специально разработаны для усиления специфических взаимодействий антитело-антиген и уменьшения неспецифического связывания.

Низкая специфичность антител

Некоторые первичные антитела обладают низкой специфичностью к интересующему белку. Чтобы решить эту проблему, выполните этап инкубации первичного антитела при 4 ° C, чтобы уменьшить неспецифическое связывание вашего антитела.Также может помочь выполнение дополнительных этапов очистки основного антитела или создание нового антитела. Также может быть полезно использовать широкую расческу, чтобы было место для добавления большего количества белка ¹ .

Другая возможная причина низкой специфичности антител может заключаться в том, что вы используете слишком высокую концентрацию антител, что приводит к большему количеству нецелевых полос. Чтобы решить эту проблему, увеличьте разведение первичного антитела. Вам также может потребоваться увеличить время инкубации, чтобы компенсировать любое снижение сигнала.

Образцы блотов с высоким фоновым сигналом и без него

Высокий фон

Неспецифические полосы — не единственная проблема, связанная с блокировкой. Низкая специфичность антител может привести к высокому фону при флуоресцентном или хемилюминесцентном вестерн-блоттинге. Когда концентрация первичных антител слишком высока, они могут связываться с мембраной, вызывая фоновый сигнал. Рассмотрите возможность разбавления первичных и/или вторичных антител, увеличения времени инкубации и инкубации стадии первичных антител при 4°C.

Неполная блокировка также может привести к высокому фону. Чтобы решить эту проблему, замените молоко искусственным блокирующим буфером. Обязательно ознакомьтесь с блокирующими буферами Azure, включая буферы для хемилюминесцентного и флуоресцентного вестерн-блоттинга. Мы также предлагаем безбелковый блокирующий буфер для антител с высокой перекрестной реактивностью к белковым блокаторам.

Мы надеемся, что эти решения помогут вам в следующий раз, когда вы увидите неспецифические полосы. Внесение изменений в процедуру или переключение блокирующих буферов может помочь вам добиться четких и окончательных результатов!

 

 

Каталожные номера:

¹ Клык, Л.(2012). Очистка антител от вестерн-блоттинга. Биопротокол 2(6): e133

Вопросы?

Вопросы?

Устранение неполадок при количественном вестерн-блоттинге Советы и подсказки

Использовано недостаточно антител

Первичное антитело может иметь низкое сродство к вашей мишени. Увеличьте количество антител или попробуйте другого поставщика.

Увеличить время инкубации первичных антител. Попробуйте оставить на 4–8 часов при комнатной температуре или на ночь при 4 °C.Не используйте повторно антитела.

Увеличьте количество первичных или вторичных антител, оптимизируя эффективность. Попробуйте систему блоттинга MPX, чтобы оптимизировать концентрацию антител. Подробности см. в техническом примечании One-Blot Western Optimization: Using the MPX Blotting System.

Деградированное антитело

Первичные и вторичные антитела могут потерять реактивность из-за неправильного или длительного хранения. Изучите срок годности продукта и рассмотрите возможность замены свежими запасами антител.Избегайте повторного использования антител.

Сигнал смыт слишком большим количеством моющего средства

Снижение Tween 20 в разбавленных антителах. Рекомендуемая концентрация Tween 20 составляет 0,1–0,2%.

Для мембран PVDF рекомендуемая концентрация SDS составляет 0,01–0,02% на этапе вторичной инкубации антител (в дополнение к Tween 20). Некоторые антитела требуют еще более низкой концентрации.

Для нитроцеллюлозных мембран не добавляйте SDS ни на каких этапах.

Неподходящий блокирующий буфер для эксперимента

Ваше основное антитело может работать намного лучше с другим блокирующим буфером. Советы по выбору подходящего блокатора см. в протоколе оптимизации блокатора вестерн-блоттинга для обнаружения в ближнем инфракрасном диапазоне.

Загружено несоответствующее количество антигена

Загрузка слишком малого или слишком большого количества белка снижает чувствительность антител. Загрузка слишком малого количества образца может привести к недостаточному количеству антигена.Загрузка слишком большого количества образца может привести к тому, что ваш целевой антиген будет замаскирован другими белками или препятствиями для антител. Определите оптимальную загрузочную концентрацию, выполнив серийное разведение интересующей вас мишени.

Попробуйте загрузить серию разведений, которая заканчивается исходным количеством антигена, не дающего достаточного сигнала. Это поможет вам определить лучший сигнал с наименьшим количеством антигена. Вы также можете использовать самый узкий размер лунки для концентрации антигена.

Белок плохо переносился

Проверьте выбор буфера для переноса и процедуру блоттинга. Для получения более подробной информации см. техническую записку по методам электропереноса белка.

Перенос в мокром резервуаре является золотым стандартом переноса белка. Подтвердите свой метод переноса, чтобы обеспечить перенос целевого антигена в заданных условиях. Количество метанола в буфере для переноса, время предварительного замачивания геля, выбор мембраны, напряжение и продолжительность переноса могут влиять на то, сколько белка переносится на мембрану.

Предварительно окрашенный маркер молекулярной массы может помочь вам контролировать перенос. Вы также можете использовать REVERT™ Total Protein Stain для окрашивания мембран после переноса для контроля эффективности переноса. Окрасьте гели кумасси синим после переноса, чтобы увидеть, остались ли в геле какие-либо белки.

Белок, потерянный из мембраны во время обнаружения

После завершения переноса высушите мембрану перед блокировкой. Сушка мембраны позволяет белкам прочно связываться с мембраной, предотвращая возможную потерю сигнала.

Для мембран PVDF повторно активируйте мембраны метанолом и промойте водой перед блокировкой.

Белки не удерживаются на мембране во время переноса

SDS в буфере для переноса может мешать связыванию переносимых белков, особенно низкомолекулярных белков. Попробуйте уменьшить или исключить SDS. Примечание: присутствие до 0,05% SDS действительно повышает эффективность переноса некоторых белков.

Полностью высушите мембраны на воздухе в течение 1 часа (или 10 минут при 37 °C) после переноса, чтобы сделать связывание необратимым.

Перенос больших белков (>140 кДа) часто требует более низких концентраций метанола (10%) и, возможно, добавления SDS до 0,05%. Чтобы получить полный перенос более крупных белков, увеличьте время переноса.

Небольшие белки могут проходить через мембрану во время переноса («прорыв»). Чтобы получить хорошее удержание мембраны этих более мелких белков, используйте более высокие концентрации метанола (30–40%) и более низкую передачу напряжения.